雄风胶囊质量标准研究
作者：芦金清 郑国华 沈福道 孙江桥
单位：湖北中医学院 430061
关键词：雄风胶囊；定性鉴别；淫羊霍甙
湖北中医学院学报990315 摘要 采用TLC法对雄风胶囊中淫羊藿、枸杞子、五味子进行了定性鉴别；并用薄层扫描法测定胶囊中淫羊藿甙的含量。
中国图书分类号 R285.5
Study on Quality standards for Xiongfeng Capsule
Lu Jinging et al
(Hubei College of TCM.Huhan,430061)
, 百拇医药
Abstract:The Herba Epimedii,Fructus Lycii and Fructus schisandrae in Xiongfeng capsule were identified by TLC and the icariin in capsule was determined by TLC-Scanning method.
Key words:Xiongfeng Capsule,Qualitative identification Herba Epimedii Fructus Lycii Fructus schisandrae Icariin
雄风胶囊由淫羊藿、枸杞子、五味子等中药组
成，具有补肾壮阳，益精填髓之功。药理实验证明，该方有抗衰延寿、提高免疫功能等作用。为了有效控制本品质量对其主药质量进行了定性、定量分析；采用转篮法测定了雄风胶囊的总溶出度；并以活性成分淫羊藿甙为指标，运用经典恒温加速实验方法，测定了雄风胶囊在室温(25°C)条件下的有效期，为制剂的生产和质量标准提供可靠方法和参考数据。
, 百拇医药
1 仪器和材料
CS-9000型薄层扫描仪(日本)；721-型分光光度计(上海第三分析仪器厂)；78x型片剂四用测定仪(上海黄海制药厂)；365?nm紫外分析仪(上海科艺光学仪器厂)；LINOMAYN型自动点样器和自动铺板仪(CAMAG瑞士)；微量进样器(武汉市新华仪器厂)；雄风胶囊和阴性对照样品胶囊自制；药材购于湖北省药材公司；淫羊藿甙标准品购于中国药品生物制品检定所；所用试剂为CP及AR级。
2 方法和结果
2.1 定性定量分析
2.1.1 雄风胶囊的化学成分定性鉴别
取样品胶囊10粒，倾出药粉，称取2?g，置200?ml烧杯中，加水100?ml煮沸30分钟，冷却过滤，滤液浓缩至30?ml左右，进行分步萃取，首先滴加浓氨水至pH8～9，用氯仿萃取三次，萃取液于水浴上挥干，为A；母液再用正丁醇萃取三次，萃取液于水浴上挥干，为B；母液为C，分别进行下列试验：①于A中加入稀盐酸液10?ml，振摇溶解，分装3支试管中，第一管加Wagner试剂，产生棕褐色沉淀；第二管加SonnenSchien试剂，产生黄褐色无定形沉淀，滴加氨水后变成蓝色；第三管加ScherbIer试剂，产生褐色无定形沉淀。②于B中加入甲醇4?ml，Zn粉少许，振摇溶解，滴加浓盐酸1?ml，微热，液体变成红棕色。③将C液置试管中，水浴蒸干，残留物用水溶解后，取1?ml,加MoIish试剂，界面出现紫红色环。
, 百拇医药
2.1.2 雄风胶囊的TLC色谱分析
样品液的制备：取雄风胶囊20粒，倾出药粉，研匀，称取4?g，置于烧瓶中，加70%乙醇50?ml加热回流，提取30分钟，滤过，回收乙醇，残渣加70%乙醇定容至15?ml容量中，摇匀备用。
阴性样品液的制备：按处方比例分别称取除去淫羊藿、枸杞子、五味子后的其它药材适量，依照雄风胶囊的制备工艺，制成样品阴性胶囊，取阴性样品药粉3?g，同上述样品液的制备方法，得阴性样品液。
标准品液的制备：取淫羊藿甙标准品，加70%乙醇制成每毫升含2?mg标准品溶液，摇匀备用。
薄层分析：照《中华人民共和国药典》1990年版一部附录57页薄层色谱法项下试验，吸取上述样品液，阴性样品液和标准品溶液各10?μl，点于同一硅胶G板上，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365?nm)下检视或显色，样品液与对照品溶液在TLC色谱中的结果见图1、图2和图3。
, 百拇医药
图1 淫羊藿甙与雄风胶囊的TLC图谱
1.淫羊藿甙标准品液
2.雄风胶囊样品液
3.除去淫羊藿后阴性液
展开剂：氯仿∶甲醇∶丁酮(1∶2∶2)
图2 枸杞子与雄风胶囊的TLC图谱
1.枸杞子药材对照品液
2.雄风胶囊样品液
3.除去枸杞子后阴性样品液
展开剂：乙酸乙酯∶氯仿∶甲酸(6∶4∶1)
, 百拇医药
图3 五味子与雄风胶囊的TLC图谱
1.五味子药材对照品液
2.雄风胶囊样品液
3.除去五味子后阴性样品液
展开剂：苯∶无水乙醇(9∶15)
显色剂：50%硫酸溶液
2.1.3 雄风胶囊中淫羊藿甙的含量测定
根据处方组成和临床运用分析，淫羊藿是方中主药，其淫羊藿甙是淫羊藿的主要活性成分之一，故本实验选择这一成分作为定量检测指标。并以此作为控制雄风胶囊质量标准之一。
① 标准品溶液的制备：精密称取(105°C恒重)淫羊藿甙标准品2.0?g，置10?ml容量瓶中，加70%乙醇振摇溶解，并定容至刻度，浓度为0.2?mg/ml，摇匀备用。
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② 样品液制备：取雄风胶囊20粒，倾出药粉，精密称取4.0?g，置圆底烧瓶中，加70%乙醇30?ml，回流提取1小时，冷却过滤，药渣用70%乙醇洗涤2次，滤液合并定容50?ml，摇匀备用。
③ 薄层分离及扫描条件选择：取高效薄层硅胶板，厚度0.20?mm～0.25?mm，105°C活化1小时，置干燥器中备用，照中国药典1990年版一部附录57页薄层色谱法项下试验，吸取上述样品液和标准品液点于同一高效硅胶板上，以氯仿—甲醇—丁酮(1∶2∶2)为展开剂，展开、取出，晾干，置紫外灯(365?nm)下定位后，于薄层扫描仪上测定，波长λs?275?nm，λR?360?nm，反射法直线扫描，SX=3，狭缝4×6，灵敏度：中，光源D2。
④ 线性范围考察：精密取标准品液0.5，1，2，3，4，5?μl点于同一薄层板上，依上述方法展开后扫描测定，以点样量为横座标，面积积分值为纵坐标，绘制曲线。回归方程：Y=1878.43X+2912.53，r=0.9954，线性范围：0.1～1.0?μg。
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⑤ 样品测定：精密吸取样品液和标准品液各2?μl，点于同一薄层板上，依上述方法层析展开和扫描测定，数据经处理后，结果见表1。
表1 雄风胶囊中淫羊藿甙含量测定结果 编 号
样品含量(%)
变异系数(%)
1
0.123
5.69
2
0.189
4.87
3
, 百拇医药
0.248
1.00
4
0.144
4.67
5
0.213
3.18
⑥ 加样回收实验：取已知淫羊藿甙含量的样品药粉4?g，精密称量，加入淫羊藿甙标准品，按样品液制备方法，得加样回收实验混合液，分别精密吸取标准品液、样品液、混合液点于同一薄层板上，依上述方法展开后扫描测定，结果见表2。表2 淫羊藿甙加样回收实验测定结果 加入淫羊藿
甙量(μg)
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回收淫羊藿
甙量(μg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
CV(%)
0.200
0.198
99.0
0.100
0.101
101.0
, 百拇医药
0.200
0.201
100.5
99.1
3.17
0.100
0.098
98.0
0.100
0.097
97.0
2.2 总溶出度的测定
2.2.1 实验条件选择 取雄风胶囊1粒，于250?ml容量瓶中，加入人工胃液至刻度，置37±0.5°C恒温水浴中，不时振摇，浸渍24小时，静置冷却，取上清液10?ml于50?ml容量瓶中，加人工胃液至刻度，摇匀备用。取空白胶囊壳1粒，照上述操作，得空白对照液。以空白液作对照，扫描测定，样品液在285?nm处有最大吸收峰。
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2.2.2 总溶出度的测定 取雄风胶囊，精密称定，计算平均重量后分别置250?ml容量瓶中，照一项条件操作得雄风胶囊总溶出度测定液。以上述空白液作对照，测定其在285?nm的吸收度，平均为0.892，CV=3.24%。
2.2.3 样品的测定 在样品池中装入人工胃液250?ml，预热至37±0.5°C，保持恒温，取相当于平均粒重的样品雄风胶囊一粒，精密称重后放入转筛内，调节转速100?r/min,浸入介质中开始记时，分别在5～100分钟取样10个，各2?ml置10?ml容量瓶中，加入人工胃液至刻度，同时补充2?ml等温介质于样品池中，以空白液对照，测定其在285?nm处的吸收度，求出每批不同时间的平均累计总溶出百分率。结果见表3。
3 小结与讨论
以淫羊藿，枸杞子，五味子等药材为对照进行定性分析和TLC色谱表明，雄风胶囊制剂中含有黄酮、生物碱、多糖等化学成分；样品液在淫羊藿、枸杞子、五味子对照品溶液位置上有相同斑点，而阴性样品液在此处无斑点显示。以总溶出度为
, 百拇医药
表3 不同时间雄风胶囊总溶出平均累计百分率(n=4) min
样品号
5
10
15
20
25
30
40
60
80
100
1
, 百拇医药
1.78
36.52
87.43
93.76
94.37
93.89
94.26
92.98
91.73
89.88
2
1.92
20.41
, 百拇医药
53.29
73.25
72.56
73.58
74.83
73.93
71.98
68.87
3
1.67
14.97
51.28
69.88
, 百拇医药
82.83
89.08
88.75
87.82
87.25
88.51
4
1.98
78.23
88.79
92.37
91.92
90.63
, 百拇医药
90.27
89.43
89.88
81.35
指标，采用转篮法测定雄风胶囊的溶出度，溶出接近平衡时，样品 1，2，3，4 中总溶出平均累计百分率分别为93.49%，73.92%，88.86%，90.77%，此时的时间T分别为21.3，25.0，27.5，21.3分钟。样品溶出30分钟时，其平均累计总溶出70%以上。
作者简介：芦金清，男，1957年生.副教授
收稿日期：1999-04-20, 百拇医药
单位：湖北中医学院 430061
关键词：雄风胶囊；定性鉴别；淫羊霍甙
湖北中医学院学报990315 摘要 采用TLC法对雄风胶囊中淫羊藿、枸杞子、五味子进行了定性鉴别；并用薄层扫描法测定胶囊中淫羊藿甙的含量。
中国图书分类号 R285.5
Study on Quality standards for Xiongfeng Capsule
Lu Jinging et al
(Hubei College of TCM.Huhan,430061)
, 百拇医药
Abstract:The Herba Epimedii,Fructus Lycii and Fructus schisandrae in Xiongfeng capsule were identified by TLC and the icariin in capsule was determined by TLC-Scanning method.
Key words:Xiongfeng Capsule,Qualitative identification Herba Epimedii Fructus Lycii Fructus schisandrae Icariin
雄风胶囊由淫羊藿、枸杞子、五味子等中药组
成，具有补肾壮阳，益精填髓之功。药理实验证明，该方有抗衰延寿、提高免疫功能等作用。为了有效控制本品质量对其主药质量进行了定性、定量分析；采用转篮法测定了雄风胶囊的总溶出度；并以活性成分淫羊藿甙为指标，运用经典恒温加速实验方法，测定了雄风胶囊在室温(25°C)条件下的有效期，为制剂的生产和质量标准提供可靠方法和参考数据。
, 百拇医药
1 仪器和材料
CS-9000型薄层扫描仪(日本)；721-型分光光度计(上海第三分析仪器厂)；78x型片剂四用测定仪(上海黄海制药厂)；365?nm紫外分析仪(上海科艺光学仪器厂)；LINOMAYN型自动点样器和自动铺板仪(CAMAG瑞士)；微量进样器(武汉市新华仪器厂)；雄风胶囊和阴性对照样品胶囊自制；药材购于湖北省药材公司；淫羊藿甙标准品购于中国药品生物制品检定所；所用试剂为CP及AR级。
2 方法和结果
2.1 定性定量分析
2.1.1 雄风胶囊的化学成分定性鉴别
取样品胶囊10粒，倾出药粉，称取2?g，置200?ml烧杯中，加水100?ml煮沸30分钟，冷却过滤，滤液浓缩至30?ml左右，进行分步萃取，首先滴加浓氨水至pH8～9，用氯仿萃取三次，萃取液于水浴上挥干，为A；母液再用正丁醇萃取三次，萃取液于水浴上挥干，为B；母液为C，分别进行下列试验：①于A中加入稀盐酸液10?ml，振摇溶解，分装3支试管中，第一管加Wagner试剂，产生棕褐色沉淀；第二管加SonnenSchien试剂，产生黄褐色无定形沉淀，滴加氨水后变成蓝色；第三管加ScherbIer试剂，产生褐色无定形沉淀。②于B中加入甲醇4?ml，Zn粉少许，振摇溶解，滴加浓盐酸1?ml，微热，液体变成红棕色。③将C液置试管中，水浴蒸干，残留物用水溶解后，取1?ml,加MoIish试剂，界面出现紫红色环。
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2.1.2 雄风胶囊的TLC色谱分析
样品液的制备：取雄风胶囊20粒，倾出药粉，研匀，称取4?g，置于烧瓶中，加70%乙醇50?ml加热回流，提取30分钟，滤过，回收乙醇，残渣加70%乙醇定容至15?ml容量中，摇匀备用。
阴性样品液的制备：按处方比例分别称取除去淫羊藿、枸杞子、五味子后的其它药材适量，依照雄风胶囊的制备工艺，制成样品阴性胶囊，取阴性样品药粉3?g，同上述样品液的制备方法，得阴性样品液。
标准品液的制备：取淫羊藿甙标准品，加70%乙醇制成每毫升含2?mg标准品溶液，摇匀备用。
薄层分析：照《中华人民共和国药典》1990年版一部附录57页薄层色谱法项下试验，吸取上述样品液，阴性样品液和标准品溶液各10?μl，点于同一硅胶G板上，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365?nm)下检视或显色，样品液与对照品溶液在TLC色谱中的结果见图1、图2和图3。
, 百拇医药
图1 淫羊藿甙与雄风胶囊的TLC图谱
1.淫羊藿甙标准品液
2.雄风胶囊样品液
3.除去淫羊藿后阴性液
展开剂：氯仿∶甲醇∶丁酮(1∶2∶2)
图2 枸杞子与雄风胶囊的TLC图谱
1.枸杞子药材对照品液
2.雄风胶囊样品液
3.除去枸杞子后阴性样品液
展开剂：乙酸乙酯∶氯仿∶甲酸(6∶4∶1)
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图3 五味子与雄风胶囊的TLC图谱
1.五味子药材对照品液
2.雄风胶囊样品液
3.除去五味子后阴性样品液
展开剂：苯∶无水乙醇(9∶15)
显色剂：50%硫酸溶液
2.1.3 雄风胶囊中淫羊藿甙的含量测定
根据处方组成和临床运用分析，淫羊藿是方中主药，其淫羊藿甙是淫羊藿的主要活性成分之一，故本实验选择这一成分作为定量检测指标。并以此作为控制雄风胶囊质量标准之一。
① 标准品溶液的制备：精密称取(105°C恒重)淫羊藿甙标准品2.0?g，置10?ml容量瓶中，加70%乙醇振摇溶解，并定容至刻度，浓度为0.2?mg/ml，摇匀备用。
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② 样品液制备：取雄风胶囊20粒，倾出药粉，精密称取4.0?g，置圆底烧瓶中，加70%乙醇30?ml，回流提取1小时，冷却过滤，药渣用70%乙醇洗涤2次，滤液合并定容50?ml，摇匀备用。
③ 薄层分离及扫描条件选择：取高效薄层硅胶板，厚度0.20?mm～0.25?mm，105°C活化1小时，置干燥器中备用，照中国药典1990年版一部附录57页薄层色谱法项下试验，吸取上述样品液和标准品液点于同一高效硅胶板上，以氯仿—甲醇—丁酮(1∶2∶2)为展开剂，展开、取出，晾干，置紫外灯(365?nm)下定位后，于薄层扫描仪上测定，波长λs?275?nm，λR?360?nm，反射法直线扫描，SX=3，狭缝4×6，灵敏度：中，光源D2。
④ 线性范围考察：精密取标准品液0.5，1，2，3，4，5?μl点于同一薄层板上，依上述方法展开后扫描测定，以点样量为横座标，面积积分值为纵坐标，绘制曲线。回归方程：Y=1878.43X+2912.53，r=0.9954，线性范围：0.1～1.0?μg。
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⑤ 样品测定：精密吸取样品液和标准品液各2?μl，点于同一薄层板上，依上述方法层析展开和扫描测定，数据经处理后，结果见表1。
表1 雄风胶囊中淫羊藿甙含量测定结果 编 号
样品含量(%)
变异系数(%)
1
0.123
5.69
2
0.189
4.87
3
, 百拇医药
0.248
1.00
4
0.144
4.67
5
0.213
3.18
⑥ 加样回收实验：取已知淫羊藿甙含量的样品药粉4?g，精密称量，加入淫羊藿甙标准品，按样品液制备方法，得加样回收实验混合液，分别精密吸取标准品液、样品液、混合液点于同一薄层板上，依上述方法展开后扫描测定，结果见表2。表2 淫羊藿甙加样回收实验测定结果 加入淫羊藿
甙量(μg)
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回收淫羊藿
甙量(μg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
CV(%)
0.200
0.198
99.0
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0.101
101.0
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0.200
0.201
100.5
99.1
3.17
0.100
0.098
98.0
0.100
0.097
97.0
2.2 总溶出度的测定
2.2.1 实验条件选择 取雄风胶囊1粒，于250?ml容量瓶中，加入人工胃液至刻度，置37±0.5°C恒温水浴中，不时振摇，浸渍24小时，静置冷却，取上清液10?ml于50?ml容量瓶中，加人工胃液至刻度，摇匀备用。取空白胶囊壳1粒，照上述操作，得空白对照液。以空白液作对照，扫描测定，样品液在285?nm处有最大吸收峰。
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2.2.2 总溶出度的测定 取雄风胶囊，精密称定，计算平均重量后分别置250?ml容量瓶中，照一项条件操作得雄风胶囊总溶出度测定液。以上述空白液作对照，测定其在285?nm的吸收度，平均为0.892，CV=3.24%。
2.2.3 样品的测定 在样品池中装入人工胃液250?ml，预热至37±0.5°C，保持恒温，取相当于平均粒重的样品雄风胶囊一粒，精密称重后放入转筛内，调节转速100?r/min,浸入介质中开始记时，分别在5～100分钟取样10个，各2?ml置10?ml容量瓶中，加入人工胃液至刻度，同时补充2?ml等温介质于样品池中，以空白液对照，测定其在285?nm处的吸收度，求出每批不同时间的平均累计总溶出百分率。结果见表3。
3 小结与讨论
以淫羊藿，枸杞子，五味子等药材为对照进行定性分析和TLC色谱表明，雄风胶囊制剂中含有黄酮、生物碱、多糖等化学成分；样品液在淫羊藿、枸杞子、五味子对照品溶液位置上有相同斑点，而阴性样品液在此处无斑点显示。以总溶出度为
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表3 不同时间雄风胶囊总溶出平均累计百分率(n=4) min
样品号
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25
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40
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1
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1.78
36.52
87.43
93.76
94.37
93.89
94.26
92.98
91.73
89.88
2
1.92
20.41
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53.29
73.25
72.56
73.58
74.83
73.93
71.98
68.87
3
1.67
14.97
51.28
69.88
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82.83
89.08
88.75
87.82
87.25
88.51
4
1.98
78.23
88.79
92.37
91.92
90.63
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90.27
89.43
89.88
81.35
指标，采用转篮法测定雄风胶囊的溶出度，溶出接近平衡时，样品 1，2，3，4 中总溶出平均累计百分率分别为93.49%，73.92%，88.86%，90.77%，此时的时间T分别为21.3，25.0，27.5，21.3分钟。样品溶出30分钟时，其平均累计总溶出70%以上。
作者简介：芦金清，男，1957年生.副教授
收稿日期：1999-04-20, 百拇医药