血清Ⅳ型胶原肽在肝纤维化诊断的应用价值
作者：谢仕斌 张宇峰 陈幼明 崇雨田 高志良 姚集鲁
单位：中山医科大学附属第三医院传染病科(510630)
关键词：Ⅳ型胶原；肝纤维化
广东医学990211 【摘要】 目的 探讨血清Ⅳ型胶原肽对肝纤维化诊断的应用价值。方法 用放射免疫法测定164例各种病毒性肝炎患者及30例健康献血者血清Ⅳ型胶原肽水平，其中有66例慢性病毒性肝炎患者做了肝穿刺活检。通过比较各组病毒性肝炎之间及健康献血者血清Ⅳ型胶原水平差异，并结合病理结果分析。结果 肝硬化患者血清Ⅳ型胶原肽水平明显高于其它病毒性肝炎患者及健康对照组，相互比较差异有显著性(P<0.05)。急性肝炎组、慢性肝炎轻、中度组及健康对照组之间血清Ⅳ型胶原水平没有差异。血清Ⅳ型胶原肽水平与肝纤维化程度明显相关，在S4阶段水平最高，但与肝内炎症、坏死程度无明显关系。结论 动态测定血清Ⅳ型胶原肽可以作为反映肝纤维化一项有意义的指标。
, 百拇医药
Clinical significance of serum type Ⅳ collagen for the diagnosis of hepatic fibrosis Xie Shibing, Zhang Yufeng, Chen Youming, et al. Department of Infectious Diseases, Third Affiliated Hospital, Sun Yan-sen University of Medical Sciences, Guangzhou, 510630
【Abstract】 Objective To study the clinical significance of serum type Ⅳ collagen (ⅣC) level for the diagnosis of hepatic fibrosis. Methods Serum content of ⅣC was measured in 164 patients with various viral hepatitis and 30 healthy blood donors by radioimmunoassay, among them, percutaneous liver biopsy was performed in 66 patients with chronic viral hepatitis. Serum ⅣC level was analysed between various groups hepatitis and controls, and then compared to the hepatic histologic findings. Results Serum ⅣC level was significantly higher in liver cirrhosis than that in healthy controls and patients with any other hepatitis (P<0.05), There was no significant difference in serum ⅣC level between the acute viral hepatitis, chronic mild hepatitis and controls. The serum level of ⅣC was correlated with the stages of fibrosis and to be the highest level in stage 4, but not correlated with the grades of inflammation and necrosis of the liver. Conclusion Ⅳ collagen determinations in serum may be useful for the diagnosis of hepatic fibrosis and may provide relatively noninvasive means of following disease progression.
, 百拇医药
【Key words】 Serum Ⅳ collagen Hepatic fibrosis
Ⅳ型胶原(type Ⅳ collagen, Ⅳ-C)是基底膜的主要胶原成份[1]。在正常肝组织内，Ⅳ-C主要分布于肝内血管、淋巴管、胆管的基底膜，肝窦亦存在少许Ⅳ-C，对保持肝窦的开放起着重要作用。在肝纤维化过程中，肝窦内Ⅳ-C明显增加，致肝窦毛细血管化，造成肝细胞血供及营养供给障碍，进一步加重肝细胞损害。近年来研究报道[2～4]，在肝纤维化早期阶段，肝内Ⅳ-C即明显增加，血清中Ⅳ-C含量与肝病的临床和组织学严重性相关。本研究用放射免疫法测定各种病毒性肝炎患者血清Ⅳ-C水平，并结合肝组织病理，探讨血清Ⅳ-C对肝纤维化诊断的实际应用价值。
1 资料与方法
1.1 病例选择 均为本科住院的病毒性肝炎患者，共164例，其中男性123例，女性41例，年龄6～65岁，平均年龄38岁。按1995年5月北京第五次全国传染病会议制定的病毒性肝炎防治方案[5]，急性黄疸性肝炎23例；慢性肝炎(轻度)25例；慢性肝炎(中度)49例；慢性肝炎(重度)37例；肝硬化组37例；正常对照组30例，为健康献血员，标本来自广州中心血站。
, 百拇医药
1.2 研究方法
1.2.1 血清Ⅳ-C测定 抽血5 mL，分离血清后置-20℃备检，于5 d内检测。采用上海海军医学研究所生产的Ⅳ-C放射免疫分析试验盒，正常值范围：38.22±11.88 μg/L。由有经验的放免专业人员按操作说明进行。
1.2.2 肝组织病理 有66例慢性肝炎患者做肝穿刺活检，活检后即抽血测Ⅳ-C。肝组织标本采用常规HE及网状纤维染色，由专一病理医师按慢性肝炎分级分期标准诊断，保证病理诊断的准确性及一致性。
1.3 统计分析 均数的两两比较采用q检验，检验前进行方差齐性检验，方差不齐时对变量行对数转换，方差齐后再采用q检验。
2 结果
2.1 各组病毒性肝炎患者血清Ⅳ-C测定结果 见表1。
, 百拇医药
表1 各组病毒性肝炎血清Ⅳ-C测定结果(
±s，μg/L) 分组
n
Ⅳ-C
lg Ⅳ-C
正常组
30
37.3±8.4
1.560 2±0.101 8*
急性组
23
57.7±40.3
, 百拇医药
1.674 4±0.345 6*
慢性(轻度)
25
44.4±17.4
1.590 7±0.188 1*
慢性(中度)
49
58.3±33.7
1.692 3±0.266 2*
慢性(重度)
37
, 百拇医药
105.3±88.9
1.930 2±0.264 8**
肝硬化
30
123.2±62.0
2.032 7±0.247 1**
注：*相互之间比较P>0.05; **分别与第①，②，③，④组比较，P<0.05，相互之间比较 P>0.052.2 66例肝活检病例血清Ⅳ-C水平与病理分级、分期关系 见表2。
表2 血清Ⅳ-C(μg/L)与病理分级、分期比较结果(±s, μg/L) 病理
, 百拇医药
分级
n
Ⅳ-C
病理
分期
n
lg Ⅳ-C
G1
4
43.7±18.9*
S1
11
1.597 3±0.253 4
, http://www.100md.com
G2
14
52.6±33.2*
S2
15
1.658 6±0.294 7
G3
34
81.7±88.8*
S3
30
, 百拇医药
1.860 7±0.279 0**
G4
14
90.5±58.1*
S4
10
1.959 6±0.467 4**
注：**各组之间相互比较 P>0.05; **与S1、S2比较P<0.05
3 讨论
Ⅳ胶原是主要的基底膜胶原，在肝纤维化过程中，Ⅳ-C胶原明显增加。肝内Ⅳ型胶原主要由储脂细胞及窦内皮细胞产生。Ⅳ型胶原以前胶原形式分泌出来后，再经胶原酶降解，释放入血清。
, 百拇医药
有研究表明[6，7]，血清Ⅳ-C浓度与肝组织炎症活动及血清ALT、AST、TB等没有相关性。本研究表明，在急性黄疸性肝炎，肝组织主要表现为肝细胞变性、坏死及炎症细胞浸润，血清中ALT往往很高，但血清Ⅳ-C浓度没有改变，与正常组比较没有差异，说明肝内炎症、坏死并不影响血清Ⅳ-C浓度。另外，本组病理结果亦显示，肝组织不同炎症活动度分级之间血清Ⅳ-C浓度没有显著性差异。说明血清Ⅳ-C浓度与肝内炎症程度之间没有相关性。
一般来说，急性肝炎及慢性轻度肝炎，肝组织内没有纤维化或存在少量纤维沉积，随着病程进展，在肝组织损伤修复过程中，细胞外基质逐渐沉积，在慢性肝炎重度及肝硬化阶段，肝内纤维化已很明显，致肝组织结构改变。同时，细胞外基质的过度沉积，亦刺激体内胶原降解活动增强，导致血清中胶原降解片段浓度增加。我们的结果表明，血清Ⅳ-C浓度在慢性重度组及肝硬化组最高，与其它组比较差异有显著性。而急性肝炎、慢性轻度及慢性中度肝炎则没有明显升高，与正常组比较差异没有显著性。病理资料显示，在已有明显纤维化的S3、S4期，血清Ⅳ-C浓度最高，较S1、S2期之间差异有显著性。表明血清Ⅳ-C浓度与肝病的严重程度及肝组织纤维化程度相一致，血清Ⅳ-C浓度可以作为反映肝纤维化程度的一项指标。
, 百拇医药
有研究认为[3]，在肝纤维化早期，肝内Ⅳ-C即明显增加，血清中Ⅳ-C浓度在肝纤维化早期即升高。认为血清Ⅳ-C浓度可以作为反映早期肝纤维化指标。但本研究结果相反，在慢性肝炎早期阶段，血清Ⅳ-C没有明显增加，仅在慢性肝炎晚期阶段才有明显增加，表明血清Ⅳ-C并不能作为肝纤维化的早期诊断指标。这可能由于：①肝内胶原以Ⅰ、Ⅲ型为主，约占肝内胶原总量的80%。Ⅳ型胶原仅占小部分，在肝纤维化早期，即使有轻微纤维化，Ⅳ型胶原增加相对来说并不明显。杜卫东等通过动物实验证实[8]，在肝纤维化早期，Ⅳ型前胶原mRNA即迅速升高，但仍然是Ⅲ型前胶原mRNA呈优势表达；②血清Ⅳ-C浓度不仅与Ⅳ-C在肝内沉积有关，而且与Ⅳ-C在肝内降解亦有关，且与后者关系更密切。在肝纤维化早期，主要是胶原的合成、沉积增加，降解较少，在晚期，胶原沉积则刺激体内胶原降解活动增强，血清Ⅳ-C浓度亦相应增加。故血清Ⅳ-C并不能做为肝纤维化的早期诊断指标。
结果表明，动态观察血清Ⅳ型胶原可以作为了解肝纤维化程度的一项指标，且具有易于追踪、动态观察、无损伤等优点，但不宜做为判断早期肝纤维化指标。
, 百拇医药
4 参考文献
1 Brazel D, Pollmer R, Oberbaumer I, et al. Human basement membrane collagen type Ⅳ. Eur J Biochem, 1988, 172:35
2 蔡伊梅，戴祥章，余敏杰，等.病毒性肝炎患者血清Ⅳ型胶原变化及临床意义.中华肝脏病杂志，1996，4(1)：10
3 Tsutsumi M, Urashima S, Matsuda Y, et al. Changes in type Ⅳ collagen content in livers of patients with alcoholic liver disease. Hepatology, 1993, 17(5):820
4 Niemela O, Risteli J, Blake J E, et al. Markers of fibrogenesis and basement membrance formation in alcoholic liver disease: relation to severity, presence of hepatitis, and alcohol intake. Gastroenterology, 1990, 98:1612
, 百拇医药
5 病毒性肝炎防治方案(试行).中华内科杂志，1995，34(11)：768
6 张 涛，张国庆，孙可淳，等.Ⅳ型胶原肽在肝病血清中的变化.北京医科大学学报，1994，26(1)：71
7 Hirayama C, Suzuki H, Takada A, et al. Serum type Ⅳ collagen in various liver diseases in comparison with serum 7S collagen, laminin, and type Ⅲ procollagen peptide. J Gastroenterol, 1996, 31:242
8 杜卫东，张月娥.CCI 4诱导大鼠肝纤维化动物模型Ⅰ、Ⅲ及Ⅳ型胶原生成变化的研究.中华病理学杂志，1997，26(2)：74, http://www.100md.com
单位：中山医科大学附属第三医院传染病科(510630)
关键词：Ⅳ型胶原；肝纤维化
广东医学990211 【摘要】 目的 探讨血清Ⅳ型胶原肽对肝纤维化诊断的应用价值。方法 用放射免疫法测定164例各种病毒性肝炎患者及30例健康献血者血清Ⅳ型胶原肽水平，其中有66例慢性病毒性肝炎患者做了肝穿刺活检。通过比较各组病毒性肝炎之间及健康献血者血清Ⅳ型胶原水平差异，并结合病理结果分析。结果 肝硬化患者血清Ⅳ型胶原肽水平明显高于其它病毒性肝炎患者及健康对照组，相互比较差异有显著性(P<0.05)。急性肝炎组、慢性肝炎轻、中度组及健康对照组之间血清Ⅳ型胶原水平没有差异。血清Ⅳ型胶原肽水平与肝纤维化程度明显相关，在S4阶段水平最高，但与肝内炎症、坏死程度无明显关系。结论 动态测定血清Ⅳ型胶原肽可以作为反映肝纤维化一项有意义的指标。
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Clinical significance of serum type Ⅳ collagen for the diagnosis of hepatic fibrosis Xie Shibing, Zhang Yufeng, Chen Youming, et al. Department of Infectious Diseases, Third Affiliated Hospital, Sun Yan-sen University of Medical Sciences, Guangzhou, 510630
【Abstract】 Objective To study the clinical significance of serum type Ⅳ collagen (ⅣC) level for the diagnosis of hepatic fibrosis. Methods Serum content of ⅣC was measured in 164 patients with various viral hepatitis and 30 healthy blood donors by radioimmunoassay, among them, percutaneous liver biopsy was performed in 66 patients with chronic viral hepatitis. Serum ⅣC level was analysed between various groups hepatitis and controls, and then compared to the hepatic histologic findings. Results Serum ⅣC level was significantly higher in liver cirrhosis than that in healthy controls and patients with any other hepatitis (P<0.05), There was no significant difference in serum ⅣC level between the acute viral hepatitis, chronic mild hepatitis and controls. The serum level of ⅣC was correlated with the stages of fibrosis and to be the highest level in stage 4, but not correlated with the grades of inflammation and necrosis of the liver. Conclusion Ⅳ collagen determinations in serum may be useful for the diagnosis of hepatic fibrosis and may provide relatively noninvasive means of following disease progression.
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【Key words】 Serum Ⅳ collagen Hepatic fibrosis
Ⅳ型胶原(type Ⅳ collagen, Ⅳ-C)是基底膜的主要胶原成份[1]。在正常肝组织内，Ⅳ-C主要分布于肝内血管、淋巴管、胆管的基底膜，肝窦亦存在少许Ⅳ-C，对保持肝窦的开放起着重要作用。在肝纤维化过程中，肝窦内Ⅳ-C明显增加，致肝窦毛细血管化，造成肝细胞血供及营养供给障碍，进一步加重肝细胞损害。近年来研究报道[2～4]，在肝纤维化早期阶段，肝内Ⅳ-C即明显增加，血清中Ⅳ-C含量与肝病的临床和组织学严重性相关。本研究用放射免疫法测定各种病毒性肝炎患者血清Ⅳ-C水平，并结合肝组织病理，探讨血清Ⅳ-C对肝纤维化诊断的实际应用价值。
1 资料与方法
1.1 病例选择 均为本科住院的病毒性肝炎患者，共164例，其中男性123例，女性41例，年龄6～65岁，平均年龄38岁。按1995年5月北京第五次全国传染病会议制定的病毒性肝炎防治方案[5]，急性黄疸性肝炎23例；慢性肝炎(轻度)25例；慢性肝炎(中度)49例；慢性肝炎(重度)37例；肝硬化组37例；正常对照组30例，为健康献血员，标本来自广州中心血站。
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1.2 研究方法
1.2.1 血清Ⅳ-C测定 抽血5 mL，分离血清后置-20℃备检，于5 d内检测。采用上海海军医学研究所生产的Ⅳ-C放射免疫分析试验盒，正常值范围：38.22±11.88 μg/L。由有经验的放免专业人员按操作说明进行。
1.2.2 肝组织病理 有66例慢性肝炎患者做肝穿刺活检，活检后即抽血测Ⅳ-C。肝组织标本采用常规HE及网状纤维染色，由专一病理医师按慢性肝炎分级分期标准诊断，保证病理诊断的准确性及一致性。
1.3 统计分析 均数的两两比较采用q检验，检验前进行方差齐性检验，方差不齐时对变量行对数转换，方差齐后再采用q检验。
2 结果
2.1 各组病毒性肝炎患者血清Ⅳ-C测定结果 见表1。
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表1 各组病毒性肝炎血清Ⅳ-C测定结果(
±s，μg/L) 分组n
Ⅳ-C
lg Ⅳ-C
正常组
30
37.3±8.4
1.560 2±0.101 8*
急性组
23
57.7±40.3
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1.674 4±0.345 6*
慢性(轻度)
25
44.4±17.4
1.590 7±0.188 1*
慢性(中度)
49
58.3±33.7
1.692 3±0.266 2*
慢性(重度)
37
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105.3±88.9
1.930 2±0.264 8**
肝硬化
30
123.2±62.0
2.032 7±0.247 1**
注：*相互之间比较P>0.05; **分别与第①，②，③，④组比较，P<0.05，相互之间比较 P>0.052.2 66例肝活检病例血清Ⅳ-C水平与病理分级、分期关系 见表2。
表2 血清Ⅳ-C(μg/L)与病理分级、分期比较结果(
±s, μg/L) 病理, 百拇医药
分级
n
Ⅳ-C
病理
分期
n
lg Ⅳ-C
G1
4
43.7±18.9*
S1
11
1.597 3±0.253 4
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G2
14
52.6±33.2*
S2
15
1.658 6±0.294 7
G3
34
81.7±88.8*
S3
30
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1.860 7±0.279 0**
G4
14
90.5±58.1*
S4
10
1.959 6±0.467 4**
注：**各组之间相互比较 P>0.05; **与S1、S2比较P<0.05
3 讨论
Ⅳ胶原是主要的基底膜胶原，在肝纤维化过程中，Ⅳ-C胶原明显增加。肝内Ⅳ型胶原主要由储脂细胞及窦内皮细胞产生。Ⅳ型胶原以前胶原形式分泌出来后，再经胶原酶降解，释放入血清。
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有研究表明[6，7]，血清Ⅳ-C浓度与肝组织炎症活动及血清ALT、AST、TB等没有相关性。本研究表明，在急性黄疸性肝炎，肝组织主要表现为肝细胞变性、坏死及炎症细胞浸润，血清中ALT往往很高，但血清Ⅳ-C浓度没有改变，与正常组比较没有差异，说明肝内炎症、坏死并不影响血清Ⅳ-C浓度。另外，本组病理结果亦显示，肝组织不同炎症活动度分级之间血清Ⅳ-C浓度没有显著性差异。说明血清Ⅳ-C浓度与肝内炎症程度之间没有相关性。
一般来说，急性肝炎及慢性轻度肝炎，肝组织内没有纤维化或存在少量纤维沉积，随着病程进展，在肝组织损伤修复过程中，细胞外基质逐渐沉积，在慢性肝炎重度及肝硬化阶段，肝内纤维化已很明显，致肝组织结构改变。同时，细胞外基质的过度沉积，亦刺激体内胶原降解活动增强，导致血清中胶原降解片段浓度增加。我们的结果表明，血清Ⅳ-C浓度在慢性重度组及肝硬化组最高，与其它组比较差异有显著性。而急性肝炎、慢性轻度及慢性中度肝炎则没有明显升高，与正常组比较差异没有显著性。病理资料显示，在已有明显纤维化的S3、S4期，血清Ⅳ-C浓度最高，较S1、S2期之间差异有显著性。表明血清Ⅳ-C浓度与肝病的严重程度及肝组织纤维化程度相一致，血清Ⅳ-C浓度可以作为反映肝纤维化程度的一项指标。
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有研究认为[3]，在肝纤维化早期，肝内Ⅳ-C即明显增加，血清中Ⅳ-C浓度在肝纤维化早期即升高。认为血清Ⅳ-C浓度可以作为反映早期肝纤维化指标。但本研究结果相反，在慢性肝炎早期阶段，血清Ⅳ-C没有明显增加，仅在慢性肝炎晚期阶段才有明显增加，表明血清Ⅳ-C并不能作为肝纤维化的早期诊断指标。这可能由于：①肝内胶原以Ⅰ、Ⅲ型为主，约占肝内胶原总量的80%。Ⅳ型胶原仅占小部分，在肝纤维化早期，即使有轻微纤维化，Ⅳ型胶原增加相对来说并不明显。杜卫东等通过动物实验证实[8]，在肝纤维化早期，Ⅳ型前胶原mRNA即迅速升高，但仍然是Ⅲ型前胶原mRNA呈优势表达；②血清Ⅳ-C浓度不仅与Ⅳ-C在肝内沉积有关，而且与Ⅳ-C在肝内降解亦有关，且与后者关系更密切。在肝纤维化早期，主要是胶原的合成、沉积增加，降解较少，在晚期，胶原沉积则刺激体内胶原降解活动增强，血清Ⅳ-C浓度亦相应增加。故血清Ⅳ-C并不能做为肝纤维化的早期诊断指标。
结果表明，动态观察血清Ⅳ型胶原可以作为了解肝纤维化程度的一项指标，且具有易于追踪、动态观察、无损伤等优点，但不宜做为判断早期肝纤维化指标。
, 百拇医药
4 参考文献
1 Brazel D, Pollmer R, Oberbaumer I, et al. Human basement membrane collagen type Ⅳ. Eur J Biochem, 1988, 172:35
2 蔡伊梅，戴祥章，余敏杰，等.病毒性肝炎患者血清Ⅳ型胶原变化及临床意义.中华肝脏病杂志，1996，4(1)：10
3 Tsutsumi M, Urashima S, Matsuda Y, et al. Changes in type Ⅳ collagen content in livers of patients with alcoholic liver disease. Hepatology, 1993, 17(5):820
4 Niemela O, Risteli J, Blake J E, et al. Markers of fibrogenesis and basement membrance formation in alcoholic liver disease: relation to severity, presence of hepatitis, and alcohol intake. Gastroenterology, 1990, 98:1612
, 百拇医药
5 病毒性肝炎防治方案(试行).中华内科杂志，1995，34(11)：768
6 张 涛，张国庆，孙可淳，等.Ⅳ型胶原肽在肝病血清中的变化.北京医科大学学报，1994，26(1)：71
7 Hirayama C, Suzuki H, Takada A, et al. Serum type Ⅳ collagen in various liver diseases in comparison with serum 7S collagen, laminin, and type Ⅲ procollagen peptide. J Gastroenterol, 1996, 31:242
8 杜卫东，张月娥.CCI 4诱导大鼠肝纤维化动物模型Ⅰ、Ⅲ及Ⅳ型胶原生成变化的研究.中华病理学杂志，1997，26(2)：74, http://www.100md.com