保健食品中人参皂甙的测定方法
作者：杨祖英 马 兰 苏 菊
单位：杨祖英 马 兰 卫生部食品卫生监督检验所 (100021)；苏 菊 黑龙江省卫生防疫站(150036)
关键词：
中国食品卫生杂志/990105 人参系五加科植物人参Panax ginseng C A Meyer的根。含有多种人参皂甙(ginsenoside)，系三萜皂甙。多数为达玛烷型皂甙，如人参皂甙Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd等；少数为齐墩果酸型(C型)皂甙，如人参皂甙Ro。由于甙元不同，达玛烷型皂甙又分为20S-原人参二醇类皂甙(A型)和20S-原人参三醇类皂甙(B型)。其中A型和B型皂甙酸水解后，分别得到人参二醇(Panaxadial)和人参三醇(Panaxatriol)。
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除人参外，五加科的三七、刺人参、刺五加和葫芦科的绞股蓝中亦含有人参皂甙。
人参作为滋补珍品，已有二千多年的历史。它有“大补元气，安神益智”之功效。目前含有人参的保健食品很多，为鉴别其质量和真伪，人参皂甙的测定非常重要。目前国内外测定人参皂甙的方法有薄层色谱法、比色法、高效液相色谱法等。本文介绍比色法。
1 材料与方法
1.1 试剂 Amberlite-XAD-2大孔树脂，美国Sigma化学公司。正丁醇，分析纯。乙醇，分析纯。中性氧化铝，层析用，100～200目。人参二醇，购自中国药品生物制品检定所。香草醛溶液，称取5 g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100 mL。高氯酸，分析纯。冰乙酸，分析纯。人参二醇标准溶液，精确称取人参二醇标准品0.010 g，用甲醇溶解并定容至10.0 mL，即每毫升含人参二醇1.0 mg。
, http://www.100md.com 1.2 仪器 比色计，UV-201型，日本岛津公司生产。层析管，10 mL注射器。
1.3 实验步骤
试样处理 固体试样，称取1.0 g左右的试样(根据试样含人参量多少而定)，置于100 mL容量瓶中，加少量水，超声30 min，再用水定容至100 mL，摇匀，放置15 min，吸取上清液1.0 mL进行柱层析。
液体试样 含乙醇的补酒类保健食品，吸取1.0 mL试样放水浴挥干，用水溶解残渣，用此液进行柱层析。
非乙醇类的液体试样 吸取1.0 mL试样(假如浓度高或颜色深，需稀释一定体积后再吸取1.0 mL)进行柱层析。
柱层析 用10 mL注射器作层析管，内装1 g Amberlite-XAD-2大孔树脂，上层加1 cm高的中性氧化铝。先用35 mL 85%乙醇洗柱，再用35 mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0 mL已处理好的试样溶液，先用35 mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，再用35 mL 85%乙醇洗脱人参皂甙，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴挥干。以此作比色用。
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显色 在上述已挥干的蒸发皿中加入0.2 mL 5%香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，再加0.8 mL高氯酸，混匀后移入5 mL带塞刻度离心管中，50℃～60℃水浴10 min，取出冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0 mL，摇匀后，以1 cm比色管于560 nm波长处与标准管一起进行比色测定。
校正曲线 吸取人参二醇标准溶液(1 mg/mL)0，20，40，60，80，100 μL(相当于人参二醇0，20，40，60，80，100 μg)分别放入10 mL带塞离心管中，放在水浴上挥干(低于60℃)，或热风吹干(匆使过热)，精确加入0.2 mL 5%香草醛冰乙酸溶液与试样同样显色比色。以人参二醇量与吸光值画校正曲线，进行回归处理。计算试样中人参皂甙量。
计算
式中：x —试样中人参总皂甙量，g/100g；A—从标准曲线得到的被测液中人参二醇量，μg；V—试样稀释体积，mL；W—试样质量，g；2.5—Rb组皂甙平均分子量与人参二醇分子量之比(为常数)。
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2 结果
2.1 检测灵敏度与线性关系 本法最低检出限度为10 mg/100g试样人参皂甙。在人参二醇20～100 μg之间成线性关系，相关系数为0.999。回归方程为y=120.03x+3.61从回归方程看，线性关系好(r=0.999)。
2.2 方法的准确度 为观察方法的准确度与精密度，我们从商店买一些人参，研细后，加入一定量的辅料，混匀，再按方法操作，测得结果如下，见表1。
表1 方法的准确度 检 测 号
1
2
3
4
5
, 百拇医药
6
人参皂甙g/100 g
0.58
0.59
0.55
0.60
0.60
0.61
=0.59 s=0.021 RSD=±3.6%
3 讨论
3.1 洗脱条件的选择 以100 μg人参二醇为试样，依法操作，制备4个层析柱，分析以70%、80%、85%、95%乙醇作为柱层析的洗脱剂，以洗脱人参皂甙，收集35 mL洗脱液，测其人参二醇的回收率。见表2。
, 百拇医药
表2 乙醇浓度对人参皂甙洗脱的影响 乙 醇 %
70
80
85
95
回收率 %
75.9
88.6
96.5
98.0
3.2 人参皂甙的流出曲线 以100 μg人参二醇为试样，依法操作，连续收集10 mL 4管，然后测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，以洗脱液量为横坐标作图，可以看出收集40 mL洗脱液已能满足分析要求。
图 人参皂甙的流出曲线
3.3 层析柱的处理 由于Amberlite-XAD-2非离子型大孔树脂中，包含一些有机杂质，如果不处理，会对结果产生影响，所以在方法中，大孔树脂先用乙醇浸泡一夜，弃去一些混浊液，然后烘干。装柱后，先用85%乙醇、水淋洗活化，同时也洗去一些附在树脂上的杂质。加入试样后，先用水洗去糖分等水溶性杂质，然后才用85%乙醇洗脱人参皂甙。, 百拇医药
单位：杨祖英 马 兰 卫生部食品卫生监督检验所 (100021)；苏 菊 黑龙江省卫生防疫站(150036)
关键词：
中国食品卫生杂志/990105 人参系五加科植物人参Panax ginseng C A Meyer的根。含有多种人参皂甙(ginsenoside)，系三萜皂甙。多数为达玛烷型皂甙，如人参皂甙Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd等；少数为齐墩果酸型(C型)皂甙，如人参皂甙Ro。由于甙元不同，达玛烷型皂甙又分为20S-原人参二醇类皂甙(A型)和20S-原人参三醇类皂甙(B型)。其中A型和B型皂甙酸水解后，分别得到人参二醇(Panaxadial)和人参三醇(Panaxatriol)。
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除人参外，五加科的三七、刺人参、刺五加和葫芦科的绞股蓝中亦含有人参皂甙。
人参作为滋补珍品，已有二千多年的历史。它有“大补元气，安神益智”之功效。目前含有人参的保健食品很多，为鉴别其质量和真伪，人参皂甙的测定非常重要。目前国内外测定人参皂甙的方法有薄层色谱法、比色法、高效液相色谱法等。本文介绍比色法。
1 材料与方法
1.1 试剂 Amberlite-XAD-2大孔树脂，美国Sigma化学公司。正丁醇，分析纯。乙醇，分析纯。中性氧化铝，层析用，100～200目。人参二醇，购自中国药品生物制品检定所。香草醛溶液，称取5 g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100 mL。高氯酸，分析纯。冰乙酸，分析纯。人参二醇标准溶液，精确称取人参二醇标准品0.010 g，用甲醇溶解并定容至10.0 mL，即每毫升含人参二醇1.0 mg。
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1.3 实验步骤
试样处理 固体试样，称取1.0 g左右的试样(根据试样含人参量多少而定)，置于100 mL容量瓶中，加少量水，超声30 min，再用水定容至100 mL，摇匀，放置15 min，吸取上清液1.0 mL进行柱层析。
液体试样 含乙醇的补酒类保健食品，吸取1.0 mL试样放水浴挥干，用水溶解残渣，用此液进行柱层析。
非乙醇类的液体试样 吸取1.0 mL试样(假如浓度高或颜色深，需稀释一定体积后再吸取1.0 mL)进行柱层析。
柱层析 用10 mL注射器作层析管，内装1 g Amberlite-XAD-2大孔树脂，上层加1 cm高的中性氧化铝。先用35 mL 85%乙醇洗柱，再用35 mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0 mL已处理好的试样溶液，先用35 mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，再用35 mL 85%乙醇洗脱人参皂甙，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴挥干。以此作比色用。
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显色 在上述已挥干的蒸发皿中加入0.2 mL 5%香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，再加0.8 mL高氯酸，混匀后移入5 mL带塞刻度离心管中，50℃～60℃水浴10 min，取出冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0 mL，摇匀后，以1 cm比色管于560 nm波长处与标准管一起进行比色测定。
校正曲线 吸取人参二醇标准溶液(1 mg/mL)0，20，40，60，80，100 μL(相当于人参二醇0，20，40，60，80，100 μg)分别放入10 mL带塞离心管中，放在水浴上挥干(低于60℃)，或热风吹干(匆使过热)，精确加入0.2 mL 5%香草醛冰乙酸溶液与试样同样显色比色。以人参二醇量与吸光值画校正曲线，进行回归处理。计算试样中人参皂甙量。
计算
式中：x —试样中人参总皂甙量，g/100g；A—从标准曲线得到的被测液中人参二醇量，μg；V—试样稀释体积，mL；W—试样质量，g；2.5—Rb组皂甙平均分子量与人参二醇分子量之比(为常数)。, http://www.100md.com
2 结果
2.1 检测灵敏度与线性关系 本法最低检出限度为10 mg/100g试样人参皂甙。在人参二醇20～100 μg之间成线性关系，相关系数为0.999。回归方程为y=120.03x+3.61从回归方程看，线性关系好(r=0.999)。
2.2 方法的准确度 为观察方法的准确度与精密度，我们从商店买一些人参，研细后，加入一定量的辅料，混匀，再按方法操作，测得结果如下，见表1。
表1 方法的准确度 检 测 号
1
2
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5
, 百拇医药
6
人参皂甙g/100 g
0.58
0.59
0.55
0.60
0.60
0.61
=0.59 s=0.021 RSD=±3.6%3 讨论
3.1 洗脱条件的选择 以100 μg人参二醇为试样，依法操作，制备4个层析柱，分析以70%、80%、85%、95%乙醇作为柱层析的洗脱剂，以洗脱人参皂甙，收集35 mL洗脱液，测其人参二醇的回收率。见表2。
, 百拇医药
表2 乙醇浓度对人参皂甙洗脱的影响 乙 醇 %
70
80
85
95
回收率 %
75.9
88.6
96.5
98.0
3.2 人参皂甙的流出曲线 以100 μg人参二醇为试样，依法操作，连续收集10 mL 4管，然后测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，以洗脱液量为横坐标作图，可以看出收集40 mL洗脱液已能满足分析要求。
图 人参皂甙的流出曲线
3.3 层析柱的处理 由于Amberlite-XAD-2非离子型大孔树脂中，包含一些有机杂质，如果不处理，会对结果产生影响，所以在方法中，大孔树脂先用乙醇浸泡一夜，弃去一些混浊液，然后烘干。装柱后，先用85%乙醇、水淋洗活化，同时也洗去一些附在树脂上的杂质。加入试样后，先用水洗去糖分等水溶性杂质，然后才用85%乙醇洗脱人参皂甙。, 百拇医药