一种显示肥大细胞活化方法的建立
作者：王伟岸 潘国宗 钱家鸣 谭会兵 杨晓鸥
单位：中国医学科学院中国协和医科大学 北京协和医院消化科， 北京 100730
关键词：肥大细胞；活化状态；c-fos
中国医学影像技术000731[摘 要] 目的 建立一种简便的观察肥大细胞活化的方法。方法 对组织切片用阿尔新蓝-番红定性肥大细胞的基础上，采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶法进行 c-fos免疫组织化学染色，同时对取自同一部位的组织进行透射电镜检查观察显示肥大细胞活化状态，并对二者的检查结果进行比较。结果 发现凡透射电镜显示肥大细胞活化的组织，阿尔新蓝-番红染色的细胞c-fos阳性率高，二者呈现一致性。结论 结合c-fos基因表达的组织学染色技术是观察肥大细胞活化的一种实用简便方法。
[中图分类号] R329.2+8 [文献标识码] A
, 百拇医药
[文章编号] 1003-3289(2000)07-0583-02
Establishment of Method on Showing Activation of Mast Cell
WANG Wei-an, PAN Guo-zong, QIAN Jia-ming et al
(Dept of Gastroenterology,Peking Union Medical College Hospital, Peking Union Medical College & Chinese Medical Academy, Beijing 100730, China)
[Abstract] Purpose To establish a new practical method on showing activation of mast cell. Methods On the basis of identifying mast cell by alcian blue staining,the sample was stained c-Fos by immunohistochemistry streptavidin-peroxidase method,and the activation of mast cell on another sample from the same position was showned by electric microscope.comparing the results was done. Results The more the activation of mast cells under electric microscope,the more c-Fos positive mast cells in the sample. Conclusion For showing the activation of mast cell,the method combined c-Fos expression and regular histologic staining is easily performed and practical.
, 百拇医药
[Key words] Mast cell; Activation; c-fos
肥大细胞是参与神经-免疫-内分泌网络调节的一种关键细胞，参与人体多种生理和病理功能的调节[1]。由于常规组织学检查很难准确反映肥大细胞的活化状态，常常采用透射电镜技术观察肥大细胞的活化。因此，本文探讨建立可常规应用的简便准确观察肥大细胞活化的方法。
1 材料和方法
取肠炎和正常人同一部位的肠黏膜组织各两块，分别用Carnoy固定液和戊二醛固定液固定，经处理用于常规组织学、免疫组织化学及电镜检查。常规免疫组织化学切片厚度5μm，透射电镜切片厚度40nm；按文献方法[2]进行肥大细胞阿尔新蓝-番红染色，稍后按链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(streptavidin-peroxidase;SP)法对同一切片进行c-fos的免疫组织化学染色，光学显微镜(简称光镜)观察肥大细胞着色情况，阿尔新蓝-番红使黏膜型肥大细胞显蓝色，而结缔组织型呈现红色，c-fos阳性呈棕色；取自同一部位的组织在透射电镜下观察肥大细胞形态学变化，包括细胞膜和胞内颗粒数的变化。然后，对两种检查方法所显示的肥大细胞活化状态进行比较。
, http://www.100md.com
2 结果
组织切片单纯阿尔新蓝-番红染色可见散在的细胞呈蓝色法，即为黏膜肥大细胞；进一步c-fos免疫组织化学染色可见一些组织切片的蓝色细胞细胞核呈棕色，与电镜显示肥大细胞脱颗粒一致；而蓝色细胞的细胞核未着色或着色细胞数量少的切片对应的电镜观察很少见到肥大细胞脱颗粒。显示c-fos阳性可以反映电镜观察到肥大细胞活化。
3 讨论
肥大细胞是重要的生物活性细胞，其活性的发挥与其内活性物质的释放有关。这些颗粒一般分为两类，一类是细胞分泌后储存在胞浆内的，在受到刺激时释放，另一类是在受到刺激时随时合成和释放的[3]。因此，为探讨肥大细胞在某一病理生理过程中的作用，就必须通过某种方法显示肥大细胞是否活化，而不能仅仅依据肥大细胞胞浆内颗粒的多少。目前常常根据电镜下肥大细胞形态学改变来判断肥大细胞的活化状态，其优点是可通过形态学显示肥大细胞不同的功能状态，包括完全脱颗粒，不完全脱颗粒、非活化状态以及肥大细胞的重新颗粒化，但是不论从标本制作还是从检查手段而言，这种方法都不易广泛开展，因此，选择理想的组织学检测不同活化状态的肥大细胞非常有必要。常规组织学显示方法不论是甲苯胺蓝法还是阿尔新蓝法，均是通过肥大细胞内的分泌颗粒着色来定性肥大细胞的，可分泌颗粒的存在并不意味着肥大细胞处于活化状态，因为在未受到刺激的情况下，肥大细胞的分泌颗粒可长期存在其内。基础研究显示c-fos基因是所有细胞活化的启动基因，因此称为“即刻反应基因”，这种基因的蛋白产物在细胞胞浆合成后并不分泌到细胞外，而是通过某种途径转入细胞核内调控细胞的进一步活化，在一定意义上说，c-fos的表达即意味着细胞活化。研究发现，在肥大细胞活化的早期即有c-fos基因的表达[4]。因此，用c-fos的表达来反映肥大细胞的活性是合理的。本研究中首先采用常用的可以对黏膜型和结缔组织型肥大细胞进行定性的阿尔新蓝-番红法确定肥大细胞，随后采用SP法检测c-fos表达，并与电镜结果比较，发现电镜下显示肥大细胞处于活化状态的组织c-fos阳性率高；反之，组织则无或很少c-fos表达，说明c-fos基因的表达产物c-fos来代表肥大细胞活化是可行的。而与阿尔新蓝-番红法结合对肥大细胞进行定性[3]，增加了特异性。所以，结合c-fos的组织学检查是显示肥大细胞活化的特异性简便实用方法。
, 百拇医药
作者简介：王伟岸(1966—)，男，河南太康县人，医学博士。
[参考文献]
[1] Stenton SR,Vliagoftis H,Befus AD.Role of intestinal mast cells in modulating gastrointestinal pathophysiology[J].Ann Allergy Asthma Immunol,1998,81:1-15.
[2] Kruger PG,B L,Myhr KM, et al.Mast cells and multiple sclerosis:A light and electron microscopic study of mast cells in multiple sclerosis emphasizing staining procedure[J].Acta Neurol Scand,1990,81:31-36.
, 百拇医药
[3] Theoharides TC,Sant GR,E1-Mansoury M,et al.Activation of bladder mast cells in interstitial cystitis:a light and electron microscopic study[J].J Urol,1995,153:629-636.
[4] Lewin I,Nechushtan H,Ke Q, et al.Regulation of AP-1 expression and activity in antigen-stimulated mast cells:the role playes by protein kinase C and the possible involvement of Fos interacting protein[J].Blood,1993,82:3745-3751.
(收稿日期：2000-03-21), http://www.100md.com
单位：中国医学科学院中国协和医科大学 北京协和医院消化科， 北京 100730
关键词：肥大细胞；活化状态；c-fos
中国医学影像技术000731[摘 要] 目的 建立一种简便的观察肥大细胞活化的方法。方法 对组织切片用阿尔新蓝-番红定性肥大细胞的基础上，采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶法进行 c-fos免疫组织化学染色，同时对取自同一部位的组织进行透射电镜检查观察显示肥大细胞活化状态，并对二者的检查结果进行比较。结果 发现凡透射电镜显示肥大细胞活化的组织，阿尔新蓝-番红染色的细胞c-fos阳性率高，二者呈现一致性。结论 结合c-fos基因表达的组织学染色技术是观察肥大细胞活化的一种实用简便方法。
[中图分类号] R329.2+8 [文献标识码] A
, 百拇医药
[文章编号] 1003-3289(2000)07-0583-02
Establishment of Method on Showing Activation of Mast Cell
WANG Wei-an, PAN Guo-zong, QIAN Jia-ming et al
(Dept of Gastroenterology,Peking Union Medical College Hospital, Peking Union Medical College & Chinese Medical Academy, Beijing 100730, China)
[Abstract] Purpose To establish a new practical method on showing activation of mast cell. Methods On the basis of identifying mast cell by alcian blue staining,the sample was stained c-Fos by immunohistochemistry streptavidin-peroxidase method,and the activation of mast cell on another sample from the same position was showned by electric microscope.comparing the results was done. Results The more the activation of mast cells under electric microscope,the more c-Fos positive mast cells in the sample. Conclusion For showing the activation of mast cell,the method combined c-Fos expression and regular histologic staining is easily performed and practical.
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[Key words] Mast cell; Activation; c-fos
肥大细胞是参与神经-免疫-内分泌网络调节的一种关键细胞，参与人体多种生理和病理功能的调节[1]。由于常规组织学检查很难准确反映肥大细胞的活化状态，常常采用透射电镜技术观察肥大细胞的活化。因此，本文探讨建立可常规应用的简便准确观察肥大细胞活化的方法。
1 材料和方法
取肠炎和正常人同一部位的肠黏膜组织各两块，分别用Carnoy固定液和戊二醛固定液固定，经处理用于常规组织学、免疫组织化学及电镜检查。常规免疫组织化学切片厚度5μm，透射电镜切片厚度40nm；按文献方法[2]进行肥大细胞阿尔新蓝-番红染色，稍后按链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(streptavidin-peroxidase;SP)法对同一切片进行c-fos的免疫组织化学染色，光学显微镜(简称光镜)观察肥大细胞着色情况，阿尔新蓝-番红使黏膜型肥大细胞显蓝色，而结缔组织型呈现红色，c-fos阳性呈棕色；取自同一部位的组织在透射电镜下观察肥大细胞形态学变化，包括细胞膜和胞内颗粒数的变化。然后，对两种检查方法所显示的肥大细胞活化状态进行比较。
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2 结果
组织切片单纯阿尔新蓝-番红染色可见散在的细胞呈蓝色法，即为黏膜肥大细胞；进一步c-fos免疫组织化学染色可见一些组织切片的蓝色细胞细胞核呈棕色，与电镜显示肥大细胞脱颗粒一致；而蓝色细胞的细胞核未着色或着色细胞数量少的切片对应的电镜观察很少见到肥大细胞脱颗粒。显示c-fos阳性可以反映电镜观察到肥大细胞活化。
3 讨论
肥大细胞是重要的生物活性细胞，其活性的发挥与其内活性物质的释放有关。这些颗粒一般分为两类，一类是细胞分泌后储存在胞浆内的，在受到刺激时释放，另一类是在受到刺激时随时合成和释放的[3]。因此，为探讨肥大细胞在某一病理生理过程中的作用，就必须通过某种方法显示肥大细胞是否活化，而不能仅仅依据肥大细胞胞浆内颗粒的多少。目前常常根据电镜下肥大细胞形态学改变来判断肥大细胞的活化状态，其优点是可通过形态学显示肥大细胞不同的功能状态，包括完全脱颗粒，不完全脱颗粒、非活化状态以及肥大细胞的重新颗粒化，但是不论从标本制作还是从检查手段而言，这种方法都不易广泛开展，因此，选择理想的组织学检测不同活化状态的肥大细胞非常有必要。常规组织学显示方法不论是甲苯胺蓝法还是阿尔新蓝法，均是通过肥大细胞内的分泌颗粒着色来定性肥大细胞的，可分泌颗粒的存在并不意味着肥大细胞处于活化状态，因为在未受到刺激的情况下，肥大细胞的分泌颗粒可长期存在其内。基础研究显示c-fos基因是所有细胞活化的启动基因，因此称为“即刻反应基因”，这种基因的蛋白产物在细胞胞浆合成后并不分泌到细胞外，而是通过某种途径转入细胞核内调控细胞的进一步活化，在一定意义上说，c-fos的表达即意味着细胞活化。研究发现，在肥大细胞活化的早期即有c-fos基因的表达[4]。因此，用c-fos的表达来反映肥大细胞的活性是合理的。本研究中首先采用常用的可以对黏膜型和结缔组织型肥大细胞进行定性的阿尔新蓝-番红法确定肥大细胞，随后采用SP法检测c-fos表达，并与电镜结果比较，发现电镜下显示肥大细胞处于活化状态的组织c-fos阳性率高；反之，组织则无或很少c-fos表达，说明c-fos基因的表达产物c-fos来代表肥大细胞活化是可行的。而与阿尔新蓝-番红法结合对肥大细胞进行定性[3]，增加了特异性。所以，结合c-fos的组织学检查是显示肥大细胞活化的特异性简便实用方法。
, 百拇医药
作者简介：王伟岸(1966—)，男，河南太康县人，医学博士。
[参考文献]
[1] Stenton SR,Vliagoftis H,Befus AD.Role of intestinal mast cells in modulating gastrointestinal pathophysiology[J].Ann Allergy Asthma Immunol,1998,81:1-15.
[2] Kruger PG,B L,Myhr KM, et al.Mast cells and multiple sclerosis:A light and electron microscopic study of mast cells in multiple sclerosis emphasizing staining procedure[J].Acta Neurol Scand,1990,81:31-36.
, 百拇医药
[3] Theoharides TC,Sant GR,E1-Mansoury M,et al.Activation of bladder mast cells in interstitial cystitis:a light and electron microscopic study[J].J Urol,1995,153:629-636.
[4] Lewin I,Nechushtan H,Ke Q, et al.Regulation of AP-1 expression and activity in antigen-stimulated mast cells:the role playes by protein kinase C and the possible involvement of Fos interacting protein[J].Blood,1993,82:3745-3751.
(收稿日期：2000-03-21), http://www.100md.com