芪加合剂对Lewis肺癌小鼠细胞免疫功能的影响
作者：张运芳 李 俊 金 涌 王 斌 徐叔云
单位：安徽医科大学临床药理研究所，合肥 230032
关键词：肺肿瘤；免疫学；黄芪；药理学；鼠
安徽医科大学学报990410
摘要：目的 研究芪加合剂对lewis肺癌小鼠免疫功能的影响。方法 检测ConA和LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应和IL-1、IL-2产生的水平。结果 芪加合剂(13.75～27.5 g.kg-1)可使荷癌小鼠低下的T、B淋巴细胞增殖反应，脾细胞产生IL-2恢复至接近正常水平，还可促进荷癌小鼠腹腔巨噬细胞产生IL-2。结论 芪加合剂抑制肿瘤作用可能与其提高荷瘤小鼠细胞免疫功能有关。
中国图书资料分类法分类号：R734.2； R967
, 百拇医药
Effect of Qijaheji on the cell immune function
in mice with Lewis lung carcinoma
Zhang Yunfang, Li Jun, Jin Yong et al
(Clinical Institute of Pharmacology, Anhui Medical University,Hefei 230032)
Abstract Objective To investigate the effect of Qijaheji on the cell immune function in mice with lung carcinoma. Methods The proliferative reaction of spleen lymphocytes in mice induced by ConA and LPS and the production of IL-1 and IL-2 were determined. Results Qijaheji 13.75～27.5 g.kg-1， ig×7 days or 15 days markedly increased the level of the proliferative reaction of lymphocytes induced dy ConA of LPS and IL-2 produced by spleen cells in mice with Lewis lung carcinoma. The Qijaheji also enhanced the content of IL-1 produced by peritoneal macrophage. Conclusion Inhibition of Qijaheji on Lewis lung carcinoma in mice may be related to the improvement of the immune function.
, http://www.100md.com
MeSH lung neoplasms/immunology; astragalus membranceus/phamacology; mice
芪加合剂为黄芪、刺五加等提取的中药复方制剂。芪加合剂能明显延长Lewis肺癌小鼠平均生存时间。为进一步研究芪加合剂的作用机理，本文研究了芪加合剂对Lewis肺癌小鼠细胞免疫功能的影响。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂 芪加合剂，同济医科大学附属同济医院药剂科提供，批号：930426，含量2 200 g.L-1(以黄芪、刺五加等生药量计算)。临用前用生理盐水稀释，供体内给药。环磷酰胺(Cyclophosphamide, cy)，批号：930505，上海第十二制药厂产品。参芪片，批号：940302，吉林市制药厂产品。刀豆蛋白A(Concanavalin A, ConA)；脂多糖(Lipoplysaccharide, LPS), Sigma公司产品。[3H]TdR，比放射性为666 TBq.μmol-1，中国原子能研究院产品；RPMI 1640，Gibico公司产品。
, 百拇医药
1.2 动物与瘤细胞 C57BL/6J小鼠，♀♂兼用，6～8周龄，体重18 g±3 g，由上海动物中心提供。Lewis肺癌瘤株，从上海药物所引进，用同系C57BL/6J小鼠皮下接种传代。
1.3 仪器 NaPCO-6100型CO2培养箱，美国生产，FJ-2107液体闪计数仪，西安262厂生产，DYQ-Ⅱ型多头细胞收集器，绍兴坡塘医疗器械厂生产。
1.4 荷瘤小鼠模型的制备〔1〕 无菌取出Lewis肺癌瘤块，用0.25%胰蛋白酶-0.04% EDTA消化30 min，经200目尼龙网磨碎过滤，离心(1 500 r.min-1, 5 min)，洗涤2次，计数并配成浓度1×1010活细胞.L-1，每鼠在足跖皮下注射0.1 ml，48 h后(ig)受试药物或等量溶媒，观察药物对荷瘤小鼠治疗作用及细胞免疫的影响。
, http://www.100md.com
1.5 脾细胞的ConA或LPS增殖反应 参照文献〔2〕，用RPMI 1640培养液常规制备小鼠脾细胞悬液(浓度1×1010.L-1)，在96孔培养板上，每孔加入100 ml细胞悬液(终浓度5×109.L-1)，100 μl ConA(终浓度3 mg.L-1)或100 μl LPS(终浓度6 mg.L-1)。每个样品设3个复孔，置37℃，5% CO2培养箱培养48 h，终止前6 h，每孔加入20 μl[3H]TdR(1.48×104 Bq/孔)。培养结束后，收获细胞，用液闪仪测定放射性，以3个复孔cpm值的均值表示结果。
1.6 白细胞介素Ⅱ(IL-2)的诱生与检测 常规制备小鼠脾淋巴细胞悬液(终浓度5×109.L-1)；加入ConA(终浓度3 mg.L-1)，置37℃、5% CO2培养箱培养48 h。收集上清液，离心(2 000 r.min-1, 10 min)，-20℃保存，测IL-2活性。用ConA活化小鼠脾细胞法检测IL-2，以[3H]TdR参入表示IL-2活性。
, 百拇医药
1.7 白细胞介素Ⅰ(IL-1)的诱生与检测 参照文献〔2〕，常规制备小鼠腹腔巨噬细胞悬液(终浓度1×109.L-1)，加入LPS(终浓度6 mg.L-1)，置37℃，5%CO2培养箱培养48 h，收集上清液，离心，-20℃保存，测IL-1的活性。用小鼠胸腺细胞增殖法检测IL-1，以[3H]TdR参入量表示IL-1的活性。
1.8 数据处理 各组实验数据以±s表示，计量资料组间比较采用t检验。
2 结果
2.1 芪加合剂对荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响 荷瘤小鼠制备后48 h ig芪加合剂，连续给药7天或15天，然后无菌取出各组小鼠脾脏，制备脾细胞悬液，检测细胞ConA和LPS增殖反应。表1、表2结果表明，肿瘤对照组ConA和LPS增殖反应明显低于正常对照组，芪加合剂(13.75～27.5 g.kg-1)治疗可使荷瘤小鼠低下的ConA和LPS增殖反应恢复至接近正常水平，且于阳性对照药参芪片疗效相当。而Cy组对荷瘤小鼠的ConA、LPS增殖反应均无明显影响。
, 百拇医药
表1 芪加合剂对荷瘤小鼠ConA增殖反应的影响(
±s, n=6) 组别
剂量
g.kg-1.d-1
ConA增殖反应(cpm×10-3)
给药7天
给药15天
正常对照
17.3±2.3
17.0±1.8
, http://www.100md.com
肿瘤对照
11.5±1.5**
9.8±1.2**
芪加合剂
6.88
12.1±2.1**
11.3±1.5**
13.75
14.8±2.2#
14.9±1.6##
, 百拇医药 27.50
16.8±3.0##
16.4±2.4##
参芪片
0.55
17.4±2.8##
17.3±2.6##
Cy
0.02
11.2±1.6**
9.2±1.4**
, 百拇医药
ConA终浓度为3 mg.L-1；与正常对照组比，**P<0.01；与肿瘤对照组比，#P<0.05，##P<0.01表2 芪加合剂对荷瘤小鼠LPS增殖反应的影响(±s, n=6) 组别
剂量g.kg-1.d-1
LPS增殖反应(cpm×10-3)
给药7天
给药15天
正常对照
9.7±1.8
, http://www.100md.com
9.4±1.5
肿瘤对照
5.6±0.9**
4.4±0.6**
芪加合剂
6.88
6.0±0.9**
5.7±0.9**
13.75
8.1±1.4##
6.8±1.4##
, 百拇医药
27.50
9.3±0.8##
8.6±1.7##
参芪片
0.55
10.1±1.4##
9.2±1.9##
Cy
0.02
5.4±0.7**
4.0±0.6**
, 百拇医药
LPS终浓度为6 mg.L-1；与正常对照组比，**P<0.01；与肿瘤对照组比，##P<0.01
2.2 芪加合剂对荷瘤小鼠产生IL-2的影响 表3结果表明，肿瘤对照组脾细胞产生IL-2活性明显低于正常对照组，芪加合剂(13.75～27.5 g.kg-1)治疗可使其低下的IL-2产生恢复至正常水平，而Cy组对荷瘤小鼠IL-2水平，无明显影响。
表3 芪加合剂对荷瘤小鼠IL-2的影响(±s, n=6) 组别
剂量g.kg-1.d-1
, 百拇医药
IL-2活性(cpm×10-3)
给药7天
给药15天
正常对照
12.3±1.6
12.1±1.4
肿瘤对照
8.3±1.2**
7.6±0.8**
芪加合剂
6.88
, 百拇医药 8.9±1.4**
8.4±0.9**
13.75
10.3±1.6#
10.6±1.2##
27.50
11.5±1.1##
11.4±1.1##
Cy
0.02
8.1±1.0**
, 百拇医药
6.9±0.7**
ConA终浓度为3 mg.L-1；与正常对照组比，**P<0.01；与肿瘤对照组比，#P<0.05，##P<0.01
2.3 芪加合剂对荷瘤小鼠产生IL-1的影响 表4结果表明，肿瘤对照小鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1活性高于正常对照组，芪加合剂(13.8～27.5 g.kg-1)治疗7，14天均可明显提高荷瘤小鼠巨噬细胞产生IL-1，而Cy组对荷瘤小鼠的IL-1产生均无明显影响。
表4 芪加合剂对荷瘤小鼠IL-1的影响(±s, n=6) 组别
, http://www.100md.com
剂量
g.kg-1.d-1
IL-2活性(cpm×10-3)
给药7天
给药15天
正常对照
11.9±1.2
11.4±1.5
肿瘤对照
15.4±1.8**
14.5±1.7**
, http://www.100md.com
芪加合剂
6.88
15.9±1.7**
16.0±1.4**
13.75
16.8±1.9**
17.3±2.2**#
27.50
18.9±2.4**#
19.1±2.7**##
, http://www.100md.com
Cy
0.02
14.8±1.2**
13.4±1.2*
LPS终浓度为6 mg.L-1；与正常对照组比，*P<0.05，**P<0.01；与肿瘤对照组比，#P<0.05，##P<0.013 讨论
芪加合剂(芪加合剂(ig，13.75～27.5 g.kg-1)×7天或15天均能延长Lewis肺癌小鼠平均生存时间。本研究发现，在Lewis肺癌模型上，芪加合剂除具有一定抗肿瘤作用外，还能使Lewis肺癌小鼠低下的T、B淋巴细胞增殖反应及脾细胞产生的IL-2恢复至接近正常水平，且疗效与肿瘤辅助治疗药参芪片相当，并能促使荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1。而抗肿瘤药环磷酰胺对免疫功能低下的Lewis肺癌小鼠脾淋巴细胞ConA增殖反应、LPS增殖反应IL-2与IL-1均无明显影响。
, 百拇医药
黄芪、刺五加是祖国传统的扶正固本中药，为芪加合剂的主要组方药物，因此芪加合剂调节Lewis肺癌细胞免疫功能的作用与祖国医学固本理论相符。这将为芪加合剂开发及扶正抗癌新药提供了实验依据。
作者简介：张运芳，女，35岁，实验师；
李 俊，男，39岁，教授，博士生导师
参考文献
1 周金煦，陈瑞婷.抗肿瘤药物实验法.见徐叔云，卞如濂，陈 修主编.药理实验方法学. 第2版，北京：人民卫生出版社，1991：1 423～1 436
2 陈敏珠，魏 伟，张 泓等.免疫抑制药和免疫增强药实验法. 见徐叔云，卞如濂，陈 修主编. 药理实验方法学. 第2版，北京：人民卫生出版社，1991：1 208～1 245
1999-03-15收稿
1999-06-15修回, http://www.100md.com
单位：安徽医科大学临床药理研究所，合肥 230032
关键词：肺肿瘤；免疫学；黄芪；药理学；鼠
安徽医科大学学报990410
摘要：目的 研究芪加合剂对lewis肺癌小鼠免疫功能的影响。方法 检测ConA和LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应和IL-1、IL-2产生的水平。结果 芪加合剂(13.75～27.5 g.kg-1)可使荷癌小鼠低下的T、B淋巴细胞增殖反应，脾细胞产生IL-2恢复至接近正常水平，还可促进荷癌小鼠腹腔巨噬细胞产生IL-2。结论 芪加合剂抑制肿瘤作用可能与其提高荷瘤小鼠细胞免疫功能有关。
中国图书资料分类法分类号：R734.2； R967
, 百拇医药
Effect of Qijaheji on the cell immune function
in mice with Lewis lung carcinoma
Zhang Yunfang, Li Jun, Jin Yong et al
(Clinical Institute of Pharmacology, Anhui Medical University,Hefei 230032)
Abstract Objective To investigate the effect of Qijaheji on the cell immune function in mice with lung carcinoma. Methods The proliferative reaction of spleen lymphocytes in mice induced by ConA and LPS and the production of IL-1 and IL-2 were determined. Results Qijaheji 13.75～27.5 g.kg-1， ig×7 days or 15 days markedly increased the level of the proliferative reaction of lymphocytes induced dy ConA of LPS and IL-2 produced by spleen cells in mice with Lewis lung carcinoma. The Qijaheji also enhanced the content of IL-1 produced by peritoneal macrophage. Conclusion Inhibition of Qijaheji on Lewis lung carcinoma in mice may be related to the improvement of the immune function.
, http://www.100md.com
MeSH lung neoplasms/immunology; astragalus membranceus/phamacology; mice
芪加合剂为黄芪、刺五加等提取的中药复方制剂。芪加合剂能明显延长Lewis肺癌小鼠平均生存时间。为进一步研究芪加合剂的作用机理，本文研究了芪加合剂对Lewis肺癌小鼠细胞免疫功能的影响。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂 芪加合剂，同济医科大学附属同济医院药剂科提供，批号：930426，含量2 200 g.L-1(以黄芪、刺五加等生药量计算)。临用前用生理盐水稀释，供体内给药。环磷酰胺(Cyclophosphamide, cy)，批号：930505，上海第十二制药厂产品。参芪片，批号：940302，吉林市制药厂产品。刀豆蛋白A(Concanavalin A, ConA)；脂多糖(Lipoplysaccharide, LPS), Sigma公司产品。[3H]TdR，比放射性为666 TBq.μmol-1，中国原子能研究院产品；RPMI 1640，Gibico公司产品。
, 百拇医药
1.2 动物与瘤细胞 C57BL/6J小鼠，♀♂兼用，6～8周龄，体重18 g±3 g，由上海动物中心提供。Lewis肺癌瘤株，从上海药物所引进，用同系C57BL/6J小鼠皮下接种传代。
1.3 仪器 NaPCO-6100型CO2培养箱，美国生产，FJ-2107液体闪计数仪，西安262厂生产，DYQ-Ⅱ型多头细胞收集器，绍兴坡塘医疗器械厂生产。
1.4 荷瘤小鼠模型的制备〔1〕 无菌取出Lewis肺癌瘤块，用0.25%胰蛋白酶-0.04% EDTA消化30 min，经200目尼龙网磨碎过滤，离心(1 500 r.min-1, 5 min)，洗涤2次，计数并配成浓度1×1010活细胞.L-1，每鼠在足跖皮下注射0.1 ml，48 h后(ig)受试药物或等量溶媒，观察药物对荷瘤小鼠治疗作用及细胞免疫的影响。
, http://www.100md.com
1.5 脾细胞的ConA或LPS增殖反应 参照文献〔2〕，用RPMI 1640培养液常规制备小鼠脾细胞悬液(浓度1×1010.L-1)，在96孔培养板上，每孔加入100 ml细胞悬液(终浓度5×109.L-1)，100 μl ConA(终浓度3 mg.L-1)或100 μl LPS(终浓度6 mg.L-1)。每个样品设3个复孔，置37℃，5% CO2培养箱培养48 h，终止前6 h，每孔加入20 μl[3H]TdR(1.48×104 Bq/孔)。培养结束后，收获细胞，用液闪仪测定放射性，以3个复孔cpm值的均值表示结果。
1.6 白细胞介素Ⅱ(IL-2)的诱生与检测 常规制备小鼠脾淋巴细胞悬液(终浓度5×109.L-1)；加入ConA(终浓度3 mg.L-1)，置37℃、5% CO2培养箱培养48 h。收集上清液，离心(2 000 r.min-1, 10 min)，-20℃保存，测IL-2活性。用ConA活化小鼠脾细胞法检测IL-2，以[3H]TdR参入表示IL-2活性。
, 百拇医药
1.7 白细胞介素Ⅰ(IL-1)的诱生与检测 参照文献〔2〕，常规制备小鼠腹腔巨噬细胞悬液(终浓度1×109.L-1)，加入LPS(终浓度6 mg.L-1)，置37℃，5%CO2培养箱培养48 h，收集上清液，离心，-20℃保存，测IL-1的活性。用小鼠胸腺细胞增殖法检测IL-1，以[3H]TdR参入量表示IL-1的活性。
1.8 数据处理 各组实验数据以±s表示，计量资料组间比较采用t检验。
2 结果
2.1 芪加合剂对荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响 荷瘤小鼠制备后48 h ig芪加合剂，连续给药7天或15天，然后无菌取出各组小鼠脾脏，制备脾细胞悬液，检测细胞ConA和LPS增殖反应。表1、表2结果表明，肿瘤对照组ConA和LPS增殖反应明显低于正常对照组，芪加合剂(13.75～27.5 g.kg-1)治疗可使荷瘤小鼠低下的ConA和LPS增殖反应恢复至接近正常水平，且于阳性对照药参芪片疗效相当。而Cy组对荷瘤小鼠的ConA、LPS增殖反应均无明显影响。
, 百拇医药
表1 芪加合剂对荷瘤小鼠ConA增殖反应的影响(
±s, n=6) 组别剂量
g.kg-1.d-1
ConA增殖反应(cpm×10-3)
给药7天
给药15天
正常对照
17.3±2.3
17.0±1.8
, http://www.100md.com
肿瘤对照
11.5±1.5**
9.8±1.2**
芪加合剂
6.88
12.1±2.1**
11.3±1.5**
13.75
14.8±2.2#
14.9±1.6##
, 百拇医药 27.50
16.8±3.0##
16.4±2.4##
参芪片
0.55
17.4±2.8##
17.3±2.6##
Cy
0.02
11.2±1.6**
9.2±1.4**
, 百拇医药
ConA终浓度为3 mg.L-1；与正常对照组比，**P<0.01；与肿瘤对照组比，#P<0.05，##P<0.01表2 芪加合剂对荷瘤小鼠LPS增殖反应的影响(
±s, n=6) 组别剂量g.kg-1.d-1
LPS增殖反应(cpm×10-3)
给药7天
给药15天
正常对照
9.7±1.8
, http://www.100md.com
9.4±1.5
肿瘤对照
5.6±0.9**
4.4±0.6**
芪加合剂
6.88
6.0±0.9**
5.7±0.9**
13.75
8.1±1.4##
6.8±1.4##
, 百拇医药
27.50
9.3±0.8##
8.6±1.7##
参芪片
0.55
10.1±1.4##
9.2±1.9##
Cy
0.02
5.4±0.7**
4.0±0.6**
, 百拇医药
LPS终浓度为6 mg.L-1；与正常对照组比，**P<0.01；与肿瘤对照组比，##P<0.01
2.2 芪加合剂对荷瘤小鼠产生IL-2的影响 表3结果表明，肿瘤对照组脾细胞产生IL-2活性明显低于正常对照组，芪加合剂(13.75～27.5 g.kg-1)治疗可使其低下的IL-2产生恢复至正常水平，而Cy组对荷瘤小鼠IL-2水平，无明显影响。
表3 芪加合剂对荷瘤小鼠IL-2的影响(
±s, n=6) 组别剂量g.kg-1.d-1
, 百拇医药
IL-2活性(cpm×10-3)
给药7天
给药15天
正常对照
12.3±1.6
12.1±1.4
肿瘤对照
8.3±1.2**
7.6±0.8**
芪加合剂
6.88
, 百拇医药 8.9±1.4**
8.4±0.9**
13.75
10.3±1.6#
10.6±1.2##
27.50
11.5±1.1##
11.4±1.1##
Cy
0.02
8.1±1.0**
, 百拇医药
6.9±0.7**
ConA终浓度为3 mg.L-1；与正常对照组比，**P<0.01；与肿瘤对照组比，#P<0.05，##P<0.01
2.3 芪加合剂对荷瘤小鼠产生IL-1的影响 表4结果表明，肿瘤对照小鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1活性高于正常对照组，芪加合剂(13.8～27.5 g.kg-1)治疗7，14天均可明显提高荷瘤小鼠巨噬细胞产生IL-1，而Cy组对荷瘤小鼠的IL-1产生均无明显影响。
表4 芪加合剂对荷瘤小鼠IL-1的影响(
±s, n=6) 组别, http://www.100md.com
剂量
g.kg-1.d-1
IL-2活性(cpm×10-3)
给药7天
给药15天
正常对照
11.9±1.2
11.4±1.5
肿瘤对照
15.4±1.8**
14.5±1.7**
, http://www.100md.com
芪加合剂
6.88
15.9±1.7**
16.0±1.4**
13.75
16.8±1.9**
17.3±2.2**#
27.50
18.9±2.4**#
19.1±2.7**##
, http://www.100md.com
Cy
0.02
14.8±1.2**
13.4±1.2*
LPS终浓度为6 mg.L-1；与正常对照组比，*P<0.05，**P<0.01；与肿瘤对照组比，#P<0.05，##P<0.013 讨论
芪加合剂(芪加合剂(ig，13.75～27.5 g.kg-1)×7天或15天均能延长Lewis肺癌小鼠平均生存时间。本研究发现，在Lewis肺癌模型上，芪加合剂除具有一定抗肿瘤作用外，还能使Lewis肺癌小鼠低下的T、B淋巴细胞增殖反应及脾细胞产生的IL-2恢复至接近正常水平，且疗效与肿瘤辅助治疗药参芪片相当，并能促使荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1。而抗肿瘤药环磷酰胺对免疫功能低下的Lewis肺癌小鼠脾淋巴细胞ConA增殖反应、LPS增殖反应IL-2与IL-1均无明显影响。
, 百拇医药
黄芪、刺五加是祖国传统的扶正固本中药，为芪加合剂的主要组方药物，因此芪加合剂调节Lewis肺癌细胞免疫功能的作用与祖国医学固本理论相符。这将为芪加合剂开发及扶正抗癌新药提供了实验依据。
作者简介：张运芳，女，35岁，实验师；
李 俊，男，39岁，教授，博士生导师
参考文献
1 周金煦，陈瑞婷.抗肿瘤药物实验法.见徐叔云，卞如濂，陈 修主编.药理实验方法学. 第2版，北京：人民卫生出版社，1991：1 423～1 436
2 陈敏珠，魏 伟，张 泓等.免疫抑制药和免疫增强药实验法. 见徐叔云，卞如濂，陈 修主编. 药理实验方法学. 第2版，北京：人民卫生出版社，1991：1 208～1 245
1999-03-15收稿
1999-06-15修回, http://www.100md.com