HBsAg和抗-HBs阳性的HBV感染者血清跟踪调查
作者：宁德刚 刘海燕 雷时美 覃巍巍
单位：宁德刚 刘海燕 雷时美 覃巍巍(广西南宁市卫生防疫站 530011)
关键词：
广西预防医学990206
HBsAg常作为HBV感染的标志，而抗-HBs常被视为机体对HBV感染具有保护力。但有时出现HBV感染的临床表现和血清标志不相符的现象。近年来应用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序研究发现这些特殊血清学类型均与HBV基因变异有关。但对人体内HBsAg与抗-HBs共存的动态变化的报道不多。现将1996年3月～1997年12月对17例HBsAg和抗-HBs双阳性者的血清学跟踪及相关因素的调查结果报告如下。
1 材料和方法
1.1 调查对象 以1996年3月～1996年6月期间首次发现HBsAg和抗-HBs同时阳性的17名从业人员和患者为调查对象。自采集首份血后每间隔两个月采血一份，每份血清同时对HBV标志物、ALT及HBV-DNA检测。17名调查对象年龄为17～48岁，10名男性，7名女性，7人有HBV疫苗接种史，10人有HBV感染史。
, 百拇医药
1.2 HBV标志物检测 用ELISA法检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc，血清检测所用试剂均购自上海科华生物工程公司，严格按试剂说明书操作，以EL-311型酶标仪(美国产)于波长450nm测定OD值，HBsAg、抗-HBs、HBeAg结果根据样品OD值/阴性对照平均OD值≥2.1为阳性，抗-HBe及抗-HBc结果根据样品OD值<0.105为阳性。
1.3 ALT测定 用改良赖氏法测定血清中ALT，试剂购自上海科华生物工程公司，依试剂说明书操作，在721型分光度计(为上海第三仪器厂生产)上以波长500nm比色，ALT>40u为异常。
1.4 HBV-DNA检测 PCR引物由中科院上海细胞生物所合成。引物序列为5’-TCGTGTTACAGGCGGGGT-3'(197-213nt)和5’-CGAACCACTGAACAAATGGC-3’(687-706nt)，它们是HBV adr adw ayw3个亚型基因组S区共有的保守序列。参照文献[1]，提取血清中HBV-DNA，取4μl作为扩增模板，加Taq聚合酶3u，10×缓冲液10μl、dNTP混合物1μl(25μmol/μl)。上述试剂均购自美国Promega公司，引物各1μl(5000 pmol/100μl)加双蒸水至终反应体积50μl，于ETS-960型扩增仪(澳大利亚产)扩增，94℃变性5分钟，后按94℃50秒、45℃40秒、70℃50秒30个循环，最后于70℃5分钟，扩增产物于2.0%琼脂糖凝胶电泳，260nm紫外灯观察拍照。阳性标本可见约510bp扩增片段。
, 百拇医药
2 结果与讨论
2.1 HBsAg、抗-HBs及ALT变化 17例调查对象中，8/17例(47.1%)首份血清及跟踪过程中的每份血清HBsAg、抗-HBs均为阳性，其中2例ALT呈间隙性增高，其余6例在跟踪过程中未见异常。5/17例(29.4%)首份血清HBsAg和抗-HBs检测为阳性，跟踪过程各份血清HBsAg检测为阳性而抗-HBs为阴性，抗HBs呈—过性出现，未发现ALT异常。4/17例(23.5%)首份血清HBsAg和抗HBs检测均为阳性，跟踪过程中各份血清抗-HBs检测为阳性，而HBsAg为阴性，HBsAg呈一过性出现，其中2例ALT有间隙性增高，另2例未见异常。
2.2 HBV-DNA检测结果 17例调查对象首份血清HBV-DNA为阳性，但在随后的跟踪调查过程中，4例HBsAg一过性者有3例HBV-DNA阴性，1例持续阳性；此例属于HBsAg阴性的乙肝病毒慢性感染[1]。5例抗HBs一过性者和8例HBsAg、抗-HBs持续双阳性者HBV-DNA均为阳性。
, 百拇医药
2.3 HBV感染史 疫苗接种史与HBV标志物、HBV-DNA及ALT变化的关系。8例HBsAg抗-HBs持续双阳性者中均为少儿期有HBV感染史，2例有HBV疫苗接种但免疫失败；4例HBsAg一过性调查者少儿期均无HBV感染史，3例有疫苗接种史，5例抗-HBs一过性者，均有HBV感染史，2例有疫苗接种史。
普遍认为HBsAg和抗-HBs同时存在的原因是多方面的[2～3]，而病毒本身，尤其变异株是最重要的原因之一。并且HBsAg和抗-HBs不同血清学转归和不同的临床表现，是否与HBV基因不同变异株有关，尚需进一步研究。但一般认为这种现象属于HBV急性感染所致。
参考文献
1 骆抗先，周 荣，梁炽森，等.PCR鉴定HBsAg阴性慢性活动性肝炎中的乙型肝炎病毒感染.中华内科杂志，1991，30(1)：21
2 房德兴，甘人宝，张 倩，等.乙型肝炎表面抗原aa126ILe-Sev变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定.病毒学报，1998，14(1)：1
3 何建文，吕 晴，朱启榕，等.乙型肝炎疫苗免疫失败婴儿病毒表面抗原a决定簇基因变异的研究.中华实验和临床病毒学杂志，1996，10(4)：308
1998-08-24收稿。1998-11-10修回。, 百拇医药
单位：宁德刚 刘海燕 雷时美 覃巍巍(广西南宁市卫生防疫站 530011)
关键词：
广西预防医学990206
HBsAg常作为HBV感染的标志，而抗-HBs常被视为机体对HBV感染具有保护力。但有时出现HBV感染的临床表现和血清标志不相符的现象。近年来应用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序研究发现这些特殊血清学类型均与HBV基因变异有关。但对人体内HBsAg与抗-HBs共存的动态变化的报道不多。现将1996年3月～1997年12月对17例HBsAg和抗-HBs双阳性者的血清学跟踪及相关因素的调查结果报告如下。
1 材料和方法
1.1 调查对象 以1996年3月～1996年6月期间首次发现HBsAg和抗-HBs同时阳性的17名从业人员和患者为调查对象。自采集首份血后每间隔两个月采血一份，每份血清同时对HBV标志物、ALT及HBV-DNA检测。17名调查对象年龄为17～48岁，10名男性，7名女性，7人有HBV疫苗接种史，10人有HBV感染史。
, 百拇医药
1.2 HBV标志物检测 用ELISA法检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc，血清检测所用试剂均购自上海科华生物工程公司，严格按试剂说明书操作，以EL-311型酶标仪(美国产)于波长450nm测定OD值，HBsAg、抗-HBs、HBeAg结果根据样品OD值/阴性对照平均OD值≥2.1为阳性，抗-HBe及抗-HBc结果根据样品OD值<0.105为阳性。
1.3 ALT测定 用改良赖氏法测定血清中ALT，试剂购自上海科华生物工程公司，依试剂说明书操作，在721型分光度计(为上海第三仪器厂生产)上以波长500nm比色，ALT>40u为异常。
1.4 HBV-DNA检测 PCR引物由中科院上海细胞生物所合成。引物序列为5’-TCGTGTTACAGGCGGGGT-3'(197-213nt)和5’-CGAACCACTGAACAAATGGC-3’(687-706nt)，它们是HBV adr adw ayw3个亚型基因组S区共有的保守序列。参照文献[1]，提取血清中HBV-DNA，取4μl作为扩增模板，加Taq聚合酶3u，10×缓冲液10μl、dNTP混合物1μl(25μmol/μl)。上述试剂均购自美国Promega公司，引物各1μl(5000 pmol/100μl)加双蒸水至终反应体积50μl，于ETS-960型扩增仪(澳大利亚产)扩增，94℃变性5分钟，后按94℃50秒、45℃40秒、70℃50秒30个循环，最后于70℃5分钟，扩增产物于2.0%琼脂糖凝胶电泳，260nm紫外灯观察拍照。阳性标本可见约510bp扩增片段。
, 百拇医药
2 结果与讨论
2.1 HBsAg、抗-HBs及ALT变化 17例调查对象中，8/17例(47.1%)首份血清及跟踪过程中的每份血清HBsAg、抗-HBs均为阳性，其中2例ALT呈间隙性增高，其余6例在跟踪过程中未见异常。5/17例(29.4%)首份血清HBsAg和抗-HBs检测为阳性，跟踪过程各份血清HBsAg检测为阳性而抗-HBs为阴性，抗HBs呈—过性出现，未发现ALT异常。4/17例(23.5%)首份血清HBsAg和抗HBs检测均为阳性，跟踪过程中各份血清抗-HBs检测为阳性，而HBsAg为阴性，HBsAg呈一过性出现，其中2例ALT有间隙性增高，另2例未见异常。
2.2 HBV-DNA检测结果 17例调查对象首份血清HBV-DNA为阳性，但在随后的跟踪调查过程中，4例HBsAg一过性者有3例HBV-DNA阴性，1例持续阳性；此例属于HBsAg阴性的乙肝病毒慢性感染[1]。5例抗HBs一过性者和8例HBsAg、抗-HBs持续双阳性者HBV-DNA均为阳性。
, 百拇医药
2.3 HBV感染史 疫苗接种史与HBV标志物、HBV-DNA及ALT变化的关系。8例HBsAg抗-HBs持续双阳性者中均为少儿期有HBV感染史，2例有HBV疫苗接种但免疫失败；4例HBsAg一过性调查者少儿期均无HBV感染史，3例有疫苗接种史，5例抗-HBs一过性者，均有HBV感染史，2例有疫苗接种史。
普遍认为HBsAg和抗-HBs同时存在的原因是多方面的[2～3]，而病毒本身，尤其变异株是最重要的原因之一。并且HBsAg和抗-HBs不同血清学转归和不同的临床表现，是否与HBV基因不同变异株有关，尚需进一步研究。但一般认为这种现象属于HBV急性感染所致。
参考文献
1 骆抗先，周 荣，梁炽森，等.PCR鉴定HBsAg阴性慢性活动性肝炎中的乙型肝炎病毒感染.中华内科杂志，1991，30(1)：21
2 房德兴，甘人宝，张 倩，等.乙型肝炎表面抗原aa126ILe-Sev变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定.病毒学报，1998，14(1)：1
3 何建文，吕 晴，朱启榕，等.乙型肝炎疫苗免疫失败婴儿病毒表面抗原a决定簇基因变异的研究.中华实验和临床病毒学杂志，1996，10(4)：308
1998-08-24收稿。1998-11-10修回。, 百拇医药