小牛血清含量对氧化电位酸性水破坏乙型肝炎表面抗原的影响
作者：杨广岚 徐庆华
单位：杨广岚 徐庆华(安徽省卫生防疫站，合肥 230001)
关键词：氧化电位酸性水；HBsAg；有机物影响；小牛血清
中国消毒学杂志980410
提 要 用氧化电位酸性水破坏含小牛血清量≤ 1.0%的悬液中 HBsAg，仅需作用30 s；当小牛血清含量≥ 1.5%时，作用10 min仍未达破坏要求。所用中和剂中小牛血清含量≤ 40%对检测结果无明显影响。
INFLUENCE OF CALF SERUM CONTENT ON DESTRUCTION OF HBsAg BY OXIDATION POTENTIAL ACIDIC WATER
Yang Guanglan Xu Qinghua.
, 百拇医药
〔Anhui Provincial Sanitary and Anti-epidemic Station, Hefei 230001〕
Abstract When oxidation potential acidic water was used for destroying HBsAg in suspension containing ≤1.0% of calf serum, only 30 s was required. When the calf serum content was ≥1.5%, destruction requirement still could not be fulfilled after 10 min contact. The neutralizer containing ≤40% of calf serum had no significant influence on the results.
Key words oxidation potential acidic water HBsAg influence of organic substance calf serum
, 百拇医药
在氧化电位酸性水对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的作用中，比较了HBsAg悬液内小牛血清含量对其抗原性破坏的影响。现将结果报告如下。
1 方法
1.1 中和剂选择试验
试验时,先以0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS, pH 7.2～7.4)将纯化HBsAg(北京生化免疫试剂中心产)稀释至含量为4 mg/ml 悬液，再以含5%小牛血清PBS 稀释成含HBsAg 100 μg/ml的悬液。试验分8组：① 消毒剂+HBsAg；② (消毒剂+HBsAg)+中和剂；③ 中和剂+HBsAg；④ (消毒剂+中和剂)+HBsAg；⑤ 正常HBsAg 对照崐；⑥ 消毒剂+中和剂；⑦ 消毒剂；⑧ 试验用含小牛血清 PBS。试验结果，当第6 、7、8组 S/N 值 < 2.1 ,第 3、4、5组S/N 值相近,第2组S/N值 ≥ 2.1,第1组S/N 值< 2.1 或远小于第2组时, 为所用中和剂及其浓度适宜。
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1.2 破坏HBsAg试验
将浓度为4 mg/ml 的HBsAg 悬液用含不同浓度小牛血清的 0.01 mol/L PBS(pH 7.2～7.4)稀释至HBsAg 浓度为10 μg/ml的悬液。取0.3 ml该悬液加入盛有1.2 ml氧化电位酸性水的试管中，混匀。置22～25℃水浴中, 作用至规定时间。取样,加等量中和剂溶液，混匀。中和作用10 min,用ELISA 法(试剂盒由深圳月亮湾生物工程有限公司产，经测试剂灵敏度为1 ng/ml)检测HBsAg抗原性。阴性对照为消毒剂与中和剂反应的中和产物，阳性对照为中和产物加HBsAg。以试验组OD值(S)与阴性对照OD值(N)比值(S/N)<2.1为HBsAg 抗原性破坏。
2 结果
2.1 中和剂试验结果
将10 ml含0.5%硫代硫酸钠与20%小牛血清的磷酸盐缓冲液与45 μl 1 mol/L氢氧化钠溶液混匀，作为中和剂。试验表明，0.5 ml该中和剂溶液对0.4 ml氧化电位酸性水的中和结果达到规定的要求(表1)。
, 百拇医药
表1 氧化电位酸性水中和剂试验结果 组别
OD值
S/N值
消毒剂+HBsAg
0.10
0.83
(消毒剂+HBsAg)+中和剂
0.56
4.67
中和剂+HBsAg
1.24
10.33
, 百拇医药
(消毒剂+中和剂)+HBsAg
1.29
10.75
含10%小牛血清磷酸盐缓冲液+HBsAg
1.23
10.25
消毒剂+中和剂
0.12
1.00
消毒剂+含10%小牛血清磷酸盐缓冲液
0.11
0.92
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含10%小牛清磷酸盐缓冲液
0.11
0.92
注: 试验温度为22～25℃。氧化电位酸性水(氧化还
原电位≥ 1 050 mV，pH值≤ 2.7)加HBsAg(含
量为100 μg/ml，小牛血清含量为5%)后作用
30 s。加中和剂后作用10 min。结果为3次试验平均值。
2.2 对含不同量小牛血清悬液中HBsAg的破坏作用
当HBsAg 悬液含小牛血清≤1.0% 时，用氧化电位酸性水仅作用30 s即可将其抗原性完全破坏；当悬液中含小牛血清≥1.5% 时，作用10 min仍未将其完全破坏(表2)。
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表2 氧化电位酸性水对含不同量小牛血清HBsAg的破坏效果 HBsAg悬液中小牛血清含量
(%)
作用不同时间(min)的S/N值
阳性对照
S/N值
0.5
1.0
5.0
10.0
0.0
0.45
0.42
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0.41
0.41
11.17
0.5
0.70
0.69
0.68
0.60
11.17
1.0
0.70
0.69
0.69
, http://www.100md.com
0.67
10.75
1.5
2.92
2.80
2.77
2.46
11.17
2.0
4.31
4.23
4.12
4.00
, 百拇医药
11.17
2.5
4.62
4.54
4.53
4.51
10.75
3.0
4.62
4.51
4.54
4.50
10.75
, http://www.100md.com
3.5
4.96
4.68
4.63
4.60
10.42
4.0
4.96
4.70
4.69
4.63
10.75
4.5
, 百拇医药
4.71
4.69
4.69
4.65
10.17
5.0
4.73
4.70
4.70
4.65
10.17
注: 试验温度为22～25℃。氧化电位酸性水氧化还原电位≥ 1 050 mV，pH值≤ 2.7。
, 百拇医药
试验液中HBsAg含量均为10 μg/ml。结果为5次试验平均值。
2.3 中和剂小牛血清含量对检测结果的影响
经比较，用含≤40% 不同浓度小牛血清的中和剂时，检测氧化电位酸性水对1.0%小牛血清悬液中HBsAg 抗原性破坏的结果是一致的(作用30 s均能将HBsAg 抗原性完全破坏)，检测其对5.0% 小牛血清悬液中HBsAg 抗原性破坏结果亦是一致的(作用30 min 均不能将HBsAg 抗原性完全破坏)。
3 讨论
3.1 李新武等报道，随HBsAg 悬液含小牛血清量增加，用ELISA 法检测HBsAg的灵敏度提高〔1〕。国家标准GB 15981-1995方法规定，应以含5.4% 小牛血清的磷酸盐缓冲液稀释纯化抗原。然而，本试验用氧化电位酸性水消毒的HBsAg 悬液中含小牛血清≤1.0% 与≥1.5% 时，却出现了两种截然不同的结果。这可能与氧化电位酸性水杀灭微生物的机理不同于一般化学消毒剂有关。氧化电位酸性水的高氧化还原电位(≥1050 mV)能改变微生物细胞膜电位，致其通透性增强，细胞代谢酶被破坏。小牛血清白蛋白上许多有机基团可使氧化电位酸性水的氧化还原电位下降，下降程度随小牛血清浓度增加而加重。
, 百拇医药
3.2 王太星等报道，在检测含氯消毒剂对HBsAg 抗原性的破坏时，中和剂中小牛血清含量增加，检出HBsAg 抗原性破坏所需作用时间延长〔2〕。本试验表明，中和剂中小牛血清含量与检出结果无关。可能由于本试验中所加小牛血清含量已使氧化电位酸性水的氧化还原电位瞬间改度，所以中和剂小牛血清含量对检测结果影响不大。
参考文献
〔1〕 李新武,袁洽
,孙守宏.在乙型肝炎表面抗原破坏试验中对ELISA法检验结果影响因素的研究.中国消毒学杂志1995；12(2)：89.
〔2〕 王太星, 蒋莉, 刘育京. 乙型肝炎表面抗原破坏试验中对结果影响因素的实验观察. 中国消毒学杂志 1997；14(3)：129.
(1998-03-09收稿 1998-06-26修回), http://www.100md.com
单位：杨广岚 徐庆华(安徽省卫生防疫站，合肥 230001)
关键词：氧化电位酸性水；HBsAg；有机物影响；小牛血清
中国消毒学杂志980410
提 要 用氧化电位酸性水破坏含小牛血清量≤ 1.0%的悬液中 HBsAg，仅需作用30 s；当小牛血清含量≥ 1.5%时，作用10 min仍未达破坏要求。所用中和剂中小牛血清含量≤ 40%对检测结果无明显影响。
INFLUENCE OF CALF SERUM CONTENT ON DESTRUCTION OF HBsAg BY OXIDATION POTENTIAL ACIDIC WATER
Yang Guanglan Xu Qinghua.
, 百拇医药
〔Anhui Provincial Sanitary and Anti-epidemic Station, Hefei 230001〕
Abstract When oxidation potential acidic water was used for destroying HBsAg in suspension containing ≤1.0% of calf serum, only 30 s was required. When the calf serum content was ≥1.5%, destruction requirement still could not be fulfilled after 10 min contact. The neutralizer containing ≤40% of calf serum had no significant influence on the results.
Key words oxidation potential acidic water HBsAg influence of organic substance calf serum
, 百拇医药
在氧化电位酸性水对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的作用中，比较了HBsAg悬液内小牛血清含量对其抗原性破坏的影响。现将结果报告如下。
1 方法
1.1 中和剂选择试验
试验时,先以0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS, pH 7.2～7.4)将纯化HBsAg(北京生化免疫试剂中心产)稀释至含量为4 mg/ml 悬液，再以含5%小牛血清PBS 稀释成含HBsAg 100 μg/ml的悬液。试验分8组：① 消毒剂+HBsAg；② (消毒剂+HBsAg)+中和剂；③ 中和剂+HBsAg；④ (消毒剂+中和剂)+HBsAg；⑤ 正常HBsAg 对照崐；⑥ 消毒剂+中和剂；⑦ 消毒剂；⑧ 试验用含小牛血清 PBS。试验结果，当第6 、7、8组 S/N 值 < 2.1 ,第 3、4、5组S/N 值相近,第2组S/N值 ≥ 2.1,第1组S/N 值< 2.1 或远小于第2组时, 为所用中和剂及其浓度适宜。
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1.2 破坏HBsAg试验
将浓度为4 mg/ml 的HBsAg 悬液用含不同浓度小牛血清的 0.01 mol/L PBS(pH 7.2～7.4)稀释至HBsAg 浓度为10 μg/ml的悬液。取0.3 ml该悬液加入盛有1.2 ml氧化电位酸性水的试管中，混匀。置22～25℃水浴中, 作用至规定时间。取样,加等量中和剂溶液，混匀。中和作用10 min,用ELISA 法(试剂盒由深圳月亮湾生物工程有限公司产，经测试剂灵敏度为1 ng/ml)检测HBsAg抗原性。阴性对照为消毒剂与中和剂反应的中和产物，阳性对照为中和产物加HBsAg。以试验组OD值(S)与阴性对照OD值(N)比值(S/N)<2.1为HBsAg 抗原性破坏。
2 结果
2.1 中和剂试验结果
将10 ml含0.5%硫代硫酸钠与20%小牛血清的磷酸盐缓冲液与45 μl 1 mol/L氢氧化钠溶液混匀，作为中和剂。试验表明，0.5 ml该中和剂溶液对0.4 ml氧化电位酸性水的中和结果达到规定的要求(表1)。
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表1 氧化电位酸性水中和剂试验结果 组别
OD值
S/N值
消毒剂+HBsAg
0.10
0.83
(消毒剂+HBsAg)+中和剂
0.56
4.67
中和剂+HBsAg
1.24
10.33
, 百拇医药
(消毒剂+中和剂)+HBsAg
1.29
10.75
含10%小牛血清磷酸盐缓冲液+HBsAg
1.23
10.25
消毒剂+中和剂
0.12
1.00
消毒剂+含10%小牛血清磷酸盐缓冲液
0.11
0.92
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含10%小牛清磷酸盐缓冲液
0.11
0.92
注: 试验温度为22～25℃。氧化电位酸性水(氧化还
原电位≥ 1 050 mV，pH值≤ 2.7)加HBsAg(含
量为100 μg/ml，小牛血清含量为5%)后作用
30 s。加中和剂后作用10 min。结果为3次试验平均值。
2.2 对含不同量小牛血清悬液中HBsAg的破坏作用
当HBsAg 悬液含小牛血清≤1.0% 时，用氧化电位酸性水仅作用30 s即可将其抗原性完全破坏；当悬液中含小牛血清≥1.5% 时，作用10 min仍未将其完全破坏(表2)。
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表2 氧化电位酸性水对含不同量小牛血清HBsAg的破坏效果 HBsAg悬液中小牛血清含量
(%)
作用不同时间(min)的S/N值
阳性对照
S/N值
0.5
1.0
5.0
10.0
0.0
0.45
0.42
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0.41
0.41
11.17
0.5
0.70
0.69
0.68
0.60
11.17
1.0
0.70
0.69
0.69
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0.67
10.75
1.5
2.92
2.80
2.77
2.46
11.17
2.0
4.31
4.23
4.12
4.00
, 百拇医药
11.17
2.5
4.62
4.54
4.53
4.51
10.75
3.0
4.62
4.51
4.54
4.50
10.75
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3.5
4.96
4.68
4.63
4.60
10.42
4.0
4.96
4.70
4.69
4.63
10.75
4.5
, 百拇医药
4.71
4.69
4.69
4.65
10.17
5.0
4.73
4.70
4.70
4.65
10.17
注: 试验温度为22～25℃。氧化电位酸性水氧化还原电位≥ 1 050 mV，pH值≤ 2.7。
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试验液中HBsAg含量均为10 μg/ml。结果为5次试验平均值。
2.3 中和剂小牛血清含量对检测结果的影响
经比较，用含≤40% 不同浓度小牛血清的中和剂时，检测氧化电位酸性水对1.0%小牛血清悬液中HBsAg 抗原性破坏的结果是一致的(作用30 s均能将HBsAg 抗原性完全破坏)，检测其对5.0% 小牛血清悬液中HBsAg 抗原性破坏结果亦是一致的(作用30 min 均不能将HBsAg 抗原性完全破坏)。
3 讨论
3.1 李新武等报道，随HBsAg 悬液含小牛血清量增加，用ELISA 法检测HBsAg的灵敏度提高〔1〕。国家标准GB 15981-1995方法规定，应以含5.4% 小牛血清的磷酸盐缓冲液稀释纯化抗原。然而，本试验用氧化电位酸性水消毒的HBsAg 悬液中含小牛血清≤1.0% 与≥1.5% 时，却出现了两种截然不同的结果。这可能与氧化电位酸性水杀灭微生物的机理不同于一般化学消毒剂有关。氧化电位酸性水的高氧化还原电位(≥1050 mV)能改变微生物细胞膜电位，致其通透性增强，细胞代谢酶被破坏。小牛血清白蛋白上许多有机基团可使氧化电位酸性水的氧化还原电位下降，下降程度随小牛血清浓度增加而加重。
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3.2 王太星等报道，在检测含氯消毒剂对HBsAg 抗原性的破坏时，中和剂中小牛血清含量增加，检出HBsAg 抗原性破坏所需作用时间延长〔2〕。本试验表明，中和剂中小牛血清含量与检出结果无关。可能由于本试验中所加小牛血清含量已使氧化电位酸性水的氧化还原电位瞬间改度，所以中和剂小牛血清含量对检测结果影响不大。
参考文献
〔1〕 李新武,袁洽
,孙守宏.在乙型肝炎表面抗原破坏试验中对ELISA法检验结果影响因素的研究.中国消毒学杂志1995；12(2)：89.〔2〕 王太星, 蒋莉, 刘育京. 乙型肝炎表面抗原破坏试验中对结果影响因素的实验观察. 中国消毒学杂志 1997；14(3)：129.
(1998-03-09收稿 1998-06-26修回), http://www.100md.com