关于嗜酸性粒细胞手工直接计数与仪器计数几个问题的探讨
作者：张建武 田莉 裴惠临
单位：湖北医科大学附属第二医院检验科 武汉430071
关键词：嗜酸性粒细胞；仪器分析；手工法直接计数
数理医药学杂志990442 摘 要 用全自动血液分析仪和常规显微镜直接计算法对80例血液标本进行了嗜酸性粒细胞计数，结果显示两种不同方法计数值有显著差异。依据两种方法的原理、影响因素分析了两者间的差异，确认CELL-DYN 3500型全自动血液分析仪的精密性和准确性都优于显微镜直接计数法。
近年来，由于血液分析仪档次的提高，使用仪器对嗜酸性粒细胞计数已经十分简单、方便。本文所述的CELL-DYN3500型全自动血液分析仪就可以直接计数嗜酸性粒细胞，其检测嗜酸性粒细胞的基本原理是：全血经过稀释并溶解红细胞后成一细流经过一束激光，激光系统则通过激光扫描，根据细胞大小、形态、核结构以及细胞胞内颗粒的大小、折光性将粒系统区分为中性、淋巴、单核、嗜酸性、嗜碱性五种并计数。本文将就嗜酸性粒细胞手工计数与仪器计数的准确性和精密度进行比较，并且同时观察延长放置时间对嗜酸性粒细胞计数的影响。
, 百拇医药
1 仪器与材料
1.1 仪器 CELL-DYN 3500全自动血液分析仪(美国Ames公司生产)；计数盘；一次性微量采血管(天津津京医疗器械厂制造)。
1.2 试剂 CELL-DYN3500全自动血液分析仪配套试剂；全血质控物(由Ames公司提供)；乙醇-伊红稀释液。
1.3 标本 临床送检的血液分析标本皆为早晨8时左右抽取的静脉血，以饱和枸橼酸钠抗凝。
2 方法
2.1 仪器法 按仪器操作规程操作，CELL-DYN 3500全自动血液分析仪将自动检测标本，并重复操作一次。
2.2 手工法 严格按《全国临床检验操作规程》操作，用显微镜法直接计数标本的嗜酸性粒细胞三次取平均值，并重复操作一次。所有操作在半小时内完成。
, 百拇医药
2.3 延时实验 标本在室温放置4小时后，重复仪器法与手工直接计数法计数嗜酸性粒细胞一次，且所有实验在半小时内完成。
2.4 质量管理 每日作血液仪器分析时，随机作室内质控。质控物由美国Ames公司提供，并将此质控物对倍稀释成6种不同浓度后进行测定。结果表明，CELL-DYN 3500 全自动血液分析仪计数嗜酸性粒细胞在0～2.5×109/L范围内呈直线关系，此范围满足临床及本实验对嗜酸性粒细胞的要求。
3 结果
从附图上看，结果分布明显偏向仪器法一边，仪器法均高于手工法且无计数为零的现象。两种方法的相关系数为0.8872。从附表上看，仪器法高于手工法，仪器法较理想，变异系数为5.3%；手工法不太理想，变异系数为17.7%。从重复性实验结果来看，仪器法两次测量的相关性极好，r=0.997；手工法两次测量的相关性不太理想，r=0.8871。从延长时间对嗜酸性粒细胞计数的影响来看，两种方法所测值比及时测量值皆有下降，经T检验，P<0.05。
, 百拇医药
附表
n
X(/uL)
SD
CV
r
T
仪器法
80
94
4.97
5.3
0.8872
, http://www.100md.com T<0.01
手工法
80
65
15.1
23.7
附图
4 讨论
国际血液学标准化委员会(ICSH)规定嗜酸性粒细胞计数以目测法为参比方法，但引起手工法直接计数误差的原因很多，如微量吸管的精密度、稀释液吸取量的准确度以及所用器材的清洁度都直接影响嗜酸性粒细胞计数的准确性。同时，嗜酸性粒细胞手工法直接计数有一个最大的缺陷就是：嗜酸性粒细胞稀释液在溶解其它粒细胞的同时，也可以溶解嗜酸性粒细胞。这种方法学上的缺陷在手工法直接计数过程中不可避免。而CELL-DYN 3500 全自动血液分析仪对嗜酸性粒细胞计数则依靠仪器全自动进行，取量精确，不需对其它粒细胞进行溶解且基本保持粒细胞原始状态，并使用激光扫描技术，计数量较大，所以其准确性较高。
, 百拇医药
从计数量来看，显微镜直接计数法1∶20倍稀释，实际计数血量为0.05ul；CELL-DYN 3500全血动血液分析仪1001倍稀释，实际计数血量为10ul。仪器法计数范围更广则变异系数(CV)值愈小，误差愈小。但是，CELL-DYN 3500受抗凝剂影响并且它不能分辨白血病患者血液的粒系统，也是它的不足。
延长时间对嗜酸性粒细胞计数的影响较大，因为嗜酸性粒细胞在放置过程中会逐渐破碎，而且振荡会加速其破碎进程。室温放置4小时后，仪器法降低约2.8%，手工法降低约3.2%，且它们与即时检测值皆有显著差异。
综上所述，仪器法所测值虽然均大于手工法所测值，但其准确性与精密性都优于手工法，所以其检测结果准确可靠。而手工法由于受干扰的因素太多、误差较大，并且由于方法学的缺陷，难以达到ICSH所规定的准确度。同时，作者认为由于手工法直接计数受操作者个人因素影响较大，且本室使用乙醇-伊红稀释液，CELL-DYN 3500全自动血液分析仪使用饱和枸橼酸纳作抗凝剂，其他科室或个人操作可能与本实验结果不尽相同。
参考文献
1 李涤生主编.临床检验基础.人民卫生出版社，1993，172～174.
2 王翔朴主编.卫生学.人民卫生出版社，1995，288～294.
收稿日期：1999-04-05, http://www.100md.com
单位：湖北医科大学附属第二医院检验科 武汉430071
关键词：嗜酸性粒细胞；仪器分析；手工法直接计数
数理医药学杂志990442 摘 要 用全自动血液分析仪和常规显微镜直接计算法对80例血液标本进行了嗜酸性粒细胞计数，结果显示两种不同方法计数值有显著差异。依据两种方法的原理、影响因素分析了两者间的差异，确认CELL-DYN 3500型全自动血液分析仪的精密性和准确性都优于显微镜直接计数法。
近年来，由于血液分析仪档次的提高，使用仪器对嗜酸性粒细胞计数已经十分简单、方便。本文所述的CELL-DYN3500型全自动血液分析仪就可以直接计数嗜酸性粒细胞，其检测嗜酸性粒细胞的基本原理是：全血经过稀释并溶解红细胞后成一细流经过一束激光，激光系统则通过激光扫描，根据细胞大小、形态、核结构以及细胞胞内颗粒的大小、折光性将粒系统区分为中性、淋巴、单核、嗜酸性、嗜碱性五种并计数。本文将就嗜酸性粒细胞手工计数与仪器计数的准确性和精密度进行比较，并且同时观察延长放置时间对嗜酸性粒细胞计数的影响。
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1 仪器与材料
1.1 仪器 CELL-DYN 3500全自动血液分析仪(美国Ames公司生产)；计数盘；一次性微量采血管(天津津京医疗器械厂制造)。
1.2 试剂 CELL-DYN3500全自动血液分析仪配套试剂；全血质控物(由Ames公司提供)；乙醇-伊红稀释液。
1.3 标本 临床送检的血液分析标本皆为早晨8时左右抽取的静脉血，以饱和枸橼酸钠抗凝。
2 方法
2.1 仪器法 按仪器操作规程操作，CELL-DYN 3500全自动血液分析仪将自动检测标本，并重复操作一次。
2.2 手工法 严格按《全国临床检验操作规程》操作，用显微镜法直接计数标本的嗜酸性粒细胞三次取平均值，并重复操作一次。所有操作在半小时内完成。
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2.3 延时实验 标本在室温放置4小时后，重复仪器法与手工直接计数法计数嗜酸性粒细胞一次，且所有实验在半小时内完成。
2.4 质量管理 每日作血液仪器分析时，随机作室内质控。质控物由美国Ames公司提供，并将此质控物对倍稀释成6种不同浓度后进行测定。结果表明，CELL-DYN 3500 全自动血液分析仪计数嗜酸性粒细胞在0～2.5×109/L范围内呈直线关系，此范围满足临床及本实验对嗜酸性粒细胞的要求。
3 结果
从附图上看，结果分布明显偏向仪器法一边，仪器法均高于手工法且无计数为零的现象。两种方法的相关系数为0.8872。从附表上看，仪器法高于手工法，仪器法较理想，变异系数为5.3%；手工法不太理想，变异系数为17.7%。从重复性实验结果来看，仪器法两次测量的相关性极好，r=0.997；手工法两次测量的相关性不太理想，r=0.8871。从延长时间对嗜酸性粒细胞计数的影响来看，两种方法所测值比及时测量值皆有下降，经T检验，P<0.05。
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附表
n
X(/uL)
SD
CV
r
T
仪器法
80
94
4.97
5.3
0.8872
, http://www.100md.com T<0.01
手工法
80
65
15.1
23.7
附图
4 讨论
国际血液学标准化委员会(ICSH)规定嗜酸性粒细胞计数以目测法为参比方法，但引起手工法直接计数误差的原因很多，如微量吸管的精密度、稀释液吸取量的准确度以及所用器材的清洁度都直接影响嗜酸性粒细胞计数的准确性。同时，嗜酸性粒细胞手工法直接计数有一个最大的缺陷就是：嗜酸性粒细胞稀释液在溶解其它粒细胞的同时，也可以溶解嗜酸性粒细胞。这种方法学上的缺陷在手工法直接计数过程中不可避免。而CELL-DYN 3500 全自动血液分析仪对嗜酸性粒细胞计数则依靠仪器全自动进行，取量精确，不需对其它粒细胞进行溶解且基本保持粒细胞原始状态，并使用激光扫描技术，计数量较大，所以其准确性较高。
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从计数量来看，显微镜直接计数法1∶20倍稀释，实际计数血量为0.05ul；CELL-DYN 3500全血动血液分析仪1001倍稀释，实际计数血量为10ul。仪器法计数范围更广则变异系数(CV)值愈小，误差愈小。但是，CELL-DYN 3500受抗凝剂影响并且它不能分辨白血病患者血液的粒系统，也是它的不足。
延长时间对嗜酸性粒细胞计数的影响较大，因为嗜酸性粒细胞在放置过程中会逐渐破碎，而且振荡会加速其破碎进程。室温放置4小时后，仪器法降低约2.8%，手工法降低约3.2%，且它们与即时检测值皆有显著差异。
综上所述，仪器法所测值虽然均大于手工法所测值，但其准确性与精密性都优于手工法，所以其检测结果准确可靠。而手工法由于受干扰的因素太多、误差较大，并且由于方法学的缺陷，难以达到ICSH所规定的准确度。同时，作者认为由于手工法直接计数受操作者个人因素影响较大，且本室使用乙醇-伊红稀释液，CELL-DYN 3500全自动血液分析仪使用饱和枸橼酸纳作抗凝剂，其他科室或个人操作可能与本实验结果不尽相同。
参考文献
1 李涤生主编.临床检验基础.人民卫生出版社，1993，172～174.
2 王翔朴主编.卫生学.人民卫生出版社，1995，288～294.
收稿日期：1999-04-05, http://www.100md.com