银杏叶提取物对环磷酰胺模型小鼠记忆和免疫的影响
作者：明 亮 张 艳 李卫平 尹艳艳
单位：安徽医科大学药理教研室，合肥 230032
关键词：银杏；植物；提取物；环磷酰胺；学习；药物作用；记忆；药物作用；免疫性；小鼠
安徽医科大学学报990603 摘要 目的 观察银杏叶提取物(EGB)对环磷酰胺模型小鼠记忆和免疫的影响。方法 以环磷酰胺(Cy 80mg.kg-1 sc)诱导C57BL/6J小鼠免疫功能低下和学习记忆障碍模型，采用跳台法作行为检测，单向免疫扩散法和二硝基氟苯诱导迟发型超敏反应法测定有关免疫指标。结果 EGB(40、80 mg.kg-1.d-1×20 d,ig)可减少小鼠的跳台错误次数，延长SDL，缩短EL；使小鼠降低的IgG、耳片肿胀度、脾及胸腺指数明显增加。结论 EGB对Cy诱导的学习记忆障碍能明显改善，对Cy诱导的免疫功能低下有明显的增强作用。
, http://www.100md.com
中国图书资料分类法分类号 R282.71
Effect of extracts of ginkgo biloba leaves on memory and
immunity in mice with cyclophosphamide
Ming Liang,Zhang Yan,Li Weiping et al
(Dept of Pharmacology,Anhui Medical University,Hefei 230032)
Abstract Objective To study the effect of extracts of ginkgo biloba leaves (EGB) on memory and immunity in mice with cyclophosphamide(Cy).Methods The immunosuppressed and dysmnesic mice were induced by Cy(80 mg.kg-1，sc).The ability of learning and memory were explored using step-down test.The immunomodulatory effects of the drug were measured by simple diffusion method and delayed type hypersensitivity(DTH).Results EGB (40,80mg.kg-1，ig,qd×20 days) reduced the mistaken time of step-down,prolonged SDL,shortened EL,increased the level of serum IgG and ear swelling.Conclusion EGB improves the impairment of learning and memory induced by Cy.EGB has an enhanced effect on experimental immunosuppression in mice.
, http://www.100md.com
MeSH ginkgo biloba; plant extracts/pharmacol;cyclophosphamide;learning/drug eff;memory/drug eff;immunity mice
银杏是我国的特产植物，其开发利用意义深远。银杏叶提取物(extracts of ginkgo biloba leaves,EGB)的研究是一个热点〔1，2〕。最近文献〔3〕报道，采用环磷酰胺诱导C57BL/6J小鼠免疫功能低下的同时，亦可造成记忆缺失，故我们观察了EGB对上述模型小鼠的影响。
1 材料
1.1 药品和试剂 银杏叶提取物(EGB)由安徽金寨神栗食品有限公司提供(总黄酮甙33.84%，总萜内酯11.18%)；美国洋参丸，金日投资(集团)有限公司产品；环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)， 上海第十二制药厂生产； 单抗鼠IgG， 上海第一医科大学生物试剂公司产品；二硝基氟苯(DNFB)和丙酮分别为上海金山县兴塔化工厂和江苏马垫溶剂厂生产。
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1.2 动物 C57BL/6J小鼠，体重(20±3) g,♀♂各半，由本校动物中心(皖医实动准字第01号)提供。
1.3 仪器 小鼠跳台装置用浙江宁海白石药检仪器厂生产的声—光—电单向穿梭箱改装而成。
2 方法和结果
实验分组情况如表中所示。小鼠灌胃给药，qd×20d，测试前5d，小鼠一次性sc Cy 80 mg.kg-1，以造成免疫功能低下和学习记忆障碍的动物模型。各组数据以
±s表示，组间比较采用t检验。
2.1 EGB对Cy诱导小鼠学习和记忆障碍的影响 最后一次给药后1 h，采用跳台法〔3〕对小鼠进行训练，24h后进行测验。观察并记录小鼠跳下平台的潜伏期(step-down latency,SDL)、跳上平台的潜伏期(escape latency,EL)以及跳台错误次数。
, 百拇医药
与Cy组比较，EGB可使小鼠跳台错误次数减少，SDL延长及EL缩短。见表1。
2.2 EGB对小鼠血清IgG的影响 测定IgG含量前5 d，各组小鼠(蒸馏水组除外)每只ip 10%羊红细胞(SRBC)0.2 ml致敏。5d后，小鼠摘眼球取血，采用单向免疫扩散法〔4〕测定血清IgG含量。
与Cy组比较，EGB 40、80mg.kg-1可使小鼠降低的血清IgG含量明显升高。见表2。
表1 EGB对Cy诱导小鼠学习和记忆障碍的影响(±s,n=10) 组别
剂量
(mg.kg-1)
, 百拇医药
跳台错误次数
测验时潜伏期(s)
训练(5 min)
测验(3 min)
SDL
EL
蒸馏水
—
4.4±2.8
2.1±0.7
93.6±62.3
2.6±1.1
, 百拇医药 Cy
80
7.6±1.7**
3.4±1.2**
42.7±28.5*
4.3±1.4**
洋参丸+Cy
200+80
4.9±2.3△△
2.3±1.0△
81.4±64.8
, http://www.100md.com
2.7±1.6△
EGB+Cy
20+80
6.8±1.6
2.7±1.3
56.6±43.7
3.5±1.2
40+80
5.1±3.2△
2.8±0.9
69.3±38.9
2.9±2.0
, 百拇医药
80+80
4.6±2.5△△
2.4±0.9△
85.7±55.4△
2.9±1.7△
与蒸馏水组比较：*P<0.05，**P<0.01；与Cy组比较：△P<0.05，△△P<0.01表2 EGB对小鼠血清IgG的影响(±s,n=10) 组别
剂量(mg.kg-1)
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IgG含量(g.L-1)
蒸馏水
—
13.8±3.2
Cy
80
9.2±2.8**
洋参丸+Cy
200+80
13.6±3.6△△
EGB+Cy
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20+80
11.5±3.8
40+80
13.0±3.5△
80+80
13.4±4.4△
与蒸馏水组比较：**P<0.01；
与Cy组比较：△P<0.05，△△P<0.012.3 EGB对DNFB诱导小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响 参照文献〔5〕，攻击前5天，小鼠腹部去毛，将1% DNFB丙酮麻油溶液100 μl涂抹于上以致敏，致敏5天后，在小鼠右耳两面涂1% DNFB丙酮麻油溶液进行攻击，24 h后处死小鼠，取下直径8mm的左右耳片称重。同时取小鼠胸腺和脾脏称重，计算耳片肿胀度(左右耳片重量之差)以及脾、胸腺指数(每10 g体重的脏器毫克数)。
, 百拇医药
与Cy组比较，EGB 40、80mg.kg-1可使小鼠降低的耳片肿胀度、脾及胸腺指数明显增加，见表3。
表3 EGB对DNFB诱导迟发型超敏反应的影响(±s,n=10) 组别
剂量(mg.kg-1)
耳肿胀度(mg)
胸腺指数
脾指数
蒸馏水
—
13.3±2.9
, http://www.100md.com
15.6±4.3
39.2±9.7
Cy
90
7.6±4.0**
7.2±3.7**
21.6±7.8**
洋参丸+Cy
200+80
12.8±2.6△△
10.7±3.4△
, http://www.100md.com
27.8±11.3
EGB+Cy
20+80
10.5±3.9
8.5±6.5
21.4±6.5
40+80
12.7±5.2△
9.3±5.1
24.9±9.9
80+80
13.0±3.4△△
, 百拇医药
11.6±4.6△
28.7±7.1△
与蒸馏水组比较：**P<0.01；与Cy组比较：△P<0.05，△△P<0.013 讨论
本研究表明，环磷酰胺在引起C57BL/6J小鼠免疫功能低下的同时，可使小鼠学习记忆缺失，这与文献〔3〕报道一致。此方法简单易行，同时可观察学习记忆及免疫功能两方面指标，有一定的实用价值。EGB的促智作用已有报道〔1〕，但探讨EGB对环磷酰胺诱导C57BL/6J小鼠学习记忆缺失的影响尚属首次。研究结果表明EGB可使小鼠跳台错误次数减少，SDL延长及EL缩短，从而提示EGB对此模型引起的小鼠学习记忆障碍有明显的改善作用。血清IgG的测定是观察体液免疫功能的方法之一，而DNFB诱导小鼠迟发型超敏反应，在一定程度上反映了细胞免疫状态，实验结果提示EGB能够改善环磷酰胺诱导的体液和细胞免疫功能低下。以上结果为EGB的临床应用提供了必要的实验依据，其作用机制有待进一步深入研究。
, 百拇医药
基金项目：安徽省自然科学基金资助课题(编号95-医-20)
作者简介：明 亮，女，52岁，教授
参考文献
1 丁勤学，刘耕陶，张均田.银杏叶对中枢神经系统的作用及其分子机理.国外医学中医中药分册.1999；21(1)：6～11
2 陈光亮，王钦茂，段炎炎.银杏叶制剂药理研究进展.中药材，1996；19(11)：583～587
3 明亮，张艳.环磷酰胺引起小鼠学习记忆缺失模型初探.中国药理学通报，1998；14(4)：376
4 胡月娟.影响体液免疫功能的实验方法.见：李仪奎主编.中药药理实验方法学.上海：上海科技出版社，1991：159～162
5 中华人民共和国卫生部药政局编.免疫调节药.见：新药(西药)临床前研究指导原则汇编，1993：135～136
1999-10-02收稿，1999-11-15修回, http://www.100md.com
单位：安徽医科大学药理教研室，合肥 230032
关键词：银杏；植物；提取物；环磷酰胺；学习；药物作用；记忆；药物作用；免疫性；小鼠
安徽医科大学学报990603 摘要 目的 观察银杏叶提取物(EGB)对环磷酰胺模型小鼠记忆和免疫的影响。方法 以环磷酰胺(Cy 80mg.kg-1 sc)诱导C57BL/6J小鼠免疫功能低下和学习记忆障碍模型，采用跳台法作行为检测，单向免疫扩散法和二硝基氟苯诱导迟发型超敏反应法测定有关免疫指标。结果 EGB(40、80 mg.kg-1.d-1×20 d,ig)可减少小鼠的跳台错误次数，延长SDL，缩短EL；使小鼠降低的IgG、耳片肿胀度、脾及胸腺指数明显增加。结论 EGB对Cy诱导的学习记忆障碍能明显改善，对Cy诱导的免疫功能低下有明显的增强作用。
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中国图书资料分类法分类号 R282.71
Effect of extracts of ginkgo biloba leaves on memory and
immunity in mice with cyclophosphamide
Ming Liang,Zhang Yan,Li Weiping et al
(Dept of Pharmacology,Anhui Medical University,Hefei 230032)
Abstract Objective To study the effect of extracts of ginkgo biloba leaves (EGB) on memory and immunity in mice with cyclophosphamide(Cy).Methods The immunosuppressed and dysmnesic mice were induced by Cy(80 mg.kg-1，sc).The ability of learning and memory were explored using step-down test.The immunomodulatory effects of the drug were measured by simple diffusion method and delayed type hypersensitivity(DTH).Results EGB (40,80mg.kg-1，ig,qd×20 days) reduced the mistaken time of step-down,prolonged SDL,shortened EL,increased the level of serum IgG and ear swelling.Conclusion EGB improves the impairment of learning and memory induced by Cy.EGB has an enhanced effect on experimental immunosuppression in mice.
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MeSH ginkgo biloba; plant extracts/pharmacol;cyclophosphamide;learning/drug eff;memory/drug eff;immunity mice
银杏是我国的特产植物，其开发利用意义深远。银杏叶提取物(extracts of ginkgo biloba leaves,EGB)的研究是一个热点〔1，2〕。最近文献〔3〕报道，采用环磷酰胺诱导C57BL/6J小鼠免疫功能低下的同时，亦可造成记忆缺失，故我们观察了EGB对上述模型小鼠的影响。
1 材料
1.1 药品和试剂 银杏叶提取物(EGB)由安徽金寨神栗食品有限公司提供(总黄酮甙33.84%，总萜内酯11.18%)；美国洋参丸，金日投资(集团)有限公司产品；环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)， 上海第十二制药厂生产； 单抗鼠IgG， 上海第一医科大学生物试剂公司产品；二硝基氟苯(DNFB)和丙酮分别为上海金山县兴塔化工厂和江苏马垫溶剂厂生产。
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1.2 动物 C57BL/6J小鼠，体重(20±3) g,♀♂各半，由本校动物中心(皖医实动准字第01号)提供。
1.3 仪器 小鼠跳台装置用浙江宁海白石药检仪器厂生产的声—光—电单向穿梭箱改装而成。
2 方法和结果
实验分组情况如表中所示。小鼠灌胃给药，qd×20d，测试前5d，小鼠一次性sc Cy 80 mg.kg-1，以造成免疫功能低下和学习记忆障碍的动物模型。各组数据以
±s表示，组间比较采用t检验。2.1 EGB对Cy诱导小鼠学习和记忆障碍的影响 最后一次给药后1 h，采用跳台法〔3〕对小鼠进行训练，24h后进行测验。观察并记录小鼠跳下平台的潜伏期(step-down latency,SDL)、跳上平台的潜伏期(escape latency,EL)以及跳台错误次数。
, 百拇医药
与Cy组比较，EGB可使小鼠跳台错误次数减少，SDL延长及EL缩短。见表1。
2.2 EGB对小鼠血清IgG的影响 测定IgG含量前5 d，各组小鼠(蒸馏水组除外)每只ip 10%羊红细胞(SRBC)0.2 ml致敏。5d后，小鼠摘眼球取血，采用单向免疫扩散法〔4〕测定血清IgG含量。
与Cy组比较，EGB 40、80mg.kg-1可使小鼠降低的血清IgG含量明显升高。见表2。
表1 EGB对Cy诱导小鼠学习和记忆障碍的影响(
±s,n=10) 组别剂量
(mg.kg-1)
, 百拇医药
跳台错误次数
测验时潜伏期(s)
训练(5 min)
测验(3 min)
SDL
EL
蒸馏水
—
4.4±2.8
2.1±0.7
93.6±62.3
2.6±1.1
, 百拇医药 Cy
80
7.6±1.7**
3.4±1.2**
42.7±28.5*
4.3±1.4**
洋参丸+Cy
200+80
4.9±2.3△△
2.3±1.0△
81.4±64.8
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2.7±1.6△
EGB+Cy
20+80
6.8±1.6
2.7±1.3
56.6±43.7
3.5±1.2
40+80
5.1±3.2△
2.8±0.9
69.3±38.9
2.9±2.0
, 百拇医药
80+80
4.6±2.5△△
2.4±0.9△
85.7±55.4△
2.9±1.7△
与蒸馏水组比较：*P<0.05，**P<0.01；与Cy组比较：△P<0.05，△△P<0.01表2 EGB对小鼠血清IgG的影响(
±s,n=10) 组别剂量(mg.kg-1)
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IgG含量(g.L-1)
蒸馏水
—
13.8±3.2
Cy
80
9.2±2.8**
洋参丸+Cy
200+80
13.6±3.6△△
EGB+Cy
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20+80
11.5±3.8
40+80
13.0±3.5△
80+80
13.4±4.4△
与蒸馏水组比较：**P<0.01；
与Cy组比较：△P<0.05，△△P<0.012.3 EGB对DNFB诱导小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响 参照文献〔5〕，攻击前5天，小鼠腹部去毛，将1% DNFB丙酮麻油溶液100 μl涂抹于上以致敏，致敏5天后，在小鼠右耳两面涂1% DNFB丙酮麻油溶液进行攻击，24 h后处死小鼠，取下直径8mm的左右耳片称重。同时取小鼠胸腺和脾脏称重，计算耳片肿胀度(左右耳片重量之差)以及脾、胸腺指数(每10 g体重的脏器毫克数)。
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与Cy组比较，EGB 40、80mg.kg-1可使小鼠降低的耳片肿胀度、脾及胸腺指数明显增加，见表3。
表3 EGB对DNFB诱导迟发型超敏反应的影响(
±s,n=10) 组别剂量(mg.kg-1)
耳肿胀度(mg)
胸腺指数
脾指数
蒸馏水
—
13.3±2.9
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15.6±4.3
39.2±9.7
Cy
90
7.6±4.0**
7.2±3.7**
21.6±7.8**
洋参丸+Cy
200+80
12.8±2.6△△
10.7±3.4△
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27.8±11.3
EGB+Cy
20+80
10.5±3.9
8.5±6.5
21.4±6.5
40+80
12.7±5.2△
9.3±5.1
24.9±9.9
80+80
13.0±3.4△△
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11.6±4.6△
28.7±7.1△
与蒸馏水组比较：**P<0.01；与Cy组比较：△P<0.05，△△P<0.013 讨论
本研究表明，环磷酰胺在引起C57BL/6J小鼠免疫功能低下的同时，可使小鼠学习记忆缺失，这与文献〔3〕报道一致。此方法简单易行，同时可观察学习记忆及免疫功能两方面指标，有一定的实用价值。EGB的促智作用已有报道〔1〕，但探讨EGB对环磷酰胺诱导C57BL/6J小鼠学习记忆缺失的影响尚属首次。研究结果表明EGB可使小鼠跳台错误次数减少，SDL延长及EL缩短，从而提示EGB对此模型引起的小鼠学习记忆障碍有明显的改善作用。血清IgG的测定是观察体液免疫功能的方法之一，而DNFB诱导小鼠迟发型超敏反应，在一定程度上反映了细胞免疫状态，实验结果提示EGB能够改善环磷酰胺诱导的体液和细胞免疫功能低下。以上结果为EGB的临床应用提供了必要的实验依据，其作用机制有待进一步深入研究。
, 百拇医药
基金项目：安徽省自然科学基金资助课题(编号95-医-20)
作者简介：明 亮，女，52岁，教授
参考文献
1 丁勤学，刘耕陶，张均田.银杏叶对中枢神经系统的作用及其分子机理.国外医学中医中药分册.1999；21(1)：6～11
2 陈光亮，王钦茂，段炎炎.银杏叶制剂药理研究进展.中药材，1996；19(11)：583～587
3 明亮，张艳.环磷酰胺引起小鼠学习记忆缺失模型初探.中国药理学通报，1998；14(4)：376
4 胡月娟.影响体液免疫功能的实验方法.见：李仪奎主编.中药药理实验方法学.上海：上海科技出版社，1991：159～162
5 中华人民共和国卫生部药政局编.免疫调节药.见：新药(西药)临床前研究指导原则汇编，1993：135～136
1999-10-02收稿，1999-11-15修回, http://www.100md.com