NOVA16急诊生化分析仪试剂包中A、R、H液的研制与应用
作者：万士林 丁海明 庄俊华 徐宁
单位：广东省中医院，广州 510120
关键词：试剂盒；诊断
安徽医科大学学报000409
摘要 目的 研制NOVA16全自动急诊生化分析仪试剂包中A、R、H液。方法 根据电极法测定血浆(或全血)中Na+、K+、Cl-、TCO2、Glu、Urea、Cr等物质浓度(活度)和红细胞压积(Hematocrit， Hct)的原理及标准液配制的有关要求，配制类似血浆水的A液、CO2释放液H及参比液R。结果 自配A、R、H液与原装试剂的主要理化指标：pH、渗透压、电极斜率、线性范围及试剂的稳定性等方面均一致。自配试剂的批内、批间精密度符合要求，与原装试剂之间的相关性好(r=0.950～1.000)，自配试剂所测结果批内、批间稳定性好(P>0.05)，长期使用对电极无损害。结论 自配试剂的准确性、精密度符合临床要求，提示自配A、R、H液可代替原装试剂A、R、H液。
, http://www.100md.com
中图分类号 R446
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)04-0272-03
Development and applications of solution A、 R、 H in
NOVA16 analyzer reagent kit
Wan Shilin, Ding Haiming, Zhuang Junhua et al
(Dept of Clinical Laboratory, Guangdong Provincial Hospital of TCM, Guangzhou 510120)
Abstract Objective To develop solution A、 R、 H in NOVA16 analyzer reagent kit. Methods On the principle of electrode method for detecting Na+、 K+、 Cl-、 TCO2、 Urea、 Cr、 Glu、 Hct and under the regulation of preparing standard solution, internal standard solution A、 similar to the constituents of plasma、 CO2 releasing solution H and referance solution R were prepared. Results The main biochemical indicators such as pH, osmole, electrode slope and linear scope between self-made solution A、 R 、H and the primary reagent were in good accordance. The accuracy of results with self-made reagent was correlated well with those of the primary reagent (r=0.950～1.00). There was good stability in the same lot (P>0.05) or among different lots (P>0.05) after six months and no damage to the electrodes was observed. Conclusion The accuracy of self-made reagent meets the qualifications of clinical application, and it can be used for the substitute of the primary solution A、 R、 H.
, 百拇医药
MeSH reagent kits/diagnostic
NOVA16全自动急诊生化分析仪(NOVA16分析仪)采用电极法的原理，能对血浆(或全血)中Na+、K+、Cl-、TCO2、Glu、Urea、Cr等物质和Hct直接测定。标本用量少，速度快，准确度好，精密度高，被许多实验室所采用。NOVA16分析仪有两点定标和一点定标两种定标方式。两点定标是为了建立各电极斜率用，每2 h定标1次，消耗试剂包中A、B、C、R、H液；一点定标是为了检测电极漂移，每次检测标本时都做一点定标，消耗试剂包中A、R、H液。由于标本较多，使试剂包中A、R、H消耗过快，当试剂包中A、R、H液用完后，其它试剂(B、C、F等试剂)尚存1/2～3/4，造成极大的浪费。目前国内对其它型号电解质分析仪Na+、K+、Cl-、TCO2等试剂研究有所报道〔1〕，但对电极法测定Na+、K+、Cl-、TCO2、Urea、Cr、Glu、Hct等多参数试剂研究尚未见报道。同时，此类试剂目前在国内无生产，完全依赖进口，价格昂贵。因此，研制与开发A、R、H液具有重要的实际意义。根据电极法测定物质浓度(活度)的原理及标准液配制的有关要求〔2，3〕研制出A、R、H液，并与原装试剂对比分析，现报道如下。
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1 材料与方法
1.1 标本收集
1.1.1 留取肝素锂抗凝病人全血30份。
1.1.2 质控物DADE Level 1 EX1-109。
1.2 试剂
1.2.1 NOVA16原装配套试剂Lot:908423。
1.2.2 自配A液(mmol*L-1)：Na+ 140、K+ 4.0、Cl- 113、GLU 4.44、Urea 3.57、HCO-3 20、Cr 88.6，加适量的离子活度调节剂、稳定剂、防腐剂等。H液：CO2释放剂。R液：KCl 2.0 mmol*L-1。全部试剂均放在室温保存。
, 百拇医药
1.3 仪器 NOVA16(美国)，NOVA D血气分析仪(美国)，FISKE ONE-TENOSMOEITER冰点渗透仪(德国)，万分之一分析天平(上海天平仪器厂)。
1.4 方法
1.4.1 先用原装试剂包定标，测定标本，记录各测定结果及相关仪器参数。
1.4.2 换上自配A、R、H液，灌注后定标，进行检测，记录各测定结果及相关仪器参数。
2 结果
自配A、R、H液与原装A、R、H液主要理化指标、pH、渗透压完全一致。自配A、R、H液与原装A、R、H液的电极反应性(电极斜率)一致。线性范围：取NOVA 16分析仪原装A、R、H液做标本分析测定，结果在Na+(80～140 mmol*L-1)、K+(4～10 mmol*L-1)、Cl-(58～113 mmol*L-1)、Urea(3.45～16.9 mmol*L-1)、Cr(88.6～886 mmol*L-1)、TCO2(10～20 mmol*L-1)浓度时线性好。相关性试验：自配A、R、H液(X)与原装A、R、H液(Y)分别按方法1、2测定不同浓度的全血标本(含高、中、低浓度)30份(表1)。表1 自配A、R、H液(X)与原装A、R、H液(Y)测定结果进行相关性比较(n=30) 项目
(mmol*L-1)(mmol*L-1 )
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r
回归直线方程
Na+
145.1(117 178)
146.5(116 174)
0.988=2.59+0.967X
K+
4.3(2.1 6.3)
4.2(2.0 6.4)
0.993=0.30+1.082X
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Cl-
105.8(87 129)
104.9(85 131)
0.976=1.31+1.010X
TCO2
21.2(11 39)
21.5(0 37)
0.997=-0.83+1.053X
Glu
, 百拇医药
5.36(1.8 25.3)
5.29(1.9 25.8)
0.995=-0.33+0.995X
Urea
4.2(1.5 21.0)
4.3(1.7 20.5)
0.994=-0.38+1.024X
Cr
93(28 422)
, 百拇医药
95(25 419)
0.982=9.40+0.968X
Hct
0.42(0.32 0.48)
0.41(0.37 0.46)
0.989=0.67+0.957X
Gap
13.8(6 23)
13.4(7 25)
, 百拇医药
0.994=1.63+0.974X
Osm
298(275 328)
296(271 322)
0.985=3.97+1.008X
Bu/Cr
12.3(5.8 15.8)
12.1(5.8 16.3)
0.971=0.85+0.994X
, 百拇医药
精密度试验：取Dade Level 1 Ex 1-109质控血清，按方法2测批内、批间各30次(表2)。自配A、R、H液所测值精密度好，能满足检验要求。
表2 自配A、R、H液测质控物批内、批间变化 项目
Na+
K+
Cl-
TCO2
Glu
Urea
Cr
批内(CV%)
, 百拇医药
1.30
0.45
1.95
0.52
1.70
1.13
2.76
批间(CV%)
1.90
1.00
2.95
0.95
2.80
, 百拇医药
2.15
4.50
稳定性：①批内：自配A、R、H液及其放置6个月后测定同批质控血清20次，按方法2测定，结果之间无变化(P>0.05)(表3)。②批间：自配A、R、H液两个批号，按方法2对 同一质控血清进行性检测，经比较结果之间无显著性变化(P>0.05)(表4)。表3 自配A、R、H液及其放置6个月后批内
稳定性试验(±s，n=30) 项目
自配A、R、H液(前)(mmol*L-1)
自配A、R、H液(后)(mmol* L-1)
P
, http://www.100md.com
Na+
144.00±1.42
145.00±1.57
>0.05
K+
6.60±0.18
6.40±0.21
>0.05
Cl-11
2.00±2.08
114.00±1.85
, 百拇医药
>0.05
TCO2
25.00±0.52
26.00±0.98
>0.05
Glu1
3.30±0.67
14.10±0.55
>0.05
Urea
4.36±0.49
4.51±1.00
, 百拇医药
>0.05
Cr
85.00±3.24
87.00±2.81
>0.05
表4 自配两批A、R、H液对同一质控血清批间
稳定性试验如下 (±s，n=30) 项目自配
A、R、H液(991024)(mmol*L-1)
自配A、R、H液(991025 )(mmol*L-1)
, 百拇医药
P
Na+
144.00±1.42
145.00±1.52
>0.05
K+
6.60±0.18
6.40±0.50
>0.05
Cl-11
2.00±2.08
110.00±1.28
, http://www.100md.com
>0.05
TCO2
25.00±0.52
26.00±0.44
>0.05
Glu1
3.30±0.67
14.50±0.41
>0.05
Urea
4.36±0.49
4.51±0.38
, 百拇医药
>0.05
Cr
85.00±3.24
87.00±2.51
>0.05
3 讨论
NOVA 16仪采用电极法对Na+、K+、Cl-、TCO2直接进行电位测定。血浆(血清或全血)不用稀释直接进入离子电极通道，根据电极两侧电位的变化，直接反映样本中离子的浓度(活度)。电极反应性受标准液pH、离子强度、渗透压等的影响，所以配标准A液时，要加适量的磷酸盐缓冲液作pH和离子强度调节剂〔2〕，使自配标准液和原装标准液两者在pH、冰点渗透压、电极反应性完全一致，保证结果的准确性。葡萄糖、尿素、肌酐在标准液中的稳定性较差，必需加入稳定剂和防腐剂才可以长期保存。NOVA 16仪采用电阻法结合钠离子浓度校准法测定全血标本Hct，我们用自配标准液测30例全血标本，与原装标准液进行比较，Hct的相关性好，说明自配标准液和原装标准液的电阻(电导率)是一致的。Osm、Gap、及Bu/Cr值的准确性取决于其他物质浓度测定的准确性。自配试剂与原装试剂结果是一致的。
, 百拇医药
R液是参比液，K+、Na+、Cl-、Uera等电极以R液为参比，所以R液直接影响K+、Na+、Cl-、Uera等电极的电极斜率，在测定标本时直接影响K+、Na+、Cl-、Uera等电极两边的电位变化，所以R液浓度不准确时所测标本这几种物质浓度也不准确，故配制R液浓度要非常准确。
H液即CO2释放剂，它与待测标本中的HCO-3反应，释放出CO2，故它的浓度直接影响TCO2结果。浓度过低CO2不能完全释放出来，浓度过高又影响电极的使用寿命。
经实验证明，自配试剂A、R、H液所测结果准确、可靠、精密度高、稳定性好(至少6个月)，完全可以代替原装试剂，大大降低成本，同时也为同类仪器的其他试剂的开发提供线索和参考。
, 百拇医药
作者简介：万士林，男，37岁，硕士研究生，主管技师
参考文献
1，张近强，李振明，隋秀梅. 瑞士AVL986血清K+、Na+、Cl-、TCO2标准液研究及应用. 上海医学检验杂志， 1996；11(1)：37
2，胡望平，朱忠勇. 血清钾钠标准液的两点模拟途径. 上海医学检验杂志， 1992；7(4)：232
3，叶应妩，王毓三. 全国临床检验操作规程. 第2版， 南京：东南大学出版社， 1997：181～182
2000-03-02收稿，2000-06-07修回, http://www.100md.com
单位：广东省中医院，广州 510120
关键词：试剂盒；诊断
安徽医科大学学报000409
摘要 目的 研制NOVA16全自动急诊生化分析仪试剂包中A、R、H液。方法 根据电极法测定血浆(或全血)中Na+、K+、Cl-、TCO2、Glu、Urea、Cr等物质浓度(活度)和红细胞压积(Hematocrit， Hct)的原理及标准液配制的有关要求，配制类似血浆水的A液、CO2释放液H及参比液R。结果 自配A、R、H液与原装试剂的主要理化指标：pH、渗透压、电极斜率、线性范围及试剂的稳定性等方面均一致。自配试剂的批内、批间精密度符合要求，与原装试剂之间的相关性好(r=0.950～1.000)，自配试剂所测结果批内、批间稳定性好(P>0.05)，长期使用对电极无损害。结论 自配试剂的准确性、精密度符合临床要求，提示自配A、R、H液可代替原装试剂A、R、H液。
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中图分类号 R446
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)04-0272-03
Development and applications of solution A、 R、 H in
NOVA16 analyzer reagent kit
Wan Shilin, Ding Haiming, Zhuang Junhua et al
(Dept of Clinical Laboratory, Guangdong Provincial Hospital of TCM, Guangzhou 510120)
Abstract Objective To develop solution A、 R、 H in NOVA16 analyzer reagent kit. Methods On the principle of electrode method for detecting Na+、 K+、 Cl-、 TCO2、 Urea、 Cr、 Glu、 Hct and under the regulation of preparing standard solution, internal standard solution A、 similar to the constituents of plasma、 CO2 releasing solution H and referance solution R were prepared. Results The main biochemical indicators such as pH, osmole, electrode slope and linear scope between self-made solution A、 R 、H and the primary reagent were in good accordance. The accuracy of results with self-made reagent was correlated well with those of the primary reagent (r=0.950～1.00). There was good stability in the same lot (P>0.05) or among different lots (P>0.05) after six months and no damage to the electrodes was observed. Conclusion The accuracy of self-made reagent meets the qualifications of clinical application, and it can be used for the substitute of the primary solution A、 R、 H.
, 百拇医药
MeSH reagent kits/diagnostic
NOVA16全自动急诊生化分析仪(NOVA16分析仪)采用电极法的原理，能对血浆(或全血)中Na+、K+、Cl-、TCO2、Glu、Urea、Cr等物质和Hct直接测定。标本用量少，速度快，准确度好，精密度高，被许多实验室所采用。NOVA16分析仪有两点定标和一点定标两种定标方式。两点定标是为了建立各电极斜率用，每2 h定标1次，消耗试剂包中A、B、C、R、H液；一点定标是为了检测电极漂移，每次检测标本时都做一点定标，消耗试剂包中A、R、H液。由于标本较多，使试剂包中A、R、H消耗过快，当试剂包中A、R、H液用完后，其它试剂(B、C、F等试剂)尚存1/2～3/4，造成极大的浪费。目前国内对其它型号电解质分析仪Na+、K+、Cl-、TCO2等试剂研究有所报道〔1〕，但对电极法测定Na+、K+、Cl-、TCO2、Urea、Cr、Glu、Hct等多参数试剂研究尚未见报道。同时，此类试剂目前在国内无生产，完全依赖进口，价格昂贵。因此，研制与开发A、R、H液具有重要的实际意义。根据电极法测定物质浓度(活度)的原理及标准液配制的有关要求〔2，3〕研制出A、R、H液，并与原装试剂对比分析，现报道如下。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 标本收集
1.1.1 留取肝素锂抗凝病人全血30份。
1.1.2 质控物DADE Level 1 EX1-109。
1.2 试剂
1.2.1 NOVA16原装配套试剂Lot:908423。
1.2.2 自配A液(mmol*L-1)：Na+ 140、K+ 4.0、Cl- 113、GLU 4.44、Urea 3.57、HCO-3 20、Cr 88.6，加适量的离子活度调节剂、稳定剂、防腐剂等。H液：CO2释放剂。R液：KCl 2.0 mmol*L-1。全部试剂均放在室温保存。
, 百拇医药
1.3 仪器 NOVA16(美国)，NOVA D血气分析仪(美国)，FISKE ONE-TENOSMOEITER冰点渗透仪(德国)，万分之一分析天平(上海天平仪器厂)。
1.4 方法
1.4.1 先用原装试剂包定标，测定标本，记录各测定结果及相关仪器参数。
1.4.2 换上自配A、R、H液，灌注后定标，进行检测，记录各测定结果及相关仪器参数。
2 结果
自配A、R、H液与原装A、R、H液主要理化指标、pH、渗透压完全一致。自配A、R、H液与原装A、R、H液的电极反应性(电极斜率)一致。线性范围：取NOVA 16分析仪原装A、R、H液做标本分析测定，结果在Na+(80～140 mmol*L-1)、K+(4～10 mmol*L-1)、Cl-(58～113 mmol*L-1)、Urea(3.45～16.9 mmol*L-1)、Cr(88.6～886 mmol*L-1)、TCO2(10～20 mmol*L-1)浓度时线性好。相关性试验：自配A、R、H液(X)与原装A、R、H液(Y)分别按方法1、2测定不同浓度的全血标本(含高、中、低浓度)30份(表1)。表1 自配A、R、H液(X)与原装A、R、H液(Y)测定结果进行相关性比较(n=30) 项目
(mmol*L-1)(mmol*L-1 ), http://www.100md.com
r
回归直线方程
Na+
145.1(117 178)
146.5(116 174)
0.988
=2.59+0.967XK+
4.3(2.1 6.3)
4.2(2.0 6.4)
0.993
=0.30+1.082X, http://www.100md.com
Cl-
105.8(87 129)
104.9(85 131)
0.976
=1.31+1.010XTCO2
21.2(11 39)
21.5(0 37)
0.997
=-0.83+1.053XGlu
, 百拇医药
5.36(1.8 25.3)
5.29(1.9 25.8)
0.995
=-0.33+0.995XUrea
4.2(1.5 21.0)
4.3(1.7 20.5)
0.994
=-0.38+1.024XCr
93(28 422)
, 百拇医药
95(25 419)
0.982
=9.40+0.968XHct
0.42(0.32 0.48)
0.41(0.37 0.46)
0.989
=0.67+0.957XGap
13.8(6 23)
13.4(7 25)
, 百拇医药
0.994
=1.63+0.974XOsm
298(275 328)
296(271 322)
0.985
=3.97+1.008XBu/Cr
12.3(5.8 15.8)
12.1(5.8 16.3)
0.971
=0.85+0.994X, 百拇医药
精密度试验：取Dade Level 1 Ex 1-109质控血清，按方法2测批内、批间各30次(表2)。自配A、R、H液所测值精密度好，能满足检验要求。
表2 自配A、R、H液测质控物批内、批间变化 项目
Na+
K+
Cl-
TCO2
Glu
Urea
Cr
批内(CV%)
, 百拇医药
1.30
0.45
1.95
0.52
1.70
1.13
2.76
批间(CV%)
1.90
1.00
2.95
0.95
2.80
, 百拇医药
2.15
4.50
稳定性：①批内：自配A、R、H液及其放置6个月后测定同批质控血清20次，按方法2测定，结果之间无变化(P>0.05)(表3)。②批间：自配A、R、H液两个批号，按方法2对 同一质控血清进行性检测，经比较结果之间无显著性变化(P>0.05)(表4)。表3 自配A、R、H液及其放置6个月后批内
稳定性试验(
±s，n=30) 项目自配A、R、H液(前)(mmol*L-1)
自配A、R、H液(后)(mmol* L-1)
P
, http://www.100md.com
Na+
144.00±1.42
145.00±1.57
>0.05
K+
6.60±0.18
6.40±0.21
>0.05
Cl-11
2.00±2.08
114.00±1.85
, 百拇医药
>0.05
TCO2
25.00±0.52
26.00±0.98
>0.05
Glu1
3.30±0.67
14.10±0.55
>0.05
Urea
4.36±0.49
4.51±1.00
, 百拇医药
>0.05
Cr
85.00±3.24
87.00±2.81
>0.05
表4 自配两批A、R、H液对同一质控血清批间
稳定性试验如下 (
±s，n=30) 项目自配A、R、H液(991024)(mmol*L-1)
自配A、R、H液(991025 )(mmol*L-1)
, 百拇医药
P
Na+
144.00±1.42
145.00±1.52
>0.05
K+
6.60±0.18
6.40±0.50
>0.05
Cl-11
2.00±2.08
110.00±1.28
, http://www.100md.com
>0.05
TCO2
25.00±0.52
26.00±0.44
>0.05
Glu1
3.30±0.67
14.50±0.41
>0.05
Urea
4.36±0.49
4.51±0.38
, 百拇医药
>0.05
Cr
85.00±3.24
87.00±2.51
>0.05
3 讨论
NOVA 16仪采用电极法对Na+、K+、Cl-、TCO2直接进行电位测定。血浆(血清或全血)不用稀释直接进入离子电极通道，根据电极两侧电位的变化，直接反映样本中离子的浓度(活度)。电极反应性受标准液pH、离子强度、渗透压等的影响，所以配标准A液时，要加适量的磷酸盐缓冲液作pH和离子强度调节剂〔2〕，使自配标准液和原装标准液两者在pH、冰点渗透压、电极反应性完全一致，保证结果的准确性。葡萄糖、尿素、肌酐在标准液中的稳定性较差，必需加入稳定剂和防腐剂才可以长期保存。NOVA 16仪采用电阻法结合钠离子浓度校准法测定全血标本Hct，我们用自配标准液测30例全血标本，与原装标准液进行比较，Hct的相关性好，说明自配标准液和原装标准液的电阻(电导率)是一致的。Osm、Gap、及Bu/Cr值的准确性取决于其他物质浓度测定的准确性。自配试剂与原装试剂结果是一致的。
, 百拇医药
R液是参比液，K+、Na+、Cl-、Uera等电极以R液为参比，所以R液直接影响K+、Na+、Cl-、Uera等电极的电极斜率，在测定标本时直接影响K+、Na+、Cl-、Uera等电极两边的电位变化，所以R液浓度不准确时所测标本这几种物质浓度也不准确，故配制R液浓度要非常准确。
H液即CO2释放剂，它与待测标本中的HCO-3反应，释放出CO2，故它的浓度直接影响TCO2结果。浓度过低CO2不能完全释放出来，浓度过高又影响电极的使用寿命。
经实验证明，自配试剂A、R、H液所测结果准确、可靠、精密度高、稳定性好(至少6个月)，完全可以代替原装试剂，大大降低成本，同时也为同类仪器的其他试剂的开发提供线索和参考。
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作者简介：万士林，男，37岁，硕士研究生，主管技师
参考文献
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3，叶应妩，王毓三. 全国临床检验操作规程. 第2版， 南京：东南大学出版社， 1997：181～182
2000-03-02收稿，2000-06-07修回, http://www.100md.com