汞-二苯卡巴腙染色确定神经磷脂的方法探讨
作者：刘晓平
单位：合肥市第二人民医院检验科，合肥 230011
关键词：尼曼-皮克病；染色法
安徽医科大学学报990639 中国图书资料分类法分类号 R742.89
Niemann-Pick是一种少见的家族性先天性磷脂(鞘磷脂)代谢紊乱性疾病。通常必须用数种化学染色才能鉴别，工作量大，时间长，缺乏特异性试验，我们试图将神经磷脂特异性染色技术应用于Niemann-Piek病的诊断，结果完全符合。现将汞-二苯卡巴腙神经磷脂染色的方法介绍如下。
1 实验方法
1.1 材料 Niemann-Pick病人骨髓片2张，正常骨髓片2张，Garcher病人骨髓片2张。
1.2 试剂 Balcecqa甲醛-钙固定剂；13.3 mol.L-1甲醛15 ml加0.117 mol.L-1 CaCl2 85 ml混匀即成。硝酸汞溶液：溶于13 mol.L-1乙醇的饱和硝酸汞10 ml，加入0.03 mol.L-1 NaCl 2 ml。0.3 mol.L-1 KI，0.147 mol.L-1醋酸钠。
二苯卡巴腙乙醇溶液：二苯卡巴腙加入到19.6 mol.L-1乙醇100 ml至饱和状态。(二苯卡巴腙为AR，北京化工厂，批号840614)。丙酮(AR)，乙醚(AR)。
1.3 方法 根据文献组织化学染色法略加改变。
1.3.1 ①将骨髓片置于冷藏的甲醛-钙固定剂中16～14 h。②置于丙酮内冲洗。③室温下置于乙醚中48 h。④在丙酮中彻底涮洗，然后再用流水冲洗5 min。⑤将骨髓片置于硝酸汞溶液内，于0～4℃浸24 h，取出用流水冲洗5 min。⑥用0.3 mol.L-1KI处理4～5 min，取出水洗5 min。⑦用0.147 mol.L-1醋酸钠处理10 min。⑧置于二苯卡巴腙乙醇溶液内10 min。⑨在水中彻底洗涤后，待干，镜检。
2 结果
Niemann-pick细胞呈阳性反应，染成弥漫性蓝紫色，正常细胞阴性，Gancher细胞阴性。。
3 讨论
Okomoto认为组织切片经过丙酮处理而被除掉的仅是脑苷脂，乙醚提取后组织片中剩下的仅是神经磷脂。二价汞和神经磷脂的不饱和C-C键结合，形成
汞和神经磷脂的络合物，用KI除掉未结合的汞，用醋酸钠酸化后，再用二苯卡巴腙来显示神经磷脂结合的汞，二苯卡巴腙和汞反应形成一种汞的内络合物
呈现弥漫性蓝紫色。故在有神经磷脂的细胞中均有弥漫性蓝紫色，继而证实为Niemann-Pick细胞，对区分Niemann-Pick和Gancher细胞更具有重要价值。
作者简介：刘晓平，女，36岁，主治医师
1999-03-30收稿，1999-11-03修回, 百拇医药
单位：合肥市第二人民医院检验科，合肥 230011
关键词：尼曼-皮克病；染色法
安徽医科大学学报990639 中国图书资料分类法分类号 R742.89
Niemann-Pick是一种少见的家族性先天性磷脂(鞘磷脂)代谢紊乱性疾病。通常必须用数种化学染色才能鉴别，工作量大，时间长，缺乏特异性试验，我们试图将神经磷脂特异性染色技术应用于Niemann-Piek病的诊断，结果完全符合。现将汞-二苯卡巴腙神经磷脂染色的方法介绍如下。
1 实验方法
1.1 材料 Niemann-Pick病人骨髓片2张，正常骨髓片2张，Garcher病人骨髓片2张。
1.2 试剂 Balcecqa甲醛-钙固定剂；13.3 mol.L-1甲醛15 ml加0.117 mol.L-1 CaCl2 85 ml混匀即成。硝酸汞溶液：溶于13 mol.L-1乙醇的饱和硝酸汞10 ml，加入0.03 mol.L-1 NaCl 2 ml。0.3 mol.L-1 KI，0.147 mol.L-1醋酸钠。
二苯卡巴腙乙醇溶液：二苯卡巴腙加入到19.6 mol.L-1乙醇100 ml至饱和状态。(二苯卡巴腙为AR，北京化工厂，批号840614)。丙酮(AR)，乙醚(AR)。
1.3 方法 根据文献组织化学染色法略加改变。
1.3.1 ①将骨髓片置于冷藏的甲醛-钙固定剂中16～14 h。②置于丙酮内冲洗。③室温下置于乙醚中48 h。④在丙酮中彻底涮洗，然后再用流水冲洗5 min。⑤将骨髓片置于硝酸汞溶液内，于0～4℃浸24 h，取出用流水冲洗5 min。⑥用0.3 mol.L-1KI处理4～5 min，取出水洗5 min。⑦用0.147 mol.L-1醋酸钠处理10 min。⑧置于二苯卡巴腙乙醇溶液内10 min。⑨在水中彻底洗涤后，待干，镜检。
2 结果
Niemann-pick细胞呈阳性反应，染成弥漫性蓝紫色，正常细胞阴性，Gancher细胞阴性。。
3 讨论
Okomoto认为组织切片经过丙酮处理而被除掉的仅是脑苷脂，乙醚提取后组织片中剩下的仅是神经磷脂。二价汞和神经磷脂的不饱和C-C键结合，形成
汞和神经磷脂的络合物，用KI除掉未结合的汞，用醋酸钠酸化后，再用二苯卡巴腙来显示神经磷脂结合的汞，二苯卡巴腙和汞反应形成一种汞的内络合物呈现弥漫性蓝紫色。故在有神经磷脂的细胞中均有弥漫性蓝紫色，继而证实为Niemann-Pick细胞，对区分Niemann-Pick和Gancher细胞更具有重要价值。作者简介：刘晓平，女，36岁，主治医师
1999-03-30收稿，1999-11-03修回, 百拇医药