N-硝基-L-精氨酸对吗啡依赖小鼠催促戒断反应的治疗作用及对吗啡耐受性的影响
作者：赵晶 徐贵丽 苏国丽
单位：中国人民解放军成都军区昆明总医院 昆明 650032
关键词：N-硝基-L-精氨酸；吗啡；依赖；耐受；戒断症状
N 摘 要 目的：研究一氧化氮合酶(NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸(LNNA)对吗啡依赖小鼠催促戒断反应的治疗作用。方法：采用小鼠戒断模型，观察不同给药途径(ip和ig)，不同剂量的LNNA对吗啡依赖小鼠戒断综合症的治疗效果。结果：NOS抑制剂LNNA可明显延长戒断小鼠跳跃潜伏期，减少小鼠的戒断跳跃反应次数，且抑制其腹泻症状。结论：NOS抑制剂LNNA可延缓吗啡耐受。
中图分类号 R964
EFFECTS OF N-NITRO-L-ARGININE ON MORPHINE TOLERANCE AND ANTAGONIST -PRECIPITATED WITHDRAWL OF MORPHINE-DEPENDENT MICE
, 百拇医药
Zhao Jing，Xu Guili，Su Guoli
(Kunming General Hospital of Chengdu Military Region,Kunming 650032)
Abstract AIM To investigate the effects of N-Nitro-L-Arginine(LNNA) on antagonist-precipitated withdrawl of morphine-dependent mice.METHODS The inhibitory effects of different dosages of LNNA by ig and ip administration on abstinent syndrome induced by naloxone in morphine-dependent mice were observed,and tolerance of pain was determined by hot plate method.RESULTS LNNA prolongated tolerance of analgesic effect, decreased jump and inhibited diarrea.CONCLUSION LNNA controls the abstinence syndromes of morphine addicted mice, prolongates morphine tolerance and shows less toxicity.
, 百拇医药
Key words NG-nitro-L-arginine; Morphine; Dependence; Tolerance; Antagonist- precipitated withdrawl
近年国外研究发现，吗啡类药物依赖及耐受与NMDA/NO系统有关[1]。国外有报道指出[2],腹腔注射一氧化氮合酶(Nitric Wxide Synthace,NOS)抑制剂可对抗小鼠对阿片类药物的依赖，同时，NOS抑制剂与吗啡合用时能降低吗啡耐受，国内目前尚无该方面的报道。本文采用小鼠吗啡依赖模型，对NG-硝基-L-精氨酸(LNNA)治疗戒断反应及吗啡镇痛耐受性的效果进行研究，为寻找一条新的阿片类药物依赖治疗途径打下基础。
1 材料与方法
1.1 动物 昆明种小鼠，♀♂兼用，体重18g～22g，中国科学院昆明动物研究所提供(动物合格证号 滇实动证第9712号)。
, 百拇医药
1.2 药品 吗啡(中国药品生物制品检定所，批号 1201-9612)，临用时以0.1mol.L-1的HCl溶解后，再用生理盐水稀释至所需浓度，pH为6～7；LNNA(美国Sigma公司，批号 A011150101)；盐酸纳洛酮原料药(军事医学科学院毒物药物研究所提供)。
1.3 吗啡耐受实验模型的建立 取♀性昆明种小鼠于55℃±1℃的热板上测定初痛阈，将初痛阈低于5s或超过30s的小鼠剔除。合格小鼠随机分为3组，每组8只。对照组每天sc 5mg.kg-1吗啡，同时ip生理盐水。治疗组在给予吗啡的同时，分别 ip 2、4mg.kg-1LNNA。每日给吗啡30min后测痛阈，共测5d。
1.4 吗啡依赖模型的建立 采用小剂量递增法[3]吗啡剂量从25mg.kg-1增至150mg.kg-1，sc 4.5d，经纳洛酮(5mg.kg-1)催瘾后，跳跃反应率为100%的小鼠为理想的小鼠吗啡依赖模型。
, 百拇医药
1.5 实验方法 (1)LNNA ip 实验组 昆明种小鼠45只，按体重均衡原则随机分为5组，每组9只。吗啡对照组：每天sc吗啡，于催瘾前30min ip生理盐水；LNNA ip (Ⅰ)组分3小组：每天sc吗啡和LNNA ip 4mg.kg-1，分两次给药。ip LNNA(Ⅱ)组：每天sc吗啡，于催瘾前30min ip LNNA，剂量分别为2、4、8mg.kg-1。(2)LNNA ig 治疗组 昆明种小鼠32只，♀♂兼用，按体重均衡原则随机分为4组，每组8只。吗啡对照组：每天sc吗啡，于催瘾前1h ig 0.5%西黄氏胶。LNNA ig 实验组：每天sc吗啡，于催瘾前1h ig LNNA，剂量分别为2、4、8mg.kg-1。
各组小鼠于末次注射后6h，ip 5mg.kg-1纳洛酮催瘾，记录20min内小鼠的跳跃反应数，戒断前后1h内的体重变化，跳跃潜伏期及腹泻等症状。1h后称重并处死对照组和每日 ip LNNA(4mg.kg-1)组小鼠，取出脾脏和胸腺称重并与生理盐水组比较。各数据进行t检验。
, 百拇医药
1.6 NO合酶抑制剂LNNA急性毒性实验 昆明种小鼠16只，♀♂兼用，按体重均衡原则随机分组，每组8只。LNNA ig实验组：给药剂量为2 000mg.kg-1。尾静脉注射LNNA实验组：用75%的酒精棉球擦小鼠尾，扩张尾静脉，经尾静脉注射37.5mg.kg-1的LNNA。两组小鼠给药后观察7d，记录动物死亡数。
2 实验结果
2.1 LNNA对吗啡耐受性的影响 单独给吗啡对照组，sc吗啡第1d出现明显镇痛作用，连续注射给药，吗啡镇痛作用下降，至第5d，已无镇痛作用。LNNA ip 2、4mg.kg-1组，在给药第1d，吗啡有明显镇痛作用，至第5d，吗啡仍有镇痛作用，4mg.kg-1剂量组与单独给吗啡组比较有显著性差异(P<0.05)，而两高低剂量组之间无显著性差异。
, 百拇医药
表1 NG-硝基-L-精氨酸(LNNA)对吗啡耐受性的影响(n=9)
组 别
LNNA剂量
(mg.kg-1)
痛 阈
实验前
1
2
3
4
5(d)
吗啡对照组…
, http://www.100md.com
20.10±5.1
44.75±14.7d
46.40±14.5d
31.50±14.2b
28.00±14.2
22.3±15.6
LNNA ip实验组
2.0
22.80±7.0
56.90±6.7bf
48.00±13.6b
, 百拇医药
30.12±8.6
40.00±14.3bf
38.40±13.1bf
4.0
20.40±3.3
52.00±12.6b
47.25±13.2b
35.00±18.3bf
38.50±16.2b
35.90±13.5b
, http://www.100md.com
注：与实验前比较，bP<0.05,dP<0.001;与吗啡对照组比较，eP>0.05,fP<0.05
2.2 LNNA对吗啡依赖小鼠戒断症状的影响 腹腔注射LNNA (Ⅰ)组与对照组比较，LNNA可抑制小鼠体重下降及跳跃反应，但对跳跃潜伏期无显著性影响。LNNA (Ⅱ)组与对照组比较，2mg.kg-1剂量组对戒断症状无影响。而4、8mg.kg-1剂量组可明显抑制体重下降及跳跃反应次数，并延长跳跃潜伏期，且8mg.kg-1剂量组的作用明显强于4mg.kg-1剂量组。除此之外，LNNA还对腹泻有治疗作用。经纳洛酮催瘾后，对照组腹泻症状明显，而ip LNNA可抑制小鼠的腹泻症状，8mg.kg-1剂量组可明显抑制小鼠腹泻症状(P<0.05)，结果见表2。
, http://www.100md.com
表2 腹腔注射LNNA对小鼠戒断症状的影响(n=9)
组 别
LNNA剂量
(mg.kg-1)
体重变化
(g)
跳跃次数
(次/20min)
跳跃潜伏期
(min)
动物跳跃率
(%)
, http://www.100md.com
动物腹泻率
(%)
吗啡对照组…
0.70±0.41
41.33±27.77
4.40±4.19
100.0
67.0
LNNA (Ⅰ)组
4.00
0.32±0.22b
14.00±10.00b
, 百拇医药
10.11±7.16
77.7
44.0
LNNA (Ⅱ)组
2.00
0.58±0.70
50.75±38.61
5.00±3.85
100.0
100.0
4.00
0.44±0.19
, 百拇医药
83.00±13.00d
9.00±7.52
75.0
37.5
8.00
0.27±0.18b
4.89±8.72c
56.00±3.97d
33.3
0.0b
注：与吗啡对照组比较，bP<0.05,cP<0.01,dP<0.001
, 百拇医药
将LNNA(Ⅰ)组和吗啡对照组动物于催瘾1h后处死，取脾脏、胸腺称重，按公式脾脏(胸腺)指数=脾脏(胸腺)重量/体重，计算其指数，并与生理盐水组比较。两组的胸腺指数与生理盐水组相比有显著性差异，而脾脏指数无显著性差异，结果见表3。
表3 吗啡和LNNA对小鼠脾脏 胸腺重量的影响(n=9)
组 别
脾 脏
胸 腺
重量(g)
指数(g.g-1×103)
重量(g)
指数(g.g-1×103)
, 百拇医药
生理盐水组
0.618±0.028
3.00±1.00
0.060±0.044
2.96±2.22
吗啡对照组
0.047±0.015
2.24±0.80
0.019±0.011
0.92±0.48b
LNNA ip(I)组
, 百拇医药
0.043±0.016
2.04±0.66
0.020±0.011
0.92±0.48b
注：与NS组比较，bP<0.05
2.3 LNNA对小鼠戒断症状的影响 腹腔注射给予2.0、4.0和8.0mg.kg-13个不同剂量的LNNA治疗后，3个剂量均可抑制催促戒断后小鼠体重下降；2mg.kg-1LNNA对小鼠的跳跃反应无明显抑制作用，4、8mg.kg-1LNNA则可极显著地抑制小鼠的跳跃反应。3个剂量均可极显著地延长小鼠的跳跃潜伏期(P<0.01;P<0.001)，并抑制腹泻症状的发生。结果见表4。
, 百拇医药
表4 LNNA对小鼠戒断症状的影响(n=8)
LNNA剂量
(mg.kg-1)
体重变化
(g)
跳跃次数
(次/20min)
跳跃潜伏期
(min)
动物腹泻率
(%)
动物跳跃率
, 百拇医药
(%)
吗啡对照组…
1.05±0.21
99.00±38.18
3.00±1.44
100.0
100.0
LNNA实验组
2.00
0.35±0.15c
40.13±49.90
13.00±7.62c
, 百拇医药
50.0
62.5
4.00
0.43±0.37b
7.63±12.27d
19.38±1.19d
0.0
25.0
8.00
0.63±0.19b
8.75±10.32d
, 百拇医药
14.13±6.49d
50.0
62.5
注：与吗啡对照组比较,bP<0.05,cP<0.01,dP<0.001
2.4 LNNA急性毒性实验 两组动物分别尾静脉注射37.5mg.kg-1和 ig 2 000mg.kg-1LNNA，给药后观察7d，7d内小鼠生长正常，活动自如，无死亡。
3 讨 论
本实验采用吗啡建立了标准的成瘾模型，经纳洛酮催瘾后，小鼠表现出明显的跳跃反应和腹泻症状，证明依赖模型是成功的。通过吗啡对照组和LNNA治疗组戒断症状的比较，发现发生跳跃反应多的动物，其腹泻机会亦多。从表2可见，对照组跳跃动物数为100%，腹泻动物数为66.7%；而治疗组(8mg.kg-1)跳跃动物数只有33.3%，腹泻动物数为零。在表3中，对照组中跳跃动物数高的腹泻发生率均高，为100%，而治疗组，两者都下降。可见，跳跃反应和腹泻是戒断反应的重要指标。从表2、表3可见，实验建立了理想的成瘾模型，在此模型上本实验进行了NOS抑制剂LNNA对吗啡耐受及依赖形成的影响。LNNA属于L-精氨酸同类物。L-精氨酸是合成NO的底物，LNNA通过竟争性占领L-精氨酸的结合部位，抑制NO合成。近年来研究表明[1]，NO可能介导了吗啡的镇痛作用、免疫调节以及增加脑局部血流和戒断反应等多种作用。可见抑制NO合成，可影响吗啡戒断反应及吗啡镇痛作用。
, 百拇医药
有研究发现，NOS抑制剂本身在经典的镇痛实验中并无镇痛作用，但可阻止吗啡耐受性和依赖性的产生。Kolesnikov[3]等采用不同给药方案及给予不同剂量的NOS抑制剂NO2Arg进行了深入的研究，结果显示，NO2Arg能延缓吗啡耐受且阻止吗啡依赖的产生。本实验结果同上述情况一致。NOS抑制剂具有延缓耐受性的作用，可能与抑制NO合成有关。因为NO参与了外周痛觉、脊髓及其以上水平的痛觉调制。同时，本实验对ip和ig两种给药方式的效果和剂量相关性进行了研究。两种给药途径的治疗效果无显著性差异(P>0.05)，对吗啡依赖小鼠的戒断症状均有较好的抑制作用。在剂量相关性方面的研究显示，ip和ig给药都无剂量相关性，4mg.kg-1与8mg.kg-1具有相同效果，两剂量组之间无显著性差异(P>0.05)。而国外有研究表明，NOS抑制剂的作用在2、4、8mg.kg-1范围内具有剂量依赖性。存在此差异，可能是由于动物品种、实验条件、药品等之间有差异。
, 百拇医药
目前国内尚无关于NOS抑制剂毒性的研究，本实验在这方面进行了初步讨探。采用ig和尾静脉注射两种给药方式，LNNA ig的剂量为2 000mg.kg-1，尾静脉注射剂量为37.5mg.kg-1，结果表明LNNA毒性很小。而在实际运用中剂量极低，一般小鼠只需4～8mg.kg-1。因而LNNA使用时比较安全。
本研究结果表明，NOS抑制剂LNNA用于阿片类药物依赖治疗有很好的应用前景。
作者简介：赵晶，女，理学博士，副主任药师。中国药学会医院药学专业委员会委员，全军新药审评委员会委员。
苏国丽，贵阳医学院实习学员。
参考文献：
, http://www.100md.com
1 钟慈声，孙安阳.一氧化氮的生物医学.第一版.上海：上海医科大学出版社，1997；213
2 刘屏，陈世铭，陈慧英等.钙拮抗剂抗胆碱药对吗啡依赖小鼠催促戒断症状的治疗作用.中国药物依赖性通报，1996;5(1):16
3 Y. A.Kolesnirov，C. G.Pick，G.Ciszewska.et al.Blockade of tolerance to morphine but not to opioids by a nitric oxide synthase inhibitor.Proc.natl.Acod Sci USA,1993;90:5163
收稿日期：1999-05-06
修改日期：1999-10-08, http://www.100md.com
单位：中国人民解放军成都军区昆明总医院 昆明 650032
关键词：N-硝基-L-精氨酸；吗啡；依赖；耐受；戒断症状
N 摘 要 目的：研究一氧化氮合酶(NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸(LNNA)对吗啡依赖小鼠催促戒断反应的治疗作用。方法：采用小鼠戒断模型，观察不同给药途径(ip和ig)，不同剂量的LNNA对吗啡依赖小鼠戒断综合症的治疗效果。结果：NOS抑制剂LNNA可明显延长戒断小鼠跳跃潜伏期，减少小鼠的戒断跳跃反应次数，且抑制其腹泻症状。结论：NOS抑制剂LNNA可延缓吗啡耐受。
中图分类号 R964
EFFECTS OF N-NITRO-L-ARGININE ON MORPHINE TOLERANCE AND ANTAGONIST -PRECIPITATED WITHDRAWL OF MORPHINE-DEPENDENT MICE
, 百拇医药
Zhao Jing，Xu Guili，Su Guoli
(Kunming General Hospital of Chengdu Military Region,Kunming 650032)
Abstract AIM To investigate the effects of N-Nitro-L-Arginine(LNNA) on antagonist-precipitated withdrawl of morphine-dependent mice.METHODS The inhibitory effects of different dosages of LNNA by ig and ip administration on abstinent syndrome induced by naloxone in morphine-dependent mice were observed,and tolerance of pain was determined by hot plate method.RESULTS LNNA prolongated tolerance of analgesic effect, decreased jump and inhibited diarrea.CONCLUSION LNNA controls the abstinence syndromes of morphine addicted mice, prolongates morphine tolerance and shows less toxicity.
, 百拇医药
Key words NG-nitro-L-arginine; Morphine; Dependence; Tolerance; Antagonist- precipitated withdrawl
近年国外研究发现，吗啡类药物依赖及耐受与NMDA/NO系统有关[1]。国外有报道指出[2],腹腔注射一氧化氮合酶(Nitric Wxide Synthace,NOS)抑制剂可对抗小鼠对阿片类药物的依赖，同时，NOS抑制剂与吗啡合用时能降低吗啡耐受，国内目前尚无该方面的报道。本文采用小鼠吗啡依赖模型，对NG-硝基-L-精氨酸(LNNA)治疗戒断反应及吗啡镇痛耐受性的效果进行研究，为寻找一条新的阿片类药物依赖治疗途径打下基础。
1 材料与方法
1.1 动物 昆明种小鼠，♀♂兼用，体重18g～22g，中国科学院昆明动物研究所提供(动物合格证号 滇实动证第9712号)。
, 百拇医药
1.2 药品 吗啡(中国药品生物制品检定所，批号 1201-9612)，临用时以0.1mol.L-1的HCl溶解后，再用生理盐水稀释至所需浓度，pH为6～7；LNNA(美国Sigma公司，批号 A011150101)；盐酸纳洛酮原料药(军事医学科学院毒物药物研究所提供)。
1.3 吗啡耐受实验模型的建立 取♀性昆明种小鼠于55℃±1℃的热板上测定初痛阈，将初痛阈低于5s或超过30s的小鼠剔除。合格小鼠随机分为3组，每组8只。对照组每天sc 5mg.kg-1吗啡，同时ip生理盐水。治疗组在给予吗啡的同时，分别 ip 2、4mg.kg-1LNNA。每日给吗啡30min后测痛阈，共测5d。
1.4 吗啡依赖模型的建立 采用小剂量递增法[3]吗啡剂量从25mg.kg-1增至150mg.kg-1，sc 4.5d，经纳洛酮(5mg.kg-1)催瘾后，跳跃反应率为100%的小鼠为理想的小鼠吗啡依赖模型。
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1.5 实验方法 (1)LNNA ip 实验组 昆明种小鼠45只，按体重均衡原则随机分为5组，每组9只。吗啡对照组：每天sc吗啡，于催瘾前30min ip生理盐水；LNNA ip (Ⅰ)组分3小组：每天sc吗啡和LNNA ip 4mg.kg-1，分两次给药。ip LNNA(Ⅱ)组：每天sc吗啡，于催瘾前30min ip LNNA，剂量分别为2、4、8mg.kg-1。(2)LNNA ig 治疗组 昆明种小鼠32只，♀♂兼用，按体重均衡原则随机分为4组，每组8只。吗啡对照组：每天sc吗啡，于催瘾前1h ig 0.5%西黄氏胶。LNNA ig 实验组：每天sc吗啡，于催瘾前1h ig LNNA，剂量分别为2、4、8mg.kg-1。
各组小鼠于末次注射后6h，ip 5mg.kg-1纳洛酮催瘾，记录20min内小鼠的跳跃反应数，戒断前后1h内的体重变化，跳跃潜伏期及腹泻等症状。1h后称重并处死对照组和每日 ip LNNA(4mg.kg-1)组小鼠，取出脾脏和胸腺称重并与生理盐水组比较。各数据进行t检验。
, 百拇医药
1.6 NO合酶抑制剂LNNA急性毒性实验 昆明种小鼠16只，♀♂兼用，按体重均衡原则随机分组，每组8只。LNNA ig实验组：给药剂量为2 000mg.kg-1。尾静脉注射LNNA实验组：用75%的酒精棉球擦小鼠尾，扩张尾静脉，经尾静脉注射37.5mg.kg-1的LNNA。两组小鼠给药后观察7d，记录动物死亡数。
2 实验结果
2.1 LNNA对吗啡耐受性的影响 单独给吗啡对照组，sc吗啡第1d出现明显镇痛作用，连续注射给药，吗啡镇痛作用下降，至第5d，已无镇痛作用。LNNA ip 2、4mg.kg-1组，在给药第1d，吗啡有明显镇痛作用，至第5d，吗啡仍有镇痛作用，4mg.kg-1剂量组与单独给吗啡组比较有显著性差异(P<0.05)，而两高低剂量组之间无显著性差异。
, 百拇医药
表1 NG-硝基-L-精氨酸(LNNA)对吗啡耐受性的影响(n=9)
组 别
LNNA剂量
(mg.kg-1)
痛 阈
实验前
1
2
3
4
5(d)
吗啡对照组…
, http://www.100md.com
20.10±5.1
44.75±14.7d
46.40±14.5d
31.50±14.2b
28.00±14.2
22.3±15.6
LNNA ip实验组
2.0
22.80±7.0
56.90±6.7bf
48.00±13.6b
, 百拇医药
30.12±8.6
40.00±14.3bf
38.40±13.1bf
4.0
20.40±3.3
52.00±12.6b
47.25±13.2b
35.00±18.3bf
38.50±16.2b
35.90±13.5b
, http://www.100md.com
注：与实验前比较，bP<0.05,dP<0.001;与吗啡对照组比较，eP>0.05,fP<0.05
2.2 LNNA对吗啡依赖小鼠戒断症状的影响 腹腔注射LNNA (Ⅰ)组与对照组比较，LNNA可抑制小鼠体重下降及跳跃反应，但对跳跃潜伏期无显著性影响。LNNA (Ⅱ)组与对照组比较，2mg.kg-1剂量组对戒断症状无影响。而4、8mg.kg-1剂量组可明显抑制体重下降及跳跃反应次数，并延长跳跃潜伏期，且8mg.kg-1剂量组的作用明显强于4mg.kg-1剂量组。除此之外，LNNA还对腹泻有治疗作用。经纳洛酮催瘾后，对照组腹泻症状明显，而ip LNNA可抑制小鼠的腹泻症状，8mg.kg-1剂量组可明显抑制小鼠腹泻症状(P<0.05)，结果见表2。
, http://www.100md.com
表2 腹腔注射LNNA对小鼠戒断症状的影响(n=9)
组 别
LNNA剂量
(mg.kg-1)
体重变化
(g)
跳跃次数
(次/20min)
跳跃潜伏期
(min)
动物跳跃率
(%)
, http://www.100md.com
动物腹泻率
(%)
吗啡对照组…
0.70±0.41
41.33±27.77
4.40±4.19
100.0
67.0
LNNA (Ⅰ)组
4.00
0.32±0.22b
14.00±10.00b
, 百拇医药
10.11±7.16
77.7
44.0
LNNA (Ⅱ)组
2.00
0.58±0.70
50.75±38.61
5.00±3.85
100.0
100.0
4.00
0.44±0.19
, 百拇医药
83.00±13.00d
9.00±7.52
75.0
37.5
8.00
0.27±0.18b
4.89±8.72c
56.00±3.97d
33.3
0.0b
注：与吗啡对照组比较，bP<0.05,cP<0.01,dP<0.001
, 百拇医药
将LNNA(Ⅰ)组和吗啡对照组动物于催瘾1h后处死，取脾脏、胸腺称重，按公式脾脏(胸腺)指数=脾脏(胸腺)重量/体重，计算其指数，并与生理盐水组比较。两组的胸腺指数与生理盐水组相比有显著性差异，而脾脏指数无显著性差异，结果见表3。
表3 吗啡和LNNA对小鼠脾脏 胸腺重量的影响(n=9)
组 别
脾 脏
胸 腺
重量(g)
指数(g.g-1×103)
重量(g)
指数(g.g-1×103)
, 百拇医药
生理盐水组
0.618±0.028
3.00±1.00
0.060±0.044
2.96±2.22
吗啡对照组
0.047±0.015
2.24±0.80
0.019±0.011
0.92±0.48b
LNNA ip(I)组
, 百拇医药
0.043±0.016
2.04±0.66
0.020±0.011
0.92±0.48b
注：与NS组比较，bP<0.05
2.3 LNNA对小鼠戒断症状的影响 腹腔注射给予2.0、4.0和8.0mg.kg-13个不同剂量的LNNA治疗后，3个剂量均可抑制催促戒断后小鼠体重下降；2mg.kg-1LNNA对小鼠的跳跃反应无明显抑制作用，4、8mg.kg-1LNNA则可极显著地抑制小鼠的跳跃反应。3个剂量均可极显著地延长小鼠的跳跃潜伏期(P<0.01;P<0.001)，并抑制腹泻症状的发生。结果见表4。
, 百拇医药
表4 LNNA对小鼠戒断症状的影响(n=8)
LNNA剂量
(mg.kg-1)
体重变化
(g)
跳跃次数
(次/20min)
跳跃潜伏期
(min)
动物腹泻率
(%)
动物跳跃率
, 百拇医药
(%)
吗啡对照组…
1.05±0.21
99.00±38.18
3.00±1.44
100.0
100.0
LNNA实验组
2.00
0.35±0.15c
40.13±49.90
13.00±7.62c
, 百拇医药
50.0
62.5
4.00
0.43±0.37b
7.63±12.27d
19.38±1.19d
0.0
25.0
8.00
0.63±0.19b
8.75±10.32d
, 百拇医药
14.13±6.49d
50.0
62.5
注：与吗啡对照组比较,bP<0.05,cP<0.01,dP<0.001
2.4 LNNA急性毒性实验 两组动物分别尾静脉注射37.5mg.kg-1和 ig 2 000mg.kg-1LNNA，给药后观察7d，7d内小鼠生长正常，活动自如，无死亡。
3 讨 论
本实验采用吗啡建立了标准的成瘾模型，经纳洛酮催瘾后，小鼠表现出明显的跳跃反应和腹泻症状，证明依赖模型是成功的。通过吗啡对照组和LNNA治疗组戒断症状的比较，发现发生跳跃反应多的动物，其腹泻机会亦多。从表2可见，对照组跳跃动物数为100%，腹泻动物数为66.7%；而治疗组(8mg.kg-1)跳跃动物数只有33.3%，腹泻动物数为零。在表3中，对照组中跳跃动物数高的腹泻发生率均高，为100%，而治疗组，两者都下降。可见，跳跃反应和腹泻是戒断反应的重要指标。从表2、表3可见，实验建立了理想的成瘾模型，在此模型上本实验进行了NOS抑制剂LNNA对吗啡耐受及依赖形成的影响。LNNA属于L-精氨酸同类物。L-精氨酸是合成NO的底物，LNNA通过竟争性占领L-精氨酸的结合部位，抑制NO合成。近年来研究表明[1]，NO可能介导了吗啡的镇痛作用、免疫调节以及增加脑局部血流和戒断反应等多种作用。可见抑制NO合成，可影响吗啡戒断反应及吗啡镇痛作用。
, 百拇医药
有研究发现，NOS抑制剂本身在经典的镇痛实验中并无镇痛作用，但可阻止吗啡耐受性和依赖性的产生。Kolesnikov[3]等采用不同给药方案及给予不同剂量的NOS抑制剂NO2Arg进行了深入的研究，结果显示，NO2Arg能延缓吗啡耐受且阻止吗啡依赖的产生。本实验结果同上述情况一致。NOS抑制剂具有延缓耐受性的作用，可能与抑制NO合成有关。因为NO参与了外周痛觉、脊髓及其以上水平的痛觉调制。同时，本实验对ip和ig两种给药方式的效果和剂量相关性进行了研究。两种给药途径的治疗效果无显著性差异(P>0.05)，对吗啡依赖小鼠的戒断症状均有较好的抑制作用。在剂量相关性方面的研究显示，ip和ig给药都无剂量相关性，4mg.kg-1与8mg.kg-1具有相同效果，两剂量组之间无显著性差异(P>0.05)。而国外有研究表明，NOS抑制剂的作用在2、4、8mg.kg-1范围内具有剂量依赖性。存在此差异，可能是由于动物品种、实验条件、药品等之间有差异。
, 百拇医药
目前国内尚无关于NOS抑制剂毒性的研究，本实验在这方面进行了初步讨探。采用ig和尾静脉注射两种给药方式，LNNA ig的剂量为2 000mg.kg-1，尾静脉注射剂量为37.5mg.kg-1，结果表明LNNA毒性很小。而在实际运用中剂量极低，一般小鼠只需4～8mg.kg-1。因而LNNA使用时比较安全。
本研究结果表明，NOS抑制剂LNNA用于阿片类药物依赖治疗有很好的应用前景。
作者简介：赵晶，女，理学博士，副主任药师。中国药学会医院药学专业委员会委员，全军新药审评委员会委员。
苏国丽，贵阳医学院实习学员。
参考文献：
, http://www.100md.com
1 钟慈声，孙安阳.一氧化氮的生物医学.第一版.上海：上海医科大学出版社，1997；213
2 刘屏，陈世铭，陈慧英等.钙拮抗剂抗胆碱药对吗啡依赖小鼠催促戒断症状的治疗作用.中国药物依赖性通报，1996;5(1):16
3 Y. A.Kolesnirov，C. G.Pick，G.Ciszewska.et al.Blockade of tolerance to morphine but not to opioids by a nitric oxide synthase inhibitor.Proc.natl.Acod Sci USA,1993;90:5163
收稿日期：1999-05-06
修改日期：1999-10-08, http://www.100md.com