被动吸烟大鼠肺组织中鸟苷素含量的变化
作者：庞宝森 王辰 唐朝枢 张洪玉 庞永政 祝锦
单位：唐朝枢 庞永政(北京医科大学第一附属医院中心实验室)；庞宝森 王辰 张洪玉 祝锦(北京红十字朝阳医院，北京 100020)
关键词：吸烟；肺损伤；鸟苷素
卫生研究000308 摘要：用香烟烟雾使大鼠被动吸烟的方法，复制大鼠慢性支气管炎(慢支)模型，以观察吸烟对大鼠肺组织中鸟苷素含量的影响。采用被动吸烟方法复制大鼠慢支模型。采用放射免疫分析方法测定鸟苷素含量。结果显示，慢支模型组大鼠肺组织经病理证实，出现明显的慢支的病理改变。慢支模型组血浆中鸟苷素含量与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05)。肺组织中鸟苷素含量两组比较差异有显著性(P<0.01)。表明被动吸烟可以诱导肺组织中鸟苷素含量增加，这可能是代偿性的抑制小气道微管渗漏及分泌作用。
中图分类号：TS411 R562.21 Q516 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1000-8020(2000)03-0147-02
Effect of smoking on the guanylin in the injured lung of rats
Pang Baosen, Wang Chen,Tang Chaoshu,Zhang Hongyu,et al.
(Beijing Red Cross Chaoyang Hospital, Beijing 100020,China)
Abstract：In order to survey the influence of smoking on the level of guanylin in lung tissue in rats, a method of passive smoking was used to set up chronic bronchitis model in rats.The content of guanylin was measured by radioimmunoassay.In the smoking group,remarkable pathological changes in the lung tissue were found.There was no significant difference in the contents of guanylin in the plasma of experimental rats,compared with the control(P<0.05).But in the lung tissue,the difference was significant(P<0.01).
, 百拇医药
Key words:smoking,lung injury,guanylin
鸟苷素是近年来发现的调节钠、钾离子和水代谢的一种重要多肽物质，并发现它对气管平滑肌细胞有明显的松弛作用，并可以抑制支气管收缩和气道微管的渗漏作用[1]。本文研究了吸烟是否对鸟苷素的含量变化有影响作用，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物的分组
实验动物选用Wistar雄性大鼠，体重230～300g(购于北京医科大学动物中心，1级，合格证书号01-3056)。实验分组：(1)正常对照组，10只，不做任何处理。(2)慢性支气管炎(慢支)模型组，10只。
1.2 慢支模型复制
, http://www.100md.com
将大鼠放入80cm×60cm×58cm的有机玻璃制成的染毒箱内。每天吸烟2次，每次16支，时间30min，2次之间间隔4h。连续吸烟75天。香烟：由北京烟草专卖局提供的金健牌香烟。被动吸烟方法：将香烟点燃后，通过三通管将香烟烟雾吸入100ml的玻璃注射器中，关闭吸烟通路一端，再打开三通通路另一端将烟雾打入染毒箱内进行大鼠被动吸烟染毒。
1.3 光镜标本制备
于吸烟实验结束次日，各组随机取大鼠5只，取相同部位肺组织，用10%福尔马林固定，HE染色，光镜观察肺组织病理变化情况。
1.4 鸟苷素检测方法
①制备血浆：将大鼠血收集在装有EDTA的抗凝管中，2500r/min，离心10min分离出血浆，取0.2ml血浆加入0.1ml抑肽酶后放入-80℃冰箱待测。②肺组织匀浆制备：将大鼠同一部位的肺叶组织0.3克置于1mol/L醋酸溶液中煮沸10分钟(肺组织与醋酸的比例为1∶10)，然后用Polytron匀浆器匀浆。组织匀浆中的蛋白质含量采用考马斯亮蓝法检测[2]。③血浆或组织匀浆预处理：将2ml样品(血浆或组织匀浆)注入用甲醇预活化的Sep-pkC18柱中。用0.01mol/L的HCl冲洗柱子，吸附物用2ml(30%的2-丙醇+30%甲醇+0.01mol/L HCl)进行洗脱，将洗脱液抽干冷冻后-80℃下保存，待测定时将冻干粉用1ml蒸馏水复溶，取0.1ml做样品测定。测定方法按放射免疫分析试剂盒测定(Pholmix公司产品)。
, http://www.100md.com
1.5 统计处理
实验数据以
±s表示，用t检验判定两组均数差异显著性。
2 结果
光镜观察，由图1、图2可见大鼠慢支的组织病理学改变与文献报道相近[3]。慢支模型组，细支气管、终末细支气管周围均出现不同程度的慢性炎性细胞和中性粒细胞浸润，管腔变狭窄，部分肺泡萎陷、实变，粘膜上皮细胞严重受损，纤毛细胞变性、坏死。血浆和肺组织中鸟苷素的变化情况见附表。
图1 正常细支气管粘膜上皮完整，管腔
规则，肺泡腔充气正常，HE(×200)
, http://www.100md.com
图2 慢性支气管炎。细支气管狭窄，周围
肺泡萎陷，HE(×200)
附表 血浆与肺组织中鸟苷素含量的变化(±s，n=10) 组别
血浆
(pg/ml)
肺组织
(pg/mg 蛋白)
正常对照组
5.20±6.6
102.0±22.7
, 百拇医药
慢支模型组
5.70±7.4
682.0±42.4(1)
注：(1)与正常对照组比较P<0.013 讨论
鸟苷素是一种由15个氨基酸组成的肽类物质，最先从大鼠空肠中分离发现的。鸟苷素是鸟苷酸环化酶激活物，可以使细胞内第二信使cGMP升高，可激活跨膜的氯离子通道，在局部调节水、电解质的分泌。近年来研究发现，肺组织也可以分泌鸟苷素，并在局部调节气道上皮的水、电解质平衡[1]。本项研究工作表明：慢支模型组肺组织病理切片可见肺内细支气管、终末细支气管周围均出现不同程度的炎性细胞和中性粒细胞浸润，管腔变窄，部分肺泡萎陷，粘膜上皮细胞增生、变性。这一点证明长期被动吸烟可引起大鼠慢性支气管炎的形成。研究表明被动吸烟大鼠肺组织鸟苷素含量增加和大鼠慢支的形成是有相关联系的。鸟苷素含量增加可使细胞内cGMP增高，激活气道上皮氯离子通道，从而对气道上皮的体液运输发挥调节作用。慢支动物模型的肺组织鸟苷素含量增高的机制，目前尚不清楚。鸟苷素除作用于气道上皮，促进气道分泌外，Ohbayashi等还发现鸟苷素可显著抑制白蛋白诱导的支气管收缩及微血管渗漏，其作用也是通过cGMP介导[1]。鸟苷素在慢性支气管炎发病中的病理生理意义，有必要进行深入的研究。
, 百拇医药
作者简介：庞宝森，男，副主任技师
参考文献
1，Ohbayashi H,Yamaki K,Suzuki R.Effects of uroguanylin and guanylin against antigen-induced broncho-constriction and airway microvascular leakage in sensitized guineapigs.Life Sci,1998,62:1833—1844
2，Bradford MM.A rapid and sensitive method for the guanlitation of microgram guantities of protein utitizing the principle of protein-dye binlding.Anal Biochem， 1976，72:248—253
3，任勃，马淑扬，甘萍.β-胡萝卜素对吸烟所致小鼠慢性支气管炎的影响.中国病理生理杂志，1996，12：81—84
(1999-09-27收稿), http://www.100md.com
单位：唐朝枢 庞永政(北京医科大学第一附属医院中心实验室)；庞宝森 王辰 张洪玉 祝锦(北京红十字朝阳医院，北京 100020)
关键词：吸烟；肺损伤；鸟苷素
卫生研究000308 摘要：用香烟烟雾使大鼠被动吸烟的方法，复制大鼠慢性支气管炎(慢支)模型，以观察吸烟对大鼠肺组织中鸟苷素含量的影响。采用被动吸烟方法复制大鼠慢支模型。采用放射免疫分析方法测定鸟苷素含量。结果显示，慢支模型组大鼠肺组织经病理证实，出现明显的慢支的病理改变。慢支模型组血浆中鸟苷素含量与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05)。肺组织中鸟苷素含量两组比较差异有显著性(P<0.01)。表明被动吸烟可以诱导肺组织中鸟苷素含量增加，这可能是代偿性的抑制小气道微管渗漏及分泌作用。
中图分类号：TS411 R562.21 Q516 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1000-8020(2000)03-0147-02
Effect of smoking on the guanylin in the injured lung of rats
Pang Baosen, Wang Chen,Tang Chaoshu,Zhang Hongyu,et al.
(Beijing Red Cross Chaoyang Hospital, Beijing 100020,China)
Abstract：In order to survey the influence of smoking on the level of guanylin in lung tissue in rats, a method of passive smoking was used to set up chronic bronchitis model in rats.The content of guanylin was measured by radioimmunoassay.In the smoking group,remarkable pathological changes in the lung tissue were found.There was no significant difference in the contents of guanylin in the plasma of experimental rats,compared with the control(P<0.05).But in the lung tissue,the difference was significant(P<0.01).
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Key words:smoking,lung injury,guanylin
鸟苷素是近年来发现的调节钠、钾离子和水代谢的一种重要多肽物质，并发现它对气管平滑肌细胞有明显的松弛作用，并可以抑制支气管收缩和气道微管的渗漏作用[1]。本文研究了吸烟是否对鸟苷素的含量变化有影响作用，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物的分组
实验动物选用Wistar雄性大鼠，体重230～300g(购于北京医科大学动物中心，1级，合格证书号01-3056)。实验分组：(1)正常对照组，10只，不做任何处理。(2)慢性支气管炎(慢支)模型组，10只。
1.2 慢支模型复制
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将大鼠放入80cm×60cm×58cm的有机玻璃制成的染毒箱内。每天吸烟2次，每次16支，时间30min，2次之间间隔4h。连续吸烟75天。香烟：由北京烟草专卖局提供的金健牌香烟。被动吸烟方法：将香烟点燃后，通过三通管将香烟烟雾吸入100ml的玻璃注射器中，关闭吸烟通路一端，再打开三通通路另一端将烟雾打入染毒箱内进行大鼠被动吸烟染毒。
1.3 光镜标本制备
于吸烟实验结束次日，各组随机取大鼠5只，取相同部位肺组织，用10%福尔马林固定，HE染色，光镜观察肺组织病理变化情况。
1.4 鸟苷素检测方法
①制备血浆：将大鼠血收集在装有EDTA的抗凝管中，2500r/min，离心10min分离出血浆，取0.2ml血浆加入0.1ml抑肽酶后放入-80℃冰箱待测。②肺组织匀浆制备：将大鼠同一部位的肺叶组织0.3克置于1mol/L醋酸溶液中煮沸10分钟(肺组织与醋酸的比例为1∶10)，然后用Polytron匀浆器匀浆。组织匀浆中的蛋白质含量采用考马斯亮蓝法检测[2]。③血浆或组织匀浆预处理：将2ml样品(血浆或组织匀浆)注入用甲醇预活化的Sep-pkC18柱中。用0.01mol/L的HCl冲洗柱子，吸附物用2ml(30%的2-丙醇+30%甲醇+0.01mol/L HCl)进行洗脱，将洗脱液抽干冷冻后-80℃下保存，待测定时将冻干粉用1ml蒸馏水复溶，取0.1ml做样品测定。测定方法按放射免疫分析试剂盒测定(Pholmix公司产品)。
, http://www.100md.com
1.5 统计处理
实验数据以
±s表示，用t检验判定两组均数差异显著性。2 结果
光镜观察，由图1、图2可见大鼠慢支的组织病理学改变与文献报道相近[3]。慢支模型组，细支气管、终末细支气管周围均出现不同程度的慢性炎性细胞和中性粒细胞浸润，管腔变狭窄，部分肺泡萎陷、实变，粘膜上皮细胞严重受损，纤毛细胞变性、坏死。血浆和肺组织中鸟苷素的变化情况见附表。
图1 正常细支气管粘膜上皮完整，管腔
规则，肺泡腔充气正常，HE(×200)
, http://www.100md.com
图2 慢性支气管炎。细支气管狭窄，周围
肺泡萎陷，HE(×200)
附表 血浆与肺组织中鸟苷素含量的变化(
±s，n=10) 组别血浆
(pg/ml)
肺组织
(pg/mg 蛋白)
正常对照组
5.20±6.6
102.0±22.7
, 百拇医药
慢支模型组
5.70±7.4
682.0±42.4(1)
注：(1)与正常对照组比较P<0.013 讨论
鸟苷素是一种由15个氨基酸组成的肽类物质，最先从大鼠空肠中分离发现的。鸟苷素是鸟苷酸环化酶激活物，可以使细胞内第二信使cGMP升高，可激活跨膜的氯离子通道，在局部调节水、电解质的分泌。近年来研究发现，肺组织也可以分泌鸟苷素，并在局部调节气道上皮的水、电解质平衡[1]。本项研究工作表明：慢支模型组肺组织病理切片可见肺内细支气管、终末细支气管周围均出现不同程度的炎性细胞和中性粒细胞浸润，管腔变窄，部分肺泡萎陷，粘膜上皮细胞增生、变性。这一点证明长期被动吸烟可引起大鼠慢性支气管炎的形成。研究表明被动吸烟大鼠肺组织鸟苷素含量增加和大鼠慢支的形成是有相关联系的。鸟苷素含量增加可使细胞内cGMP增高，激活气道上皮氯离子通道，从而对气道上皮的体液运输发挥调节作用。慢支动物模型的肺组织鸟苷素含量增高的机制，目前尚不清楚。鸟苷素除作用于气道上皮，促进气道分泌外，Ohbayashi等还发现鸟苷素可显著抑制白蛋白诱导的支气管收缩及微血管渗漏，其作用也是通过cGMP介导[1]。鸟苷素在慢性支气管炎发病中的病理生理意义，有必要进行深入的研究。
, 百拇医药
作者简介：庞宝森，男，副主任技师
参考文献
1，Ohbayashi H,Yamaki K,Suzuki R.Effects of uroguanylin and guanylin against antigen-induced broncho-constriction and airway microvascular leakage in sensitized guineapigs.Life Sci,1998,62:1833—1844
2，Bradford MM.A rapid and sensitive method for the guanlitation of microgram guantities of protein utitizing the principle of protein-dye binlding.Anal Biochem， 1976，72:248—253
3，任勃，马淑扬，甘萍.β-胡萝卜素对吸烟所致小鼠慢性支气管炎的影响.中国病理生理杂志，1996，12：81—84
(1999-09-27收稿), http://www.100md.com