薄层扫描法测定玄冬冲剂中绿原酸的含量
作者：刘吉金
单位：刘吉金(深圳市药品检验所 518029)
关键词：
药物分析杂志000223 玄冬冲剂系由玄参、麦冬、金银花等中药制成的复方制剂，对咽喉炎、口腔炎有较好的疗效。其主要原料为金银花，为了有效地控制制剂的质量，本文用薄层扫描法测定了金银花中绿原酸的含量，结果较为满意。
1 仪器、试剂和材料
CS-930型双波长薄层扫描仪(日本岛津)；薄层板自动涂布器PBQ-Ⅰ型(四川省中药研究所)；微量定量毛细管(美国Drummond)；紫外线检测器(瑞士CAMAG uv-cabinet Ⅱ)。
绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所)；硅胶H(青岛海洋化工厂)；所用试剂均为分析纯。
, 百拇医药
玄冬冲剂由深圳市人民医院制剂室提供。
2 方法与结果
2.1 薄层层析及扫描条件 取硅胶H-0.5 % 羧甲基纤维素钠(1∶3)，用自动涂布器湿法铺板，厚0.4 mm，室温干燥后，110 ℃活化1 h,置干燥器中备用；展开剂：醋酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上层溶液；紫外光灯(365 nm)下定位；扫描条件：λS = 320 nm，λR = 370 nm，反射法锯齿扫描,狭缝1.2 mm × 1.2 mm；灵敏度：中，线性化参数SX=3。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品，加甲醇制成0.545 mg。mL-1的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备 精密称取本品5 g，加甲醇超声提取30 min，滤过，滤器及滤渣用甲醇15 mL分次洗涤，合并滤液与洗液，水浴蒸干，残渣加水20 mL微热溶解，加枸橼酸调pH=3，用醋酸乙酯提取3次，每次20 mL，合并醋酸乙酯液，用无水硫酸钠脱水，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定量转移至2 mL 量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，即得。
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2.4 线性关系的考察 精密吸取绿原酸对照品溶液1，2，4，6，8 μL，分别点于同一薄层板上，按上述条件层析，扫描测定。结果，绿原酸点样量(X)在0.545～4.36 μg 范围内与峰面积的积分值(Y)呈良好的线性关系，回归方程为：
Y=39 745.6 X - 2 276.4 r=0.998 3
2.5精密度试验 精密吸取绿原酸对照品溶液2 μL，5份，分别点于同一薄层板上，依法测定峰面积积分值。结果RSD=2.07 %(n=5)。
2.6 稳定性试验 取层析后的薄层板立即进行测定和室温下放置不同时间进行测定。结果，斑点峰面积积分值在3 h内稳定，RSD=1.67%(n=5)。
2.7 重复性试验 取同一批号样品(批号为980714)5份，按“样品测定”项下的方法，测定样品中绿原酸的含量，结果RSD=2.16%(n=5)。
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2.8 干扰试验 按处方量取除金银花外的其余各药味按相同工艺制成阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照品溶液，分别点于同一薄层板上，按上述条件展开，置紫外光灯(365 nm)下检视，阴性对照溶液在与对照品溶液相应的位置上无相应特征斑点显示。薄层图谱见图1。
图1 玄冬冲剂薄层色谱图
1.绿原酸对照品 2.供试品溶液 3.空白对照液
2.9 回收率试验 精密称取已测知含量的样品5 g，6份，分别精密加入绿原酸对照品溶液(1.536 mg。mL-1)各1 mL，依法提取测定，平均回收率为97.45%，RSD为2.30%(n=6)。
, http://www.100md.com 2.10 样品测定 精密吸取供试品溶液2 μL，对照品溶液1 μL和3 μL，分别点于同一薄层板上，按上述条件层析，扫描测定，用外标两点法计算，结果980714，981201，980728批号样品中绿原酸含量分别为0.015 8%，0.018 7%，0.028 2%，n=3。
3 讨论
样品中绿原酸的提取实验曾比较了用甲醇超声提取和加热回流提取2种方法，结果无显著差别，以选择甲醇超声提取较方便。另外，考虑到绿原酸为弱酸，为增加其在醋酸乙酯中的溶解度，还比较了用醋酸乙酯萃取前的水溶液加枸橼酸调不同的pH与不调pH，结果以调pH=3，绿原酸含量最高。薄层层析条件的选择曾试用硅胶G板，醋酸乙酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上层溶液、醋酸丁酯-甲酸-水(8.5∶5.5∶2.5)的上层溶液、醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶1∶1∶1)等多种展开剂，所得色谱均不理想，或大部分斑点推至前沿，或斑点分离不好，有拖尾现象，经筛选的拟定方法并于展开前预饱和30 min，克服了上述缺点，展开斑点较圆整，易于扫描。
该制剂中几个批号样品绿原酸含量有一定差异，作者认为与金银花原料的产地、采收季节有关。
参考文献
1，中国药典.1995.一部:189
2，王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994.337，371,539，611
(本文于1999年6月4日收到), http://www.100md.com
单位：刘吉金(深圳市药品检验所 518029)
关键词：
药物分析杂志000223 玄冬冲剂系由玄参、麦冬、金银花等中药制成的复方制剂，对咽喉炎、口腔炎有较好的疗效。其主要原料为金银花，为了有效地控制制剂的质量，本文用薄层扫描法测定了金银花中绿原酸的含量，结果较为满意。
1 仪器、试剂和材料
CS-930型双波长薄层扫描仪(日本岛津)；薄层板自动涂布器PBQ-Ⅰ型(四川省中药研究所)；微量定量毛细管(美国Drummond)；紫外线检测器(瑞士CAMAG uv-cabinet Ⅱ)。
绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所)；硅胶H(青岛海洋化工厂)；所用试剂均为分析纯。
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玄冬冲剂由深圳市人民医院制剂室提供。
2 方法与结果
2.1 薄层层析及扫描条件 取硅胶H-0.5 % 羧甲基纤维素钠(1∶3)，用自动涂布器湿法铺板，厚0.4 mm，室温干燥后，110 ℃活化1 h,置干燥器中备用；展开剂：醋酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上层溶液；紫外光灯(365 nm)下定位；扫描条件：λS = 320 nm，λR = 370 nm，反射法锯齿扫描,狭缝1.2 mm × 1.2 mm；灵敏度：中，线性化参数SX=3。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品，加甲醇制成0.545 mg。mL-1的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备 精密称取本品5 g，加甲醇超声提取30 min，滤过，滤器及滤渣用甲醇15 mL分次洗涤，合并滤液与洗液，水浴蒸干，残渣加水20 mL微热溶解，加枸橼酸调pH=3，用醋酸乙酯提取3次，每次20 mL，合并醋酸乙酯液，用无水硫酸钠脱水，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定量转移至2 mL 量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，即得。
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2.4 线性关系的考察 精密吸取绿原酸对照品溶液1，2，4，6，8 μL，分别点于同一薄层板上，按上述条件层析，扫描测定。结果，绿原酸点样量(X)在0.545～4.36 μg 范围内与峰面积的积分值(Y)呈良好的线性关系，回归方程为：
Y=39 745.6 X - 2 276.4 r=0.998 3
2.5精密度试验 精密吸取绿原酸对照品溶液2 μL，5份，分别点于同一薄层板上，依法测定峰面积积分值。结果RSD=2.07 %(n=5)。
2.6 稳定性试验 取层析后的薄层板立即进行测定和室温下放置不同时间进行测定。结果，斑点峰面积积分值在3 h内稳定，RSD=1.67%(n=5)。
2.7 重复性试验 取同一批号样品(批号为980714)5份，按“样品测定”项下的方法，测定样品中绿原酸的含量，结果RSD=2.16%(n=5)。
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2.8 干扰试验 按处方量取除金银花外的其余各药味按相同工艺制成阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照品溶液，分别点于同一薄层板上，按上述条件展开，置紫外光灯(365 nm)下检视，阴性对照溶液在与对照品溶液相应的位置上无相应特征斑点显示。薄层图谱见图1。
图1 玄冬冲剂薄层色谱图
1.绿原酸对照品 2.供试品溶液 3.空白对照液
2.9 回收率试验 精密称取已测知含量的样品5 g，6份，分别精密加入绿原酸对照品溶液(1.536 mg。mL-1)各1 mL，依法提取测定，平均回收率为97.45%，RSD为2.30%(n=6)。
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3 讨论
样品中绿原酸的提取实验曾比较了用甲醇超声提取和加热回流提取2种方法，结果无显著差别，以选择甲醇超声提取较方便。另外，考虑到绿原酸为弱酸，为增加其在醋酸乙酯中的溶解度，还比较了用醋酸乙酯萃取前的水溶液加枸橼酸调不同的pH与不调pH，结果以调pH=3，绿原酸含量最高。薄层层析条件的选择曾试用硅胶G板，醋酸乙酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上层溶液、醋酸丁酯-甲酸-水(8.5∶5.5∶2.5)的上层溶液、醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶1∶1∶1)等多种展开剂，所得色谱均不理想，或大部分斑点推至前沿，或斑点分离不好，有拖尾现象，经筛选的拟定方法并于展开前预饱和30 min，克服了上述缺点，展开斑点较圆整，易于扫描。
该制剂中几个批号样品绿原酸含量有一定差异，作者认为与金银花原料的产地、采收季节有关。
参考文献
1，中国药典.1995.一部:189
2，王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994.337，371,539，611
(本文于1999年6月4日收到), http://www.100md.com