气相色谱法测定尿中的2,5-己二酮
作者：叶能权 陈利平 童映芳
单位：510310 广州，广东省职业病防治院
关键词：
气相色谱法测定尿中的2
据资料报道:尿中2,5-己二酮的浓度与空气环境中正己烷的浓度有明显的相关[1]，国外已将尿中的2,5-己二酮作为接触正己烷的生物监测指标[2]。尿中2,5-己二酮的测定方法国内尚未见报道，国外资料介绍用C18柱分离[3]。二氯甲烷萃取的色谱法的缺点是二氯甲烷毒性比较大、操作步骤麻烦，不易推广。我们试用乙醚萃取、气相色谱法测定尿中的2,5-己二酮，对其测定条件进行了研究，现将结果报告如下。
一、材料与方法
1.原理：尿中的2,5-己二酮在酸性条件下水解后，用乙醚萃取、FFAP柱分离，气相色谱氢火焰离子化检测器测定，以保留时间定性，峰面积(或峰高)定量。
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2.仪器：(1)气相色谱仪：氢火焰离子化检测器。(2)具塞比色管：10 ml，5 ml。(3)水浴箱。
3.试剂：乙醚、盐酸(分析纯)，FFAP固定液：Chromosorbw AW DMCS (80～100目)，2,5-己二酮标准贮备液：于10.0 ml容量瓶中，加入5 ml蒸馏水，然后准确加入0.0160 ml 2,5-己二酮(20℃时，1 ml 2,5-己二酮重0.974 g)，用蒸馏水稀释至刻度，此贮备液每ml含2,5-己二酮1.56 mg。临用前准确吸取贮备液0.64 ml到10 ml的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀(此液1 ml含100 μg的2,5-己二酮)，作为应用液。
4.尿样的采集：用干净的玻璃瓶采集班后尿50 ml，测其比重后，加盐酸0.25 ml，尽快送回实验室分析。此尿样于4℃可保存5天，-8℃可保存1个月。
5.分析步骤：(1)色谱条件：色谱柱为长1.6 m、内径4 mm的玻璃柱，内装FFAP∶Chromosorbw AW DMCS=15∶100，柱温165℃，检测室温度230℃，汽化室温度230℃，载气(N2)50 ml/min。(2)样品处理：准确吸取2.0 ml尿样于具塞比色管中，加入2滴盐酸，摇匀，于90～100℃水浴中恒温40分钟，取出放至室温后，加2 ml乙醚萃取，静置分层。若乙醚损失应补加至原体积2 ml。(3)工作曲线的制备：采集未接触正己烷者的尿，用2,5-己二酮贮备液分别配成5.0、10.0、15.0、20.0、30.0 μg/ml的标准系列，然后各取2.0 ml，同样品处理。取各种浓度的萃取液分别进样1 μl，作气相色谱分析。以2,5-己二酮的含量对峰面积作图，绘制工作曲线。(4)样品测定：取已处理的样品乙醚液1 μl进样分析，根据测得的峰面积从工作曲线中查出含量(μg/ml)，按下式[4]计算尿中2,5-己二酮的浓度：
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式中，C：尿中2,5-己二酮的浓度，mg/L；m：由工作曲线上查出的2,5-己二酮的含量，μg/ml；1.020：标准比重。
二、结果与讨论
1.色谱柱的选择：分别用FFAP柱及GDX-102柱对2,5-己二酮进行了试验。结果表明：FFAP柱对尿中2,5-己二酮的分离效果好，所需时间短。
2.方法的检出限及线性范围：于空白尿样中加入2,5-己二酮，分别配成浓度为5.0、10.0、15.0、20.0、30.0μg/ml的系列，同样品处理，按工作曲线的步骤进行测定。实验测得本法的最低检出浓度为0.5μg/ml，线性范围为0.5～30.0μg/ml，直线回归方程Y=-501+567X，相关系数r=0.9987。
3.方法的精密度：取含2,5-己二酮浓度为5.0、15.0、25.0μg/ml的尿样各2 ml，按上述的操作重复测定。结果：相对标准偏差为6.5%、5.4%和4.6%，表明3种浓度的测定结果重现性良好，符合研制生物样品监测检验方法指南的要求。
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4.方法的回收率：在接触正己烷者的尿样中，分别加入不同含量的2,5-己二酮，按样品分析步骤测定，2,5-己二酮在尿中的平均回收率为97.3%～102.5%。
5.尿样的稳定性：取接触正己烷者的尿样200ml，加入2ml盐酸摇匀，于当天测定6次，计算2,5-己二酮的平均含量。然后将含2,5-己二酮的尿样分成两份，分别放入4℃、-8℃冰箱保存。分别于第3、5、7、15、30天测定2,5-己二酮含量，将各自的均值与当天分析的均值(以100计)计算下降率。结果表明：尿样于4℃可稳定3天，在-8℃可稳定30天。
6.实际应用：应用本法测定的未接触正己烷的6名正常人尿样2,5-己二酮浓度均<0.5 mg/L、20名接触正己烷工人班后尿中的2,5-己二酮浓度为1.8～35.4mg/L。
参 考 文 献
[1] 夏元洵主编.化学物质毒性全书.上海：上海科技出版社，1991.343.
, 百拇医药
[2] 线引林主编.生物材料中有毒物质分析方法手册.北京：人民卫生出版社，1994.343.
[3] Periago JF,Cardona A,Marhuenda D.Biological monitoring of occupational exposure to n-hexane by exhaled air analysis and urinalysis.Int Arch Occup Environ Health,1993，65:275-278.
[4] 线引林主编.生物材料中有毒物质分析方法手册.北京：人民卫生出版社，1994.18.
(收稿：1997-11-11 修回：1998-03-24), 百拇医药
单位：510310 广州，广东省职业病防治院
关键词：
气相色谱法测定尿中的2
据资料报道:尿中2,5-己二酮的浓度与空气环境中正己烷的浓度有明显的相关[1]，国外已将尿中的2,5-己二酮作为接触正己烷的生物监测指标[2]。尿中2,5-己二酮的测定方法国内尚未见报道，国外资料介绍用C18柱分离[3]。二氯甲烷萃取的色谱法的缺点是二氯甲烷毒性比较大、操作步骤麻烦，不易推广。我们试用乙醚萃取、气相色谱法测定尿中的2,5-己二酮，对其测定条件进行了研究，现将结果报告如下。
一、材料与方法
1.原理：尿中的2,5-己二酮在酸性条件下水解后，用乙醚萃取、FFAP柱分离，气相色谱氢火焰离子化检测器测定，以保留时间定性，峰面积(或峰高)定量。
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2.仪器：(1)气相色谱仪：氢火焰离子化检测器。(2)具塞比色管：10 ml，5 ml。(3)水浴箱。
3.试剂：乙醚、盐酸(分析纯)，FFAP固定液：Chromosorbw AW DMCS (80～100目)，2,5-己二酮标准贮备液：于10.0 ml容量瓶中，加入5 ml蒸馏水，然后准确加入0.0160 ml 2,5-己二酮(20℃时，1 ml 2,5-己二酮重0.974 g)，用蒸馏水稀释至刻度，此贮备液每ml含2,5-己二酮1.56 mg。临用前准确吸取贮备液0.64 ml到10 ml的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀(此液1 ml含100 μg的2,5-己二酮)，作为应用液。
4.尿样的采集：用干净的玻璃瓶采集班后尿50 ml，测其比重后，加盐酸0.25 ml，尽快送回实验室分析。此尿样于4℃可保存5天，-8℃可保存1个月。
5.分析步骤：(1)色谱条件：色谱柱为长1.6 m、内径4 mm的玻璃柱，内装FFAP∶Chromosorbw AW DMCS=15∶100，柱温165℃，检测室温度230℃，汽化室温度230℃，载气(N2)50 ml/min。(2)样品处理：准确吸取2.0 ml尿样于具塞比色管中，加入2滴盐酸，摇匀，于90～100℃水浴中恒温40分钟，取出放至室温后，加2 ml乙醚萃取，静置分层。若乙醚损失应补加至原体积2 ml。(3)工作曲线的制备：采集未接触正己烷者的尿，用2,5-己二酮贮备液分别配成5.0、10.0、15.0、20.0、30.0 μg/ml的标准系列，然后各取2.0 ml，同样品处理。取各种浓度的萃取液分别进样1 μl，作气相色谱分析。以2,5-己二酮的含量对峰面积作图，绘制工作曲线。(4)样品测定：取已处理的样品乙醚液1 μl进样分析，根据测得的峰面积从工作曲线中查出含量(μg/ml)，按下式[4]计算尿中2,5-己二酮的浓度：
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式中，C：尿中2,5-己二酮的浓度，mg/L；m：由工作曲线上查出的2,5-己二酮的含量，μg/ml；1.020：标准比重。
二、结果与讨论
1.色谱柱的选择：分别用FFAP柱及GDX-102柱对2,5-己二酮进行了试验。结果表明：FFAP柱对尿中2,5-己二酮的分离效果好，所需时间短。
2.方法的检出限及线性范围：于空白尿样中加入2,5-己二酮，分别配成浓度为5.0、10.0、15.0、20.0、30.0μg/ml的系列，同样品处理，按工作曲线的步骤进行测定。实验测得本法的最低检出浓度为0.5μg/ml，线性范围为0.5～30.0μg/ml，直线回归方程Y=-501+567X，相关系数r=0.9987。
3.方法的精密度：取含2,5-己二酮浓度为5.0、15.0、25.0μg/ml的尿样各2 ml，按上述的操作重复测定。结果：相对标准偏差为6.5%、5.4%和4.6%，表明3种浓度的测定结果重现性良好，符合研制生物样品监测检验方法指南的要求。
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4.方法的回收率：在接触正己烷者的尿样中，分别加入不同含量的2,5-己二酮，按样品分析步骤测定，2,5-己二酮在尿中的平均回收率为97.3%～102.5%。
5.尿样的稳定性：取接触正己烷者的尿样200ml，加入2ml盐酸摇匀，于当天测定6次，计算2,5-己二酮的平均含量。然后将含2,5-己二酮的尿样分成两份，分别放入4℃、-8℃冰箱保存。分别于第3、5、7、15、30天测定2,5-己二酮含量，将各自的均值与当天分析的均值(以100计)计算下降率。结果表明：尿样于4℃可稳定3天，在-8℃可稳定30天。
6.实际应用：应用本法测定的未接触正己烷的6名正常人尿样2,5-己二酮浓度均<0.5 mg/L、20名接触正己烷工人班后尿中的2,5-己二酮浓度为1.8～35.4mg/L。
参 考 文 献
[1] 夏元洵主编.化学物质毒性全书.上海：上海科技出版社，1991.343.
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[2] 线引林主编.生物材料中有毒物质分析方法手册.北京：人民卫生出版社，1994.343.
[3] Periago JF,Cardona A,Marhuenda D.Biological monitoring of occupational exposure to n-hexane by exhaled air analysis and urinalysis.Int Arch Occup Environ Health,1993，65:275-278.
[4] 线引林主编.生物材料中有毒物质分析方法手册.北京：人民卫生出版社，1994.18.
(收稿：1997-11-11 修回：1998-03-24), 百拇医药