高效液相色谱法测定化妆品中三氯生
作者：朱杰民 胡静 杨业 杜达安 梁旭霞
单位：广东省卫生防疫站，广州 510300
关键词：高效液相色谱；二级管阵列检测器；杀菌剂；三氯生
卫生研究000311 摘要：采用高效液相色谱(HPLC，带有二级管阵列检测器)测定化妆品的杀菌剂三氯生。用C18柱，以乙腈-水(60∶40)，用冰醋酸调节pH值3.0为流动相，检测波长280nm，以保留时间及紫外光谱图作定性，以峰面积或峰高作定量。该方法准确度和精密度较高，各类化妆品加标平均回收率范围为91.9%～98.8%，相对标准偏差范围为0.72%～2.8%。
中图分类号：R168 R758.22 TS974.1 文献标识码：B
文章编号：1000-8020(2000)03-0154-02
, 百拇医药
Determination of trichlosan in cosmeticy by high-performance
liquid chromatography
Zhu Jiemin, Hu Jing, Yang Ye, Du Daan, et al.
(Health and Epidemic Preventive Station of Guangdong Province,Guangzhou 510300,China)
Abstract：A method was developed for the determination of an antiseptic-trichlosan in cosmeticy by HPLC followed by diode-array detection.The chromatographic separation was performed on C18 column with a mobile phase of acetonitrile-water(60∶40,V/V)which was adjusted to pH3.0 by glacialacetic acid.The UV wavelength was 280nm.Retention time as well as UV spec-trum were used for the qualitation of trichlosan,and peak area or peak height for quantitation.The method showed good accuracy and precision average recovery of trichlosan from different cosmetics was between 91.86% and 98.83%.Relative standard deviation was between 0.72% and 2.75%.
, 百拇医药
Key words:high-performance liquid chromatography, diode-array detection,cosmetics, anti-bacterial agents, trichlosan
化妆品中有部分产品是用于个人日常卫生的，如去头屑香波、除体臭剂、止汗剂和一些含药的化妆品等。这类产品都不同程度的含有杀菌剂，作用主要是杀菌、舒缓体臭和由于粉刺及冻疮等引起的轻度皮肤感染。1974年美国FDA根据杀菌剂在化妆品中使用的情况，提出报告，建立了有关杀菌剂使用法规，规定最大允许浓度，对其使用的安全性进行评价[1]。我国亦建立了相应法规。
三氯生由于有损伤细菌细胞膜和使酶蛋白变性的特性，常用于祛臭剂、香波等化妆品中作杀菌剂。欧共体(EEC)和GB 7917—87标准均规定化妆品中最大允许浓度质量分数为0.3%。一般在祛臭剂、香波和药皂中用浓度质量分数为0.1%～0.3%[1，2]。本文在参考有关文献的基础上[3，4]，采用高效液相色谱带有二级管阵列检测器测定化妆品中三氯生。该法简单有效易行，分离效果好，准确度和精密度较高。
, 百拇医药
1 实验仪器与试剂材料
1.1 实验仪器
日立L-7000型HPLC，日立L-7450型二级管阵列检测器，XW-80型旋涡混合器，HZS-H水浴恒温振荡器，BRANSONIC超声振荡器，LD4-2A型医用离心机。
1.2 实验试剂和材料
乙腈，色谱纯(天津四友生物医学技术开发公司)；冰醋酸，AR级(广州新港化工厂)；无水乙醇，AR级(广州新港化工厂)；硫酸，AR级(广州新港化工厂)使用浓度为4mol/L。
标准贮备液配制：准确称取三氯生(C12H7O2Cl3)1.000g，用无水乙醇溶解后定容至100ml容量瓶中，配成三氯生标准溶液，浓度为10.0g/L以备用。
, 百拇医药
水为二次去离子水，所有的溶剂和溶液在分析前都要经过0.45μm过滤膜过滤及超声波脱气。
1.3 高效液相色谱条件
色谱柱：Spheri-5RP-18(220mm×4.6mm i.d5μm)。
流动相：乙腈-水(60∶40)，用冰醋酸调节pH值3.0。
柱温：33℃，流速：1.0ml/min。
检测器：二级管阵列检测器，波长：280nm。
1.4 样品预处理
准确称取样品1.0g于10ml离心管中，加入4mol/L 硫酸0.5ml，用无水乙醇稀释至10ml，在50℃水浴恒温振荡器中恒温15min后，用旋涡混合器剧烈振荡，在离心机上离心10min(300r/min)，取上清液用0.45μm过滤膜过滤后备用。
, 百拇医药
1.5 样品测定
按上述色谱条件取10μl分析测定。
1.6 标准曲线
准确移取0.00、0.10、0.20、0.40、0.80、1.50、3.00、5.00ml上述三氯生标准贮备液，分别置100ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，进样10μl分析，用峰面积和三氯生的浓度绘制标准曲线。
2 结果与讨论
2.1 检测波长的选择
将三氯生标准液在200～340nm范围内作紫外扫描。根据扫描发现三氯生在230nm、254nm及280nm处均有较大的紫外吸收。但由于流动相中的乙腈在230nm及254nm处亦有紫外吸收，为了消除干扰，故选择280nm作为检测波长。
, 百拇医药
2.2 检测器的选择
化妆品的成分复杂，一般的紫外可见分光检测器仅靠保留时间作定性依据，对于复杂的样品不太可靠。二级管阵列检测器可提供光谱图，除了可以根据被分离成分是否与标准品有相同的保留时间外，还可以根据是否有相同的光谱来判断，通过两者的光谱图比较进行定性。因而可以利用色谱保留值和光谱特征吸收曲线综合进行定性分析。
2.3 流动相pH值对样品色谱行为的影响
在乙腈-水-冰醋酸的体系中，考察了不同pH值对样品色谱行为的影响，试验表明：保留时间随pH减少而减少，酸度在pH2.70～3.20之间，峰形变化不大。随着pH值增大，峰形开始出现拖尾现象。综合考虑色谱柱对pH值的耐受性及实验时间的长短，选择pH值为3.0的流动相系统。
2.4 柱温的选择
, 百拇医药 本法可选室温，但为了统一，使温度条件不受环境、季节变化的影响，选定为33℃。
2.5 标准曲线及其线性范围
用峰面积(A)和三氯生的浓度(C)绘图，制得标准曲线，A＝3.22×109C+1.83×105。
实验表明：相关系数r为0.9998，三氯生在10.0～500.0μg/ml范围内与峰面积呈良好线性。结果满足实验室要求。
2.6 方法的回收率和精密度
回收率试验准确称取沐浴液、洗面奶、按摩膏、眼影各1.00g作本底，在标准曲线范围内，分别加入一定量的三氯生标准，按方法处理样品，测定各类化妆品的加标回收率，结果见附表。
2.7 精密度试验
, 百拇医药
取回收率试验用的样品液，重复进样6次，计算其相对标准偏差，结果见附表。
附表 回收率及精密度测定结果(n=6) 样品
本底值(mg)
加标值
(mg)
测定值
(mg)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
沐浴液1
, http://www.100md.com
0.00
1.00
0.988±0.025
98.83
2.53
洗面奶
0.00
1.00
0.945±0.026
94.50
2.75
按摩膏
0.00
, 百拇医药
1.00
0.966±0.007
96.63
0.72
眼影
0.00
1.00
0.919±0.012
91.86
1.26
沐浴液2(1)
2.02
, 百拇医药
1.00
2.971±0.031
98.38
1.04
注：(1)为某品牌注明含三氯生含量化妆品
2.8 样品测定
称取上述化妆品样品各1.00g，用本实验方法处理后，进行测定。样品标注值为0.20%，测定值为0.198%，RSD为1.08%。
本法的样品预处理方法简单，分离效果好，准确度和精密度较高，适用于样品的日常监测。
作者简介：朱杰民，男，主管技师
参考文献
1，裘炳毅.化妆品化学与工艺技术大全.北京：中国轻工业出版社，1997，345—360
2，高国强，秦钰慧.化妆品卫生与管理.北京：人民卫生出版社，1994，390—391
3，王晓强，胡文炬，张军，等.高效液相色谱法测定化妆品中对羟基苯酸类防腐剂.色谱，1994，12(2)：144—145
4，祁广建，沈国英，刘鹏春.化妆品中四种防腐剂的高效液相色谱法测定.色谱，1994，12(6)：445—446
(1999-11-24收稿), 百拇医药
单位：广东省卫生防疫站，广州 510300
关键词：高效液相色谱；二级管阵列检测器；杀菌剂；三氯生
卫生研究000311 摘要：采用高效液相色谱(HPLC，带有二级管阵列检测器)测定化妆品的杀菌剂三氯生。用C18柱，以乙腈-水(60∶40)，用冰醋酸调节pH值3.0为流动相，检测波长280nm，以保留时间及紫外光谱图作定性，以峰面积或峰高作定量。该方法准确度和精密度较高，各类化妆品加标平均回收率范围为91.9%～98.8%，相对标准偏差范围为0.72%～2.8%。
中图分类号：R168 R758.22 TS974.1 文献标识码：B
文章编号：1000-8020(2000)03-0154-02
, 百拇医药
Determination of trichlosan in cosmeticy by high-performance
liquid chromatography
Zhu Jiemin, Hu Jing, Yang Ye, Du Daan, et al.
(Health and Epidemic Preventive Station of Guangdong Province,Guangzhou 510300,China)
Abstract：A method was developed for the determination of an antiseptic-trichlosan in cosmeticy by HPLC followed by diode-array detection.The chromatographic separation was performed on C18 column with a mobile phase of acetonitrile-water(60∶40,V/V)which was adjusted to pH3.0 by glacialacetic acid.The UV wavelength was 280nm.Retention time as well as UV spec-trum were used for the qualitation of trichlosan,and peak area or peak height for quantitation.The method showed good accuracy and precision average recovery of trichlosan from different cosmetics was between 91.86% and 98.83%.Relative standard deviation was between 0.72% and 2.75%.
, 百拇医药
Key words:high-performance liquid chromatography, diode-array detection,cosmetics, anti-bacterial agents, trichlosan
化妆品中有部分产品是用于个人日常卫生的，如去头屑香波、除体臭剂、止汗剂和一些含药的化妆品等。这类产品都不同程度的含有杀菌剂，作用主要是杀菌、舒缓体臭和由于粉刺及冻疮等引起的轻度皮肤感染。1974年美国FDA根据杀菌剂在化妆品中使用的情况，提出报告，建立了有关杀菌剂使用法规，规定最大允许浓度，对其使用的安全性进行评价[1]。我国亦建立了相应法规。
三氯生由于有损伤细菌细胞膜和使酶蛋白变性的特性，常用于祛臭剂、香波等化妆品中作杀菌剂。欧共体(EEC)和GB 7917—87标准均规定化妆品中最大允许浓度质量分数为0.3%。一般在祛臭剂、香波和药皂中用浓度质量分数为0.1%～0.3%[1，2]。本文在参考有关文献的基础上[3，4]，采用高效液相色谱带有二级管阵列检测器测定化妆品中三氯生。该法简单有效易行，分离效果好，准确度和精密度较高。
, 百拇医药
1 实验仪器与试剂材料
1.1 实验仪器
日立L-7000型HPLC，日立L-7450型二级管阵列检测器，XW-80型旋涡混合器，HZS-H水浴恒温振荡器，BRANSONIC超声振荡器，LD4-2A型医用离心机。
1.2 实验试剂和材料
乙腈，色谱纯(天津四友生物医学技术开发公司)；冰醋酸，AR级(广州新港化工厂)；无水乙醇，AR级(广州新港化工厂)；硫酸，AR级(广州新港化工厂)使用浓度为4mol/L。
标准贮备液配制：准确称取三氯生(C12H7O2Cl3)1.000g，用无水乙醇溶解后定容至100ml容量瓶中，配成三氯生标准溶液，浓度为10.0g/L以备用。
, 百拇医药
水为二次去离子水，所有的溶剂和溶液在分析前都要经过0.45μm过滤膜过滤及超声波脱气。
1.3 高效液相色谱条件
色谱柱：Spheri-5RP-18(220mm×4.6mm i.d5μm)。
流动相：乙腈-水(60∶40)，用冰醋酸调节pH值3.0。
柱温：33℃，流速：1.0ml/min。
检测器：二级管阵列检测器，波长：280nm。
1.4 样品预处理
准确称取样品1.0g于10ml离心管中，加入4mol/L 硫酸0.5ml，用无水乙醇稀释至10ml，在50℃水浴恒温振荡器中恒温15min后，用旋涡混合器剧烈振荡，在离心机上离心10min(300r/min)，取上清液用0.45μm过滤膜过滤后备用。
, 百拇医药
1.5 样品测定
按上述色谱条件取10μl分析测定。
1.6 标准曲线
准确移取0.00、0.10、0.20、0.40、0.80、1.50、3.00、5.00ml上述三氯生标准贮备液，分别置100ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，进样10μl分析，用峰面积和三氯生的浓度绘制标准曲线。
2 结果与讨论
2.1 检测波长的选择
将三氯生标准液在200～340nm范围内作紫外扫描。根据扫描发现三氯生在230nm、254nm及280nm处均有较大的紫外吸收。但由于流动相中的乙腈在230nm及254nm处亦有紫外吸收，为了消除干扰，故选择280nm作为检测波长。
, 百拇医药
2.2 检测器的选择
化妆品的成分复杂，一般的紫外可见分光检测器仅靠保留时间作定性依据，对于复杂的样品不太可靠。二级管阵列检测器可提供光谱图，除了可以根据被分离成分是否与标准品有相同的保留时间外，还可以根据是否有相同的光谱来判断，通过两者的光谱图比较进行定性。因而可以利用色谱保留值和光谱特征吸收曲线综合进行定性分析。
2.3 流动相pH值对样品色谱行为的影响
在乙腈-水-冰醋酸的体系中，考察了不同pH值对样品色谱行为的影响，试验表明：保留时间随pH减少而减少，酸度在pH2.70～3.20之间，峰形变化不大。随着pH值增大，峰形开始出现拖尾现象。综合考虑色谱柱对pH值的耐受性及实验时间的长短，选择pH值为3.0的流动相系统。
2.4 柱温的选择
, 百拇医药 本法可选室温，但为了统一，使温度条件不受环境、季节变化的影响，选定为33℃。
2.5 标准曲线及其线性范围
用峰面积(A)和三氯生的浓度(C)绘图，制得标准曲线，A＝3.22×109C+1.83×105。
实验表明：相关系数r为0.9998，三氯生在10.0～500.0μg/ml范围内与峰面积呈良好线性。结果满足实验室要求。
2.6 方法的回收率和精密度
回收率试验准确称取沐浴液、洗面奶、按摩膏、眼影各1.00g作本底，在标准曲线范围内，分别加入一定量的三氯生标准，按方法处理样品，测定各类化妆品的加标回收率，结果见附表。
2.7 精密度试验
, 百拇医药
取回收率试验用的样品液，重复进样6次，计算其相对标准偏差，结果见附表。
附表 回收率及精密度测定结果(n=6) 样品
本底值(mg)
加标值
(mg)
测定值
(mg)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
沐浴液1
, http://www.100md.com
0.00
1.00
0.988±0.025
98.83
2.53
洗面奶
0.00
1.00
0.945±0.026
94.50
2.75
按摩膏
0.00
, 百拇医药
1.00
0.966±0.007
96.63
0.72
眼影
0.00
1.00
0.919±0.012
91.86
1.26
沐浴液2(1)
2.02
, 百拇医药
1.00
2.971±0.031
98.38
1.04
注：(1)为某品牌注明含三氯生含量化妆品
2.8 样品测定
称取上述化妆品样品各1.00g，用本实验方法处理后，进行测定。样品标注值为0.20%，测定值为0.198%，RSD为1.08%。
本法的样品预处理方法简单，分离效果好，准确度和精密度较高，适用于样品的日常监测。
作者简介：朱杰民，男，主管技师
参考文献
1，裘炳毅.化妆品化学与工艺技术大全.北京：中国轻工业出版社，1997，345—360
2，高国强，秦钰慧.化妆品卫生与管理.北京：人民卫生出版社，1994，390—391
3，王晓强，胡文炬，张军，等.高效液相色谱法测定化妆品中对羟基苯酸类防腐剂.色谱，1994，12(2)：144—145
4，祁广建，沈国英，刘鹏春.化妆品中四种防腐剂的高效液相色谱法测定.色谱，1994，12(6)：445—446
(1999-11-24收稿), 百拇医药