由复合季铵盐溶液中分离出的洋葱假单胞菌抗力的研究
作者：魏兰芬 林军明 申屠金胜*
单位：魏兰芬 林军明 申屠金胜 (浙江省卫生防疫站，杭州 310009)
关键词：季铵盐；洋葱假单胞菌；细菌抗性
中国消毒学杂志980409
提 要 试验表明，由污染的复合季铵盐消毒液中分离出来的洋葱假单胞菌，原消毒剂对其最低抑菌浓度(>8 000 mg/L)，高于对枯草杆菌黑色变种芽胞者(800 mg/L季铵盐)。在杀菌试验中，该菌的抗力亦远高于大肠杆菌与金黄色葡萄球菌。
STUDY ON RESISTANCE OF Pseudomonas cepacia ISOLATED FROM COMPOUND
QUATERNARY AMMONIUM SOLUTION
, 百拇医药
Wei Lanfen et al.
〔 Zhejiang Provincial Sanitary and Anti-epidemic Station, Hangzhou 310009〕
Abstract It was indicated in experiment that the resistance to compound quaternary ammonium of Pseudomonas cepacia isolated from this disinfectant solution was far higher than that of Escherichai coli and Staphylococcus aureus in bactericidal experiment, while the minimal inhibitory concentration of the original disinfectant for the P. cepacia isolated (>8000 mg/L) was higher than that for Bacillus subtilis var. niger spores (800 mg/L).
, 百拇医药
Key words quaternary ammonium Pseudomonas cepacia resistance of bacteria
曾在尚未使用的复合季铵盐消毒剂(含双癸基氯化铵与正烷基二甲基苄基氯化铵，季铵盐含量为1.6%)溶液中检出一株洋葱假单胞菌(菌数为1.21×105 cfu/ml)。为了解该菌抗力，特以之与枯草杆菌黑色变种芽胞、大肠杆菌与金黄色葡萄球菌进行了对比。现将结果报告如下。
1 方法
1.1 抑菌对比试验
试验菌株为枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)芽胞与洋葱假单胞菌(分离自上述消毒剂中)。试验时，将曾被洋葱假单胞菌污染的复合季铵盐溶液，经过滤除菌后以无菌蒸馏水稀释为所需浓度，加至营养肉汤中。加菌悬液0.1 ml至不同药物浓度的10 ml营养肉汤中，混匀(各管菌含量为104 cfu/ml)。于37℃培养24 h，观察结果。同时，以菌悬液与单倍营养肉汤的混合液为阳性对照，以单倍营养肉汤及双倍营养肉汤分别与各浓度药液的混合物为阴性对照。当阳性对照管均匀浑浊，阴性对照管透明澄清时，以试验组无菌生长的最低药物浓度为最低抑菌浓度MIC值〔1〕。
, http://www.100md.com
1.2 杀菌对比试验
试验菌为洋葱假单胞菌、大肠杆菌(ATCC 25922)与金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)。试验时，将0.5 ml菌液与4.5 ml消毒液(对照为无菌蒸馏水)混匀。作用至预定时间，取0.5 ml菌药混合液，加于装有4.5 ml中和剂(0.3%卵磷脂与3%吐温80的磷酸盐缓冲液)的试管中，混匀。中和作用10 min，用琼脂倾注法作活菌计数。于37℃培养48 h，计数菌落数，计算杀灭率。
2 结果
2.1 抑菌效果
经3次试验结果表明，过滤除菌后的复合季铵盐消毒液，对枯草杆菌黑色变种芽胞MIC为800 mg/L季铵盐，对分离自该消毒液的洋葱假单胞菌MIC>8 000 mg/L季铵盐。
2.2 杀菌效果
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试验表明，应用过滤除菌后的复合季铵盐消毒液，以其含16 mg/L季铵盐的稀释液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作用2 min，杀灭率分别为99.98%与99.99%，作用5 min的杀灭率均为100%，以其含14 400 mg/L季铵盐的原液对洋葱假单胞菌作用120 min，杀灭率仍<10%，消毒组与对照细菌数差在操作误差范围内(附表)。
附表 污染的复合季铵盐消毒液过滤除菌后的杀菌效果 细菌
对照组菌数
(cfu/ml)
浓度
(mg/l)
作用不同时间(min)的杀灭率(%)
2
, http://www.100md.com
5
10
20
120
大肠杆菌
1 580 000
32
100.00
100.00
100.00
100.00
-
16
, 百拇医药
99.98
100.00
100.00
100.00
-
8
99.96
99.98
99.99
99.99
-
金黄色葡萄球菌
32
, 百拇医药
100.00
100.00
100.00
100.00
-
16
99.99
100.00
100.00
100.00
-
8
99.60
, http://www.100md.com
99.90
99.96
99.98
-
洋葱假单胞菌
14 400
<10
<10
<10
<10
<10
8 000
<10
, http://www.100md.com
<10
<10
<10
<10
注： 试验温度为19～21℃。结果为5次试验平均值。
3 结语
结果表明，该复合季铵盐对细菌芽胞的抑制作用强于长期存活于该消毒液中的洋葱假单胞菌者。这与有关报道〔2〕相悖。其原因可能系本试验所用洋葱假单胞菌株分离自消毒液，对该液有较强抗性，此尚待进一步研究。试验指出，污染有洋葱假单胞菌的复合季铵盐消毒液，经过滤除菌后，对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌仍有较强的杀灭作用，但对由其中分离出来的洋葱假单胞菌杀灭作用较差。
* 浙江医院细菌室
参考文献
〔1〕 邬伯安，冯智鹤，张敏，等. 碘络醚与磺胺嘧啶银最小抑菌浓度比较. 中国消毒学杂志 1997; 14 (3) : 170.
〔2〕 顾德鸿，张慧贤编著. 医用消毒学. 北京： 北京科学技术出版社， 1992 : 272～278.
(1997-09-10收稿 1998-01-21修回), http://www.100md.com(魏兰芬 林军明 申屠金胜*)
单位：魏兰芬 林军明 申屠金胜 (浙江省卫生防疫站，杭州 310009)
关键词：季铵盐；洋葱假单胞菌；细菌抗性
中国消毒学杂志980409
提 要 试验表明，由污染的复合季铵盐消毒液中分离出来的洋葱假单胞菌，原消毒剂对其最低抑菌浓度(>8 000 mg/L)，高于对枯草杆菌黑色变种芽胞者(800 mg/L季铵盐)。在杀菌试验中，该菌的抗力亦远高于大肠杆菌与金黄色葡萄球菌。
STUDY ON RESISTANCE OF Pseudomonas cepacia ISOLATED FROM COMPOUND
QUATERNARY AMMONIUM SOLUTION
, 百拇医药
Wei Lanfen et al.
〔 Zhejiang Provincial Sanitary and Anti-epidemic Station, Hangzhou 310009〕
Abstract It was indicated in experiment that the resistance to compound quaternary ammonium of Pseudomonas cepacia isolated from this disinfectant solution was far higher than that of Escherichai coli and Staphylococcus aureus in bactericidal experiment, while the minimal inhibitory concentration of the original disinfectant for the P. cepacia isolated (>8000 mg/L) was higher than that for Bacillus subtilis var. niger spores (800 mg/L).
, 百拇医药
Key words quaternary ammonium Pseudomonas cepacia resistance of bacteria
曾在尚未使用的复合季铵盐消毒剂(含双癸基氯化铵与正烷基二甲基苄基氯化铵，季铵盐含量为1.6%)溶液中检出一株洋葱假单胞菌(菌数为1.21×105 cfu/ml)。为了解该菌抗力，特以之与枯草杆菌黑色变种芽胞、大肠杆菌与金黄色葡萄球菌进行了对比。现将结果报告如下。
1 方法
1.1 抑菌对比试验
试验菌株为枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)芽胞与洋葱假单胞菌(分离自上述消毒剂中)。试验时，将曾被洋葱假单胞菌污染的复合季铵盐溶液，经过滤除菌后以无菌蒸馏水稀释为所需浓度，加至营养肉汤中。加菌悬液0.1 ml至不同药物浓度的10 ml营养肉汤中，混匀(各管菌含量为104 cfu/ml)。于37℃培养24 h，观察结果。同时，以菌悬液与单倍营养肉汤的混合液为阳性对照，以单倍营养肉汤及双倍营养肉汤分别与各浓度药液的混合物为阴性对照。当阳性对照管均匀浑浊，阴性对照管透明澄清时，以试验组无菌生长的最低药物浓度为最低抑菌浓度MIC值〔1〕。
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1.2 杀菌对比试验
试验菌为洋葱假单胞菌、大肠杆菌(ATCC 25922)与金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)。试验时，将0.5 ml菌液与4.5 ml消毒液(对照为无菌蒸馏水)混匀。作用至预定时间，取0.5 ml菌药混合液，加于装有4.5 ml中和剂(0.3%卵磷脂与3%吐温80的磷酸盐缓冲液)的试管中，混匀。中和作用10 min，用琼脂倾注法作活菌计数。于37℃培养48 h，计数菌落数，计算杀灭率。
2 结果
2.1 抑菌效果
经3次试验结果表明，过滤除菌后的复合季铵盐消毒液，对枯草杆菌黑色变种芽胞MIC为800 mg/L季铵盐，对分离自该消毒液的洋葱假单胞菌MIC>8 000 mg/L季铵盐。
2.2 杀菌效果
, http://www.100md.com
试验表明，应用过滤除菌后的复合季铵盐消毒液，以其含16 mg/L季铵盐的稀释液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌作用2 min，杀灭率分别为99.98%与99.99%，作用5 min的杀灭率均为100%，以其含14 400 mg/L季铵盐的原液对洋葱假单胞菌作用120 min，杀灭率仍<10%，消毒组与对照细菌数差在操作误差范围内(附表)。
附表 污染的复合季铵盐消毒液过滤除菌后的杀菌效果 细菌
对照组菌数
(cfu/ml)
浓度
(mg/l)
作用不同时间(min)的杀灭率(%)
2
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5
10
20
120
大肠杆菌
1 580 000
32
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-
16
, 百拇医药
99.98
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金黄色葡萄球菌
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100.00
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-
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洋葱假单胞菌
14 400
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8 000
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注： 试验温度为19～21℃。结果为5次试验平均值。
3 结语
结果表明，该复合季铵盐对细菌芽胞的抑制作用强于长期存活于该消毒液中的洋葱假单胞菌者。这与有关报道〔2〕相悖。其原因可能系本试验所用洋葱假单胞菌株分离自消毒液，对该液有较强抗性，此尚待进一步研究。试验指出，污染有洋葱假单胞菌的复合季铵盐消毒液，经过滤除菌后，对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌仍有较强的杀灭作用，但对由其中分离出来的洋葱假单胞菌杀灭作用较差。
* 浙江医院细菌室
参考文献
〔1〕 邬伯安，冯智鹤，张敏，等. 碘络醚与磺胺嘧啶银最小抑菌浓度比较. 中国消毒学杂志 1997; 14 (3) : 170.
〔2〕 顾德鸿，张慧贤编著. 医用消毒学. 北京： 北京科学技术出版社， 1992 : 272～278.
(1997-09-10收稿 1998-01-21修回), http://www.100md.com(魏兰芬 林军明 申屠金胜*)