喉鳞癌组织中p15蛋白表达的研究
作者：董洪松 梁传余 张世羽 周光耀 黄志忠 聂国辉
单位：董洪松(深圳市红十字会医院耳鼻咽喉科 广东深圳，518029)；黄志忠(深圳市红十字会医院耳鼻咽喉科 广东深圳，518029)；聂国辉(深圳市红十字会医院耳鼻咽喉科 广东深圳，518029)；梁传余(华西医科大学附属第一临床医学院耳鼻咽喉科)；周光耀(华西医科大学附属第一临床医学院耳鼻咽喉科)；张世羽(华西医科大学附属第一临床医学院病理科)
关键词：
临床耳鼻咽喉科杂志000316 1994年，美国Beach研究小组克隆了p15基因。它定位于9号染色体p21，是一种能抑制细胞过度增殖的细胞周期调节基因，在白血病、神经胶质瘤、肺癌、黑色素瘤、骨肉瘤、非霍奇金淋巴瘤等多种肿瘤中，发现p15基因的纯合子缺失或过度甲基化导致该基因的失活。本研究采用LSAB免疫组化方法，检测了p15基因在喉鳞癌组织和声带息肉良性组织中的蛋白表达情况。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 研究对象
55例喉鳞癌标本及10例声带息肉标本均取自华西医科大学第一临床医学院病理科1988～1995年手术切除喉鳞癌组织石蜡标本，均有完整临床病理资料。术前未经放疗和化疗，男46例，女9例；年龄26～75岁，平均53.4岁。其中有淋巴结转移24例，无淋巴结转移31例。参照1987年UICC制定的TNM分期诊断标准进行临床分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期14例，Ⅲ期12例，Ⅳ期18例。对照组声带息肉组织标本：男8例，女2例；年龄24～63岁，平均47.5岁。
所有石蜡标本行4 μm厚切片，喉鳞癌组织经HE染色复查病理分级，G1(高分化)23例，G2(中分化)19例，G3(低分化)13例。息肉组织亦经HE染色复查确定其病理诊断。
1.2 实验方法
, 百拇医药
①LSAB免疫组化方法。抗p15蛋白多克隆抗体为Santa Cruz Biotech公司产品，LSAB试剂盒为DAKO公司产品。以预试验标准切片为阳性对照，PBS代替第一抗体为阴性对照。②光镜下结果判断：蛋白表达位于细胞核或细胞核和细胞浆为阳性，染色信号为棕黄色。选切片四周和中央5个高倍视野数1 000个细胞，根据阳性细胞比例分别予以记录，具体表达为：无阳性细胞，“-”；阳性细胞数<25%，“+”；阳性细胞数25%～50%，“
”；阳性细胞数>50%～75%，“
”；阳性细胞数>75%，“
”。数据结果的统计和分析采用SAS软件χ2检验。
2 结果
, http://www.100md.com p15蛋白在喉鳞癌组织中阳性表达率60%(33/55)，且染色较弱，在声带息肉组织中阳性表达率为100%(10/10)，并且染色较强(图1，2)。两者比较差异有显著性(P<0.05)(表1)。
表1 p15蛋白在喉鳞癌和声带息肉中的表达 项目
例数
-
+
阳性率(%)
声带息肉
, 百拇医药
10
0
0
1
4
5
100.0
喉鳞癌
55
22
7
12
8
6
, http://www.100md.com
60.0
图1 息肉组织中细胞呈胞核型强阳性棕黄色显色，周围间质未着色；
图2 癌细胞呈胞核型弱阳性显色
结果发现：随着临床分期的递增，p15蛋白阳性表达率逐渐下降；喉鳞癌组织分化程度越高，p15蛋白阳性表达率越高；组织分化程度越低，阳性表达率越低；有淋巴结转移者，p15阳性表达率低；无淋巴结转移者，p15蛋白阳性表达率高(表2)。
表2 p15蛋白表达与喉鳞癌临床分期、组织学分级、淋巴结转移的关系 项目
例数
, http://www.100md.com
阳性例数(%)
P值
临床分期
Ⅰ～Ⅱ
Ⅲ～Ⅳ
25
30
19(76.0)
14(46.7)
<0.05
病理分级
G1～G2
, 百拇医药
G3
40
15
28(70.0)
5(33.3)
<0.05
颈淋巴结转移
(-)
(+)
31
24
23(74.2)
10(41.7)
, 百拇医药
<0.05
3 讨论
Stone等(1995)发现p15在许多组织类型中表达。Washimi等(1995)推断p15基因可能在肺癌形成中起作用。本实验显示p15蛋白在喉鳞癌阳性表达率仅60%，在声带息肉组织中表达率为100%，两者比较差异有显著性，提示p15的表达与喉鳞癌发生可能有一定的相关性。
随着临床分期的递增，p15蛋白阳性表达率逐渐下降，同时p15阳性表达率亦随组织分化程度的降低而降低，说明p15蛋白表达与喉鳞癌的临床分期、病理分级有相关性。p15蛋白阳性表达率在有无淋巴结转移上差异显著，说明检测p15蛋白对喉鳞癌预后判断可能有帮助。但p15蛋白在喉鳞癌组织中阳性率仍有60%，在喉鳞癌检测的临床实用意义尚须进一步观察。
(本文图1，2见插页第3页)
收稿日期：1999-01-06, 百拇医药
单位：董洪松(深圳市红十字会医院耳鼻咽喉科 广东深圳，518029)；黄志忠(深圳市红十字会医院耳鼻咽喉科 广东深圳，518029)；聂国辉(深圳市红十字会医院耳鼻咽喉科 广东深圳，518029)；梁传余(华西医科大学附属第一临床医学院耳鼻咽喉科)；周光耀(华西医科大学附属第一临床医学院耳鼻咽喉科)；张世羽(华西医科大学附属第一临床医学院病理科)
关键词：
临床耳鼻咽喉科杂志000316 1994年，美国Beach研究小组克隆了p15基因。它定位于9号染色体p21，是一种能抑制细胞过度增殖的细胞周期调节基因，在白血病、神经胶质瘤、肺癌、黑色素瘤、骨肉瘤、非霍奇金淋巴瘤等多种肿瘤中，发现p15基因的纯合子缺失或过度甲基化导致该基因的失活。本研究采用LSAB免疫组化方法，检测了p15基因在喉鳞癌组织和声带息肉良性组织中的蛋白表达情况。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 研究对象
55例喉鳞癌标本及10例声带息肉标本均取自华西医科大学第一临床医学院病理科1988～1995年手术切除喉鳞癌组织石蜡标本，均有完整临床病理资料。术前未经放疗和化疗，男46例，女9例；年龄26～75岁，平均53.4岁。其中有淋巴结转移24例，无淋巴结转移31例。参照1987年UICC制定的TNM分期诊断标准进行临床分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期14例，Ⅲ期12例，Ⅳ期18例。对照组声带息肉组织标本：男8例，女2例；年龄24～63岁，平均47.5岁。
所有石蜡标本行4 μm厚切片，喉鳞癌组织经HE染色复查病理分级，G1(高分化)23例，G2(中分化)19例，G3(低分化)13例。息肉组织亦经HE染色复查确定其病理诊断。
1.2 实验方法
, 百拇医药
①LSAB免疫组化方法。抗p15蛋白多克隆抗体为Santa Cruz Biotech公司产品，LSAB试剂盒为DAKO公司产品。以预试验标准切片为阳性对照，PBS代替第一抗体为阴性对照。②光镜下结果判断：蛋白表达位于细胞核或细胞核和细胞浆为阳性，染色信号为棕黄色。选切片四周和中央5个高倍视野数1 000个细胞，根据阳性细胞比例分别予以记录，具体表达为：无阳性细胞，“-”；阳性细胞数<25%，“+”；阳性细胞数25%～50%，“
”；阳性细胞数>50%～75%，“”；阳性细胞数>75%，“”。数据结果的统计和分析采用SAS软件χ2检验。2 结果
, http://www.100md.com p15蛋白在喉鳞癌组织中阳性表达率60%(33/55)，且染色较弱，在声带息肉组织中阳性表达率为100%(10/10)，并且染色较强(图1，2)。两者比较差异有显著性(P<0.05)(表1)。
表1 p15蛋白在喉鳞癌和声带息肉中的表达 项目
例数
-
+
阳性率(%)
声带息肉
, 百拇医药
10
0
0
1
4
5
100.0
喉鳞癌
55
22
7
12
8
6
, http://www.100md.com
60.0
图1 息肉组织中细胞呈胞核型强阳性棕黄色显色，周围间质未着色；
图2 癌细胞呈胞核型弱阳性显色
结果发现：随着临床分期的递增，p15蛋白阳性表达率逐渐下降；喉鳞癌组织分化程度越高，p15蛋白阳性表达率越高；组织分化程度越低，阳性表达率越低；有淋巴结转移者，p15阳性表达率低；无淋巴结转移者，p15蛋白阳性表达率高(表2)。
表2 p15蛋白表达与喉鳞癌临床分期、组织学分级、淋巴结转移的关系 项目
例数
, http://www.100md.com
阳性例数(%)
P值
临床分期
Ⅰ～Ⅱ
Ⅲ～Ⅳ
25
30
19(76.0)
14(46.7)
<0.05
病理分级
G1～G2
, 百拇医药
G3
40
15
28(70.0)
5(33.3)
<0.05
颈淋巴结转移
(-)
(+)
31
24
23(74.2)
10(41.7)
, 百拇医药
<0.05
3 讨论
Stone等(1995)发现p15在许多组织类型中表达。Washimi等(1995)推断p15基因可能在肺癌形成中起作用。本实验显示p15蛋白在喉鳞癌阳性表达率仅60%，在声带息肉组织中表达率为100%，两者比较差异有显著性，提示p15的表达与喉鳞癌发生可能有一定的相关性。
随着临床分期的递增，p15蛋白阳性表达率逐渐下降，同时p15阳性表达率亦随组织分化程度的降低而降低，说明p15蛋白表达与喉鳞癌的临床分期、病理分级有相关性。p15蛋白阳性表达率在有无淋巴结转移上差异显著，说明检测p15蛋白对喉鳞癌预后判断可能有帮助。但p15蛋白在喉鳞癌组织中阳性率仍有60%，在喉鳞癌检测的临床实用意义尚须进一步观察。
(本文图1，2见插页第3页)
收稿日期：1999-01-06, 百拇医药