食管癌组织中发现DNA聚合酶β基因突变(摘要)
作者：董子明 赵国强 赵勤 薛乐勋 杨洪艳 苏堤 谭晓晖
单位：董子明 赵国强 赵勤 杨洪艳 苏堤 谭晓晖(河南医科大学基础医学院 郑州 450052)；薛乐勋(河南医科大学实验中心 郑州 450052)
关键词：DNA聚合酶β；食管肿瘤；基因突变；序列分析▲
河南医科大学学报000211 食管癌是一常见、多发性恶性肿瘤，尤以我国北方太行山区发病率最高。流行病学和病理学研究提示食管癌是一个多阶段、进行性发展过程；分子生物学研究发现组织细胞中有P53、Rb及ras等基因的突变及在食管癌不同阶段的表达。吴教授对食管癌遗传学的研究发现：食管癌患者外周血细胞对DNA损伤后的修复能力降低，DNA脆性增加，癌组织细胞中有许多染色体明显改变，故可以推测在食管癌发生发展过程中，一定伴有DNA的损伤修复。然而，在食管癌中有无DNA复制和修复酶类的变化，尤其是DNA聚合酶β(DNA polymerase beta POLB)基因的突变，尚未见报道，为此，作者对河南省食管癌组织中DNA聚合酶β基因的变异情况进行了初步的探索和分析。
, 百拇医药
从河南省肿瘤医院等医院收集食管癌手术标本10例，均经病理检查证实，每份标本取癌组织和癌旁正常组织各一块，标本离体后迅速置于-196 ℃液氮保存。参照GenBank中DNA聚合酶β基因序列M13140设计7对引物，利用逆转录聚合酶链反应对每个标本均进行7个片段的扩增，扩增产物进行单链形态多样性(SSCP)分析。结果显示：10例食管癌标本中SSCP明显异常6例，而癌旁组织均未见异常。
将其中1例SSCP显示有变异可能区段的PCR产物进行琼脂糖电泳，从琼脂糖中回收该区段PCR扩增产物，纯化后与T载体连接，转化入宿主菌JM107，从阳性菌中提取质粒DNA，利用ABI377自动测序仪测序。测得序列利用DNASIS软件与GenBank中查到的DNA聚合酶β进行同源性比较和分析。结果显示：该例食管癌组织DNA聚合酶β基因的375位核苷酸由A变为G，推导氨基酸变异情况为，其第88位氨基酸由异亮氨酸(Ile)转变为缬氨酸(Val)。
DNA聚合酶β(POLB)在哺乳类动物细胞中参与DNA合成和修复的某些过程。该酶有保储很高量各种核素的结构，酶活性低，并独立于细胞周期之外。近年有报道，在人类结直肠癌、前列腺癌、膀胱癌、肝癌和非小细胞型肺癌中都有POLB基因的突变，尤其以结肠癌为最高，突变率达80%(5/6)以上。许多对人类肿瘤的研究指出，其癌变机制可能多与肿瘤抑制基因(suppressorgene)和原癌基因(proto-oncogene)的突变有关，然而引起这些突变积累成肿瘤的最初的分子缺陷还是不清楚的。有趣的是，在结直肠癌中有较高的POLB基因的突变，同时也有很高的P53基因和ras基因突变率。这些结果提示，DNA修复系统的损伤、失调、缺陷等与人类肿瘤的发生有一定关系。
作者发现POLB基因375位突变(A→G)，氨基酸由异亮氨酸(Ile)转变为缬氨酸(Val)，提示在食管癌中也存在POLB基因突变现象，可能与食管癌的发生、发展相关。同时，该发现是继国际上结直肠癌、膀胱癌、前列腺癌之后首次在食管癌中发现该酶基因突变，且发现的突变位点与前几种肿瘤不同。
基金项目：国家自然科学基金资助项目 39870287
(收稿日期：2000-01-21), 百拇医药
单位：董子明 赵国强 赵勤 杨洪艳 苏堤 谭晓晖(河南医科大学基础医学院 郑州 450052)；薛乐勋(河南医科大学实验中心 郑州 450052)
关键词：DNA聚合酶β；食管肿瘤；基因突变；序列分析▲
河南医科大学学报000211 食管癌是一常见、多发性恶性肿瘤，尤以我国北方太行山区发病率最高。流行病学和病理学研究提示食管癌是一个多阶段、进行性发展过程；分子生物学研究发现组织细胞中有P53、Rb及ras等基因的突变及在食管癌不同阶段的表达。吴教授对食管癌遗传学的研究发现：食管癌患者外周血细胞对DNA损伤后的修复能力降低，DNA脆性增加，癌组织细胞中有许多染色体明显改变，故可以推测在食管癌发生发展过程中，一定伴有DNA的损伤修复。然而，在食管癌中有无DNA复制和修复酶类的变化，尤其是DNA聚合酶β(DNA polymerase beta POLB)基因的突变，尚未见报道，为此，作者对河南省食管癌组织中DNA聚合酶β基因的变异情况进行了初步的探索和分析。
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从河南省肿瘤医院等医院收集食管癌手术标本10例，均经病理检查证实，每份标本取癌组织和癌旁正常组织各一块，标本离体后迅速置于-196 ℃液氮保存。参照GenBank中DNA聚合酶β基因序列M13140设计7对引物，利用逆转录聚合酶链反应对每个标本均进行7个片段的扩增，扩增产物进行单链形态多样性(SSCP)分析。结果显示：10例食管癌标本中SSCP明显异常6例，而癌旁组织均未见异常。
将其中1例SSCP显示有变异可能区段的PCR产物进行琼脂糖电泳，从琼脂糖中回收该区段PCR扩增产物，纯化后与T载体连接，转化入宿主菌JM107，从阳性菌中提取质粒DNA，利用ABI377自动测序仪测序。测得序列利用DNASIS软件与GenBank中查到的DNA聚合酶β进行同源性比较和分析。结果显示：该例食管癌组织DNA聚合酶β基因的375位核苷酸由A变为G，推导氨基酸变异情况为，其第88位氨基酸由异亮氨酸(Ile)转变为缬氨酸(Val)。
DNA聚合酶β(POLB)在哺乳类动物细胞中参与DNA合成和修复的某些过程。该酶有保储很高量各种核素的结构，酶活性低，并独立于细胞周期之外。近年有报道，在人类结直肠癌、前列腺癌、膀胱癌、肝癌和非小细胞型肺癌中都有POLB基因的突变，尤其以结肠癌为最高，突变率达80%(5/6)以上。许多对人类肿瘤的研究指出，其癌变机制可能多与肿瘤抑制基因(suppressorgene)和原癌基因(proto-oncogene)的突变有关，然而引起这些突变积累成肿瘤的最初的分子缺陷还是不清楚的。有趣的是，在结直肠癌中有较高的POLB基因的突变，同时也有很高的P53基因和ras基因突变率。这些结果提示，DNA修复系统的损伤、失调、缺陷等与人类肿瘤的发生有一定关系。
作者发现POLB基因375位突变(A→G)，氨基酸由异亮氨酸(Ile)转变为缬氨酸(Val)，提示在食管癌中也存在POLB基因突变现象，可能与食管癌的发生、发展相关。同时，该发现是继国际上结直肠癌、膀胱癌、前列腺癌之后首次在食管癌中发现该酶基因突变，且发现的突变位点与前几种肿瘤不同。
基金项目：国家自然科学基金资助项目 39870287
(收稿日期：2000-01-21), 百拇医药