鲎试剂的灵敏度复核
作者：邵民象 于秉新
单位：邵民象(山东省文登市第一人民医院 文登264422)； 于秉新(山东省文登市第一人民医院 文登264422)
关键词：
数理医药学杂志000158 中图分类号：R 362
文章编号：1004-4337(2000)01-0093-01▲
细菌内毒素检查法(Bacteridl Endotoxins Test)即鲎试法(Limulus Test， LT)用于大输液热原检查，具有重现性好、操作简便、灵敏度约高于传统兔试法100倍等优点，故先后被美国FDA.USP及我国部颁标准、药典所收载。鲎试剂即鲎变形细胞溶解物(Tachypleus Amebocytes Lysate, TAL)，其鲎的个体差异、总蛋白量及各种金属离子浓度、装量均匀度、运输与贮存条件等因素，均可对TAL灵敏度产生一定影响，而TAL灵敏度的准确性直接影响检查结果的可靠性，故药典规定：对每批新的TAL，在用于试验前必须进行灵敏度复核。
, 百拇医药
1 细菌内毒素标准品
细菌内毒素标准品有国际标准品、国家标准品(RSE)及工作标准品(CSE)之分。RSE系自大肠杆菌提取精制而得之内毒素，以国际标准品为基准，经协作标定，使之与国际标准品单位含义一致，如批号896RSE，每支效价为14000lu，即相当于20000Eu(Endotoxin unit)。现行的“细菌内毒素检查法”及“TAL标准”中，内毒素效价单位均用Eu表示。RSE用于标定CSE与标定、仲裁TAL灵敏度；CSE系以RSE为基准进行标定，确定其重量的相当效价。每1ngCSE效价应不小于2Eu，不大于50Eu，并具备均一性和稳定性的实验数据。CSE是一种内毒素制剂，可由TAL生产厂或生物制品所制备，用于TAL灵敏度测定及试验中的阳性对照。
2 TAL的灵敏度测定
根据被测TAL灵敏度的标示值(λb)，将RSE或CSE用细菌内毒素检查用水溶解，然后制备成合适的2倍稀释浓度，即2λb、λ、0.5λb、0.25λb浓度稀释液，每一稀释液平行做4管，37±1℃水浴保温60±2min，如浓度最大4管均为阳性，最低浓度4管均为阴性，或反应终点的对数平均值的标准差(S)小于0.365时，则实验结果有效，方可按公式计算TAL灵敏度测定值(λc)。当λc在0.5～2.0λb(包括0.5λb和2.0λb)时，方可用于细菌内毒素检查并以λb为该批TAL的灵敏度。
, 百拇医药
例 某批号TAL，λb为0.5Eu/ml的灵敏度复核试验结果 管号
1.0Eu/ml
0.5Eu/ml
0.25Eu/ml
0.125Eu/ml
阴性对照
1
+
+
+
-
-
, 百拇医药
2
+
+
-
-
-
3
+
-
-
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4
+
-
, 百拇医药
-
-
X1=1.0 X2=1.0 X3=0.5 X4=0.25
lgX1=0 lgX2=0 lgX3=-0.301 lgX4=-0.602
X为4组反应终点的对数值，n=4，代入公式
因S=2.88<0.365，且最大浓度1.0Eu/ml4管均呈阳性，最低浓度0.125Eu/ml4管均呈阴性，故本试验结果有效，可按公式计算TAL灵敏度的λc。
, 百拇医药
因TAL灵敏度λc在0.5～2.0λb(包括0.5λb和2.0λb)范围内，故可用于细菌内毒检查并以λb为该批TAL的灵敏度。
目前应用的凝胶法亦称翻转180度判定终点法，是一种定性或半定量方法，对TAL的灵敏度有较高要求。灵敏度过高易致“假阳性”，过低则易致“假阴性”。当TAL的λb小于供试品的内毒素限量时，可采用最大有效稀释度对供品进行稀释加以解决。FDA在LT法准则中提出，注射用药的内毒素阴量按公式X=(K)/(M)计算，X为内毒素限量；K为人与家兔的致热间的剂量；M为家兔的热原剂量。注射用药的M一般为10Eu/kg，即K=10ml/kg，如10%葡萄糖注射液的X=
＝1Eu/kg。故我国部颁“细菌内毒素检查法”中规定：四种大输液应使用灵敏度不超过0.5Eu/ml的TAL。■
收稿日期：1999-05-13, 百拇医药
单位：邵民象(山东省文登市第一人民医院 文登264422)； 于秉新(山东省文登市第一人民医院 文登264422)
关键词：
数理医药学杂志000158 中图分类号：R 362
文章编号：1004-4337(2000)01-0093-01▲
细菌内毒素检查法(Bacteridl Endotoxins Test)即鲎试法(Limulus Test， LT)用于大输液热原检查，具有重现性好、操作简便、灵敏度约高于传统兔试法100倍等优点，故先后被美国FDA.USP及我国部颁标准、药典所收载。鲎试剂即鲎变形细胞溶解物(Tachypleus Amebocytes Lysate, TAL)，其鲎的个体差异、总蛋白量及各种金属离子浓度、装量均匀度、运输与贮存条件等因素，均可对TAL灵敏度产生一定影响，而TAL灵敏度的准确性直接影响检查结果的可靠性，故药典规定：对每批新的TAL，在用于试验前必须进行灵敏度复核。
, 百拇医药
1 细菌内毒素标准品
细菌内毒素标准品有国际标准品、国家标准品(RSE)及工作标准品(CSE)之分。RSE系自大肠杆菌提取精制而得之内毒素，以国际标准品为基准，经协作标定，使之与国际标准品单位含义一致，如批号896RSE，每支效价为14000lu，即相当于20000Eu(Endotoxin unit)。现行的“细菌内毒素检查法”及“TAL标准”中，内毒素效价单位均用Eu表示。RSE用于标定CSE与标定、仲裁TAL灵敏度；CSE系以RSE为基准进行标定，确定其重量的相当效价。每1ngCSE效价应不小于2Eu，不大于50Eu，并具备均一性和稳定性的实验数据。CSE是一种内毒素制剂，可由TAL生产厂或生物制品所制备，用于TAL灵敏度测定及试验中的阳性对照。
2 TAL的灵敏度测定
根据被测TAL灵敏度的标示值(λb)，将RSE或CSE用细菌内毒素检查用水溶解，然后制备成合适的2倍稀释浓度，即2λb、λ、0.5λb、0.25λb浓度稀释液，每一稀释液平行做4管，37±1℃水浴保温60±2min，如浓度最大4管均为阳性，最低浓度4管均为阴性，或反应终点的对数平均值的标准差(S)小于0.365时，则实验结果有效，方可按公式计算TAL灵敏度测定值(λc)。当λc在0.5～2.0λb(包括0.5λb和2.0λb)时，方可用于细菌内毒素检查并以λb为该批TAL的灵敏度。
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例 某批号TAL，λb为0.5Eu/ml的灵敏度复核试验结果 管号
1.0Eu/ml
0.5Eu/ml
0.25Eu/ml
0.125Eu/ml
阴性对照
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X1=1.0 X2=1.0 X3=0.5 X4=0.25
lgX1=0 lgX2=0 lgX3=-0.301 lgX4=-0.602
X为4组反应终点的对数值，n=4，代入公式
因S=2.88<0.365，且最大浓度1.0Eu/ml4管均呈阳性，最低浓度0.125Eu/ml4管均呈阴性，故本试验结果有效，可按公式计算TAL灵敏度的λc。
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因TAL灵敏度λc在0.5～2.0λb(包括0.5λb和2.0λb)范围内，故可用于细菌内毒检查并以λb为该批TAL的灵敏度。
目前应用的凝胶法亦称翻转180度判定终点法，是一种定性或半定量方法，对TAL的灵敏度有较高要求。灵敏度过高易致“假阳性”，过低则易致“假阴性”。当TAL的λb小于供试品的内毒素限量时，可采用最大有效稀释度对供品进行稀释加以解决。FDA在LT法准则中提出，注射用药的内毒素阴量按公式X=(K)/(M)计算，X为内毒素限量；K为人与家兔的致热间的剂量；M为家兔的热原剂量。注射用药的M一般为10Eu/kg，即K=10ml/kg，如10%葡萄糖注射液的X=
＝1Eu/kg。故我国部颁“细菌内毒素检查法”中规定：四种大输液应使用灵敏度不超过0.5Eu/ml的TAL。■收稿日期：1999-05-13, 百拇医药