慢性肝病患者的内源性一氧化氮水平和自然杀伤细胞活性
作者：郭顺明 邓松华 陈从新 刘 波
单位：郭顺明 陈从新 刘 波 解放军第105医院传染病科，合肥 230031；邓松华 安徽医科大学病理生理教研室，合肥 230032
关键词：一氧化氮；肝炎；乙型；肝硬化；杀伤细胞；天然
安徽医科大学学报990318 摘要 目的 观察慢性乙型肝炎和肝硬变患者病情活动期内源性一氧化氮(NO)水平和自然杀伤细胞(NK细胞)活性的变化。方法 随机选择慢性乙型肝炎、肝硬变和献血员各30例，抽取清晨空腹血2 ml，分别检测NO水平和NK细胞活性。结果 慢性乙型肝炎组、肝硬变组及献血员组NO(μmol.L-1)水平分别为52.3±10.3、47.3±10.5、23.4±3.8，慢性肝炎组和肝硬变组明显高于正常对照组，P<0.01。三组的NK细胞活性分别为(0.269±0.039)、(0.268±0.032)、(0.395±0.120)，慢性肝炎组和肝硬变组均明显低于正常对照组，P<0.05。NO水平与NK细胞活性间无明显相关关系(r=-0.112，P>0.05)。结论 慢性乙型肝炎和肝硬变患者内源性NO水平明显升高，NK细胞活性明显降低，提示肝细胞损害与内源性NO有关。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R512.62
Serum nitric oxide levels and natural
killer cell activity in patients with chronic liver diseases
Guo Shunming, Deng Songhua, Chen Congxin et al
(Dept of Infectious Disease, 105st Hospital of PLA, Hefei 230032)
Abstract Objective To investigate the changes of endogenous nitric oxide and natural killer cell activity in patients with chronic hepatitis B or with active cirrhosis. Methods Serum nitric oxide levels and natural killer cell activity were assayed in 30 patients with hepatitis B, in 30 with cirrhosis and in 30 blood donors. Results The Serum nitric oxide levels in hepatitis B (52.3±10.3) μmol.L-1 and in cirrhosis (47.3±10.5) μmol.L-1 were higher than those in blood donors (23.4±3.8) μmol.L-1. The natural killer cell activity in two disease groups were lower than in control (26.9±3.9，26.8±3.2 vs，39.5±12.0，respectively). The serum nitric oxide level did not correlated to natural killer cell activity (r=-0.112，P>0.05). Conclusion The endogenous nitric oxide levels in chronic liver disease increase markedly, with the decreased activity of natural killer cells.
, 百拇医药
MeSH endogenous nitric oxide; hepatitis B; cirrhosis; natural killer cell
内源性一氧化氮(NO)是近年被认识的一种新的信使分子，作为传递和调节介质不但有传递神经信息、调节多种细胞的功能，还参与炎症反应和细胞损伤及增殖过程。虽然多种组织细胞亦可合成内源性NO，但主要由肝脏的Cupffer细胞合成，故肝脏被认为是内源性NO的主要来源。为探讨慢性肝功能损害时内源性NO水平的变化及与细胞免疫间的关系，我们检测了慢性乙型肝炎和肝硬变患者病情活动期的内源性NO水平和自然杀伤细胞(NK细胞)活性，现将结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 一般资料 1996年6月～1998年3月共收治慢性乙型肝炎和肝硬变患者350例，从中随机选择慢性乙型肝炎和肝硬变各30例作为观察对象。诊断均符合1995年北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的诊断标准。其中男性45例，女性15例。年龄16～60岁，平均35.7岁±13.5岁。同时设30名献血员作为正常对照。
, http://www.100md.com
1.2 方法
1.2.1 标本采集 慢性乙型肝炎和肝硬变患者均于入院后1周内在确定肝功能异常时抽取清晨空腹血2 ml，立即送安徽医科大学免疫检验中心分别检测内源性NO水平和NK细胞活性。献血员的血标本均在献血时留取。被检测者1周内均未服用含硝酸盐或亚硝酸盐的食物及药物。
1.2.2 内源性NO检测 取血清0.1 ml先后加0.15 mol.L-1硫酸锌0.6 ml、双蒸水0.4 ml和1 mol.L-1氢氧化钠液0.1 ml混匀，冰上孵育60 min，1 2000 r.min-1离心2 min；取上清液0.6 ml加入双蒸水0.4 ml和0.23 mol.L-1硫胺液0.1 ml，冰上孵育15 min，再加入6 mmol.L-1萘乙烯二胺盐酸盐0.1 ml，室温放置60 min；然后用751型紫外分光光度仪于545 nm处读OD值，以系列NaNO2液建立标准曲线，根据样品OD值计算NO含量。试剂盒购自军事医学科学院。
, http://www.100md.com
1.2.3 NK细胞活性检测 采用胞浆乳酸脱氢酶释放法。靶细胞为标记的慢性白血病细胞K562株。
1.2.4 统计方法 内源性NO水平和NK细胞活性采用t检验，两者关系采取直线相关分析。
2 结果
2.1 慢性乙型肝炎和肝硬变患者内源性NO水平和NK细胞活性的检测 结果见表1。
表1 各组NO水平和NK细胞活性(
±s,n=30) 组 别
NO(μmol.L-1)
NK细胞活性
, http://www.100md.com
慢性肝炎
52.3±10.3**
0.269±0.039*
肝硬变
0.473±0.105**
0.268±0.032*
正常对照
23.4±3.8
0.395±0.120
与正常对照组比较：*P<0.05; **P<0.012.2 内源性NO水平与NK细胞活性的关系 慢性乙型肝炎和肝硬变患者内源性NO水平与NK细胞活性间无明显相关关系(r=-0.112，P>0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
有关NO与肝病关系的研究日益受到广大学者的重视。NO是一种由机体多种细胞合成，可作用于多种组织器官，引起多种病理生理效应的活性氮介质。在肝病时常因内毒素及相关细胞因子如IL-1、TNF等刺激肝组织Kupffer细胞、窦内皮细胞及肝细胞生成大量NO，从而产生多种病理生理效应，如抑制肝细胞蛋白质合成，参与各种原因所致的肝细胞损害，并成为引起肝硬变腹水、肾功能衰竭的一个重要因素。由小棒状杆菌和内毒素诱导小鼠肝损害试验表明，小鼠肝脏酶释放增多时，NO合成亦明显增多〔1〕。随着肝脏损害程度的加重，NO水平逐渐升高〔2〕，并且与胆红素水平呈平行关系。但当用L-NAME或Dex抑制NO合成后，肝损害可逐渐减轻〔3〕。本研究发现，慢性肝炎和肝硬变患者NO水平均明显高于正常对照组。与丁勇如等〔4〕报道的结果基本一致。由此可见，血清NO水平升高与肝病密切相关。
有关NO损害肝细胞的确切机制并不十分清楚。多数学者认为NO能与细胞内产生的超氧阴离子O-2相互作用，形成超氧亚硝酸盐根(-ON-NOO-)，该种化合物可分解肝细胞，导致肝功能损害。但亦有学者认为，肝病患者NO水平升高，可通过扩张肝脏血管、抑制白细胞和血小板聚集而改善肝脏的微循环，有利于肝细胞的再生和修复〔5，6〕。
, 百拇医药
本组资料显示，慢性肝病患者NK细胞活性显著低于正常对照组，表明慢性肝病患者均存在严重的细胞免疫缺陷〔7〕。但NK细胞活性降低与NO之间无明显相关关系。
作者简介：郭顺明，男，45岁，副主任医师
参考文献
1 Harbrecht BG, Silvio MD, Demetris AJ et al. Tumor necrosis factor-a regulates in vivo nitric oxide synthesis and induces liver injury during endotoxemia. Hepatology,1994;20(4)：1 055～1 056
2 张淑玲，郑曲波，罗瑞德等. 慢性乙型肝炎及活动性肝硬化患者内源性NO水平的检测. 疾病控制杂志，1998；2(1)：18～19
, http://www.100md.com
3 邢卉春，谢文轩，王守文. 一氧化氮在肝损伤中作用的实验研究. 中华肝脏病杂志，1999；7(1)：2～30
4 丁勇如，冯家齐，俞 红等. 肝病患者血清一氧化氮的检测. 中华传染病杂志，1998；16(4)：232～233
5 倪若愚，易建华，曾令兰等. 慢性乙型肝炎肝组织内NO合成酶及其意义. 中华肝脏病杂志，1996；4(3)：145～146
6 胡大荣，王宇明主编. 传染病学新进展(Ⅲ). 北京：科学技术文献出版社，1995：169～177
7 冯志杰，任锡玲，邓永贵. 肝炎肝硬化自然杀伤细胞活性的检测及其临床意义. 中华内科杂志，1995；35(1)：479
1998-11-20收稿，1999-04-05修回, 百拇医药
单位：郭顺明 陈从新 刘 波 解放军第105医院传染病科，合肥 230031；邓松华 安徽医科大学病理生理教研室，合肥 230032
关键词：一氧化氮；肝炎；乙型；肝硬化；杀伤细胞；天然
安徽医科大学学报990318 摘要 目的 观察慢性乙型肝炎和肝硬变患者病情活动期内源性一氧化氮(NO)水平和自然杀伤细胞(NK细胞)活性的变化。方法 随机选择慢性乙型肝炎、肝硬变和献血员各30例，抽取清晨空腹血2 ml，分别检测NO水平和NK细胞活性。结果 慢性乙型肝炎组、肝硬变组及献血员组NO(μmol.L-1)水平分别为52.3±10.3、47.3±10.5、23.4±3.8，慢性肝炎组和肝硬变组明显高于正常对照组，P<0.01。三组的NK细胞活性分别为(0.269±0.039)、(0.268±0.032)、(0.395±0.120)，慢性肝炎组和肝硬变组均明显低于正常对照组，P<0.05。NO水平与NK细胞活性间无明显相关关系(r=-0.112，P>0.05)。结论 慢性乙型肝炎和肝硬变患者内源性NO水平明显升高，NK细胞活性明显降低，提示肝细胞损害与内源性NO有关。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R512.62
Serum nitric oxide levels and natural
killer cell activity in patients with chronic liver diseases
Guo Shunming, Deng Songhua, Chen Congxin et al
(Dept of Infectious Disease, 105st Hospital of PLA, Hefei 230032)
Abstract Objective To investigate the changes of endogenous nitric oxide and natural killer cell activity in patients with chronic hepatitis B or with active cirrhosis. Methods Serum nitric oxide levels and natural killer cell activity were assayed in 30 patients with hepatitis B, in 30 with cirrhosis and in 30 blood donors. Results The Serum nitric oxide levels in hepatitis B (52.3±10.3) μmol.L-1 and in cirrhosis (47.3±10.5) μmol.L-1 were higher than those in blood donors (23.4±3.8) μmol.L-1. The natural killer cell activity in two disease groups were lower than in control (26.9±3.9，26.8±3.2 vs，39.5±12.0，respectively). The serum nitric oxide level did not correlated to natural killer cell activity (r=-0.112，P>0.05). Conclusion The endogenous nitric oxide levels in chronic liver disease increase markedly, with the decreased activity of natural killer cells.
, 百拇医药
MeSH endogenous nitric oxide; hepatitis B; cirrhosis; natural killer cell
内源性一氧化氮(NO)是近年被认识的一种新的信使分子，作为传递和调节介质不但有传递神经信息、调节多种细胞的功能，还参与炎症反应和细胞损伤及增殖过程。虽然多种组织细胞亦可合成内源性NO，但主要由肝脏的Cupffer细胞合成，故肝脏被认为是内源性NO的主要来源。为探讨慢性肝功能损害时内源性NO水平的变化及与细胞免疫间的关系，我们检测了慢性乙型肝炎和肝硬变患者病情活动期的内源性NO水平和自然杀伤细胞(NK细胞)活性，现将结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 一般资料 1996年6月～1998年3月共收治慢性乙型肝炎和肝硬变患者350例，从中随机选择慢性乙型肝炎和肝硬变各30例作为观察对象。诊断均符合1995年北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的诊断标准。其中男性45例，女性15例。年龄16～60岁，平均35.7岁±13.5岁。同时设30名献血员作为正常对照。
, http://www.100md.com
1.2 方法
1.2.1 标本采集 慢性乙型肝炎和肝硬变患者均于入院后1周内在确定肝功能异常时抽取清晨空腹血2 ml，立即送安徽医科大学免疫检验中心分别检测内源性NO水平和NK细胞活性。献血员的血标本均在献血时留取。被检测者1周内均未服用含硝酸盐或亚硝酸盐的食物及药物。
1.2.2 内源性NO检测 取血清0.1 ml先后加0.15 mol.L-1硫酸锌0.6 ml、双蒸水0.4 ml和1 mol.L-1氢氧化钠液0.1 ml混匀，冰上孵育60 min，1 2000 r.min-1离心2 min；取上清液0.6 ml加入双蒸水0.4 ml和0.23 mol.L-1硫胺液0.1 ml，冰上孵育15 min，再加入6 mmol.L-1萘乙烯二胺盐酸盐0.1 ml，室温放置60 min；然后用751型紫外分光光度仪于545 nm处读OD值，以系列NaNO2液建立标准曲线，根据样品OD值计算NO含量。试剂盒购自军事医学科学院。
, http://www.100md.com
1.2.3 NK细胞活性检测 采用胞浆乳酸脱氢酶释放法。靶细胞为标记的慢性白血病细胞K562株。
1.2.4 统计方法 内源性NO水平和NK细胞活性采用t检验，两者关系采取直线相关分析。
2 结果
2.1 慢性乙型肝炎和肝硬变患者内源性NO水平和NK细胞活性的检测 结果见表1。
表1 各组NO水平和NK细胞活性(
±s,n=30) 组 别NO(μmol.L-1)
NK细胞活性
, http://www.100md.com
慢性肝炎
52.3±10.3**
0.269±0.039*
肝硬变
0.473±0.105**
0.268±0.032*
正常对照
23.4±3.8
0.395±0.120
与正常对照组比较：*P<0.05; **P<0.012.2 内源性NO水平与NK细胞活性的关系 慢性乙型肝炎和肝硬变患者内源性NO水平与NK细胞活性间无明显相关关系(r=-0.112，P>0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
有关NO与肝病关系的研究日益受到广大学者的重视。NO是一种由机体多种细胞合成，可作用于多种组织器官，引起多种病理生理效应的活性氮介质。在肝病时常因内毒素及相关细胞因子如IL-1、TNF等刺激肝组织Kupffer细胞、窦内皮细胞及肝细胞生成大量NO，从而产生多种病理生理效应，如抑制肝细胞蛋白质合成，参与各种原因所致的肝细胞损害，并成为引起肝硬变腹水、肾功能衰竭的一个重要因素。由小棒状杆菌和内毒素诱导小鼠肝损害试验表明，小鼠肝脏酶释放增多时，NO合成亦明显增多〔1〕。随着肝脏损害程度的加重，NO水平逐渐升高〔2〕，并且与胆红素水平呈平行关系。但当用L-NAME或Dex抑制NO合成后，肝损害可逐渐减轻〔3〕。本研究发现，慢性肝炎和肝硬变患者NO水平均明显高于正常对照组。与丁勇如等〔4〕报道的结果基本一致。由此可见，血清NO水平升高与肝病密切相关。
有关NO损害肝细胞的确切机制并不十分清楚。多数学者认为NO能与细胞内产生的超氧阴离子O-2相互作用，形成超氧亚硝酸盐根(-ON-NOO-)，该种化合物可分解肝细胞，导致肝功能损害。但亦有学者认为，肝病患者NO水平升高，可通过扩张肝脏血管、抑制白细胞和血小板聚集而改善肝脏的微循环，有利于肝细胞的再生和修复〔5，6〕。
, 百拇医药
本组资料显示，慢性肝病患者NK细胞活性显著低于正常对照组，表明慢性肝病患者均存在严重的细胞免疫缺陷〔7〕。但NK细胞活性降低与NO之间无明显相关关系。
作者简介：郭顺明，男，45岁，副主任医师
参考文献
1 Harbrecht BG, Silvio MD, Demetris AJ et al. Tumor necrosis factor-a regulates in vivo nitric oxide synthesis and induces liver injury during endotoxemia. Hepatology,1994;20(4)：1 055～1 056
2 张淑玲，郑曲波，罗瑞德等. 慢性乙型肝炎及活动性肝硬化患者内源性NO水平的检测. 疾病控制杂志，1998；2(1)：18～19
, http://www.100md.com
3 邢卉春，谢文轩，王守文. 一氧化氮在肝损伤中作用的实验研究. 中华肝脏病杂志，1999；7(1)：2～30
4 丁勇如，冯家齐，俞 红等. 肝病患者血清一氧化氮的检测. 中华传染病杂志，1998；16(4)：232～233
5 倪若愚，易建华，曾令兰等. 慢性乙型肝炎肝组织内NO合成酶及其意义. 中华肝脏病杂志，1996；4(3)：145～146
6 胡大荣，王宇明主编. 传染病学新进展(Ⅲ). 北京：科学技术文献出版社，1995：169～177
7 冯志杰，任锡玲，邓永贵. 肝炎肝硬化自然杀伤细胞活性的检测及其临床意义. 中华内科杂志，1995；35(1)：479
1998-11-20收稿，1999-04-05修回, 百拇医药