小儿清肺止咳露免疫药理的实验研究
作者：曾亚男 彭连生 许国振 任建平
单位：曾亚男(武汉市中医医院 430014)；彭连生(武汉市中医医院 430014)；许国振(武汉市中医医院 430014)；任建平(武汉市中医医院 430014)
关键词：小儿清肺止咳露；免疫抑制动物模型；免疫作用
湖北中医学院学报000109
摘要：以腹腔注射环磷酰胺引起的免疫抑制小鼠为模型，用小儿清肺止咳露灌胃，并以小儿咳喘宁为阳性对照药，观察小儿清肺止咳露对小鼠血清溶菌酶含量、溶血素抗体形成，以及迟发型超敏反应—鼠足垫肿胀试验等非特异性、特异性免疫功能的影响。结果：小儿清肺止咳露可不同程度地提高小鼠血清溶菌酶含量、溶血素抗体形成以及迟发型超敏反应。表明小儿清肺止咳露可明显提高免疫功能。
中图分类号：R272 文献标识码：A 文章编号：1008-987X(2000)01-0021-02
, 百拇医药
Experimental Study on Immunopharmacology of Xiaoer Qingfei Zike Distillat
Zeng yanan，Peng Liansheng，Xu Guozhen,et al
Wuhan Hospital of TCM (430051)
Abstract:To study immunization of xiaoer qingfei zike distillat.Methods:The mice immunosuppressant model was made by injecting cychophosphamide.xiaoer qingfei zike distillat was experimental group.xiaoer kechuan ning was positive control group.Results:xiaoer qingfei zike distillat could increase lysozyme content,promote hemolytic antibody forming and improve delayed hypersensitivity in the mice.Conclusion:xiaoer qingfei zike distillat could raise immunologic function remarkably.
, 百拇医药
Key words:xiaoer qingfei zike distillat Immunosuppressant animal model
Immunologic function
小儿清肺止咳露是我院研制的纯中药制剂，由麦冬、苦杏仁、牡荆叶、陈皮、防风等十几味中药组成，具有养阴润肺、理气健脾、止咳祛痰平喘之功效，临床多用于治疗小儿咳嗽、喘息、痰多，疗效较好。笔者对小儿清肺止咳露进行了免疫药理实验研究。现报道如下。
1 实验材料
1.1 动物
NIH种小白鼠，体重18～22g，年龄1～2月，雌雄各半，由武汉生物制品研究所动物室提供。
1.2 药物
, 百拇医药
小儿清肺止咳露，武汉市中医医院制备；小儿咳喘灵冲剂，广州众胜药厂产(批号：950203)；环磷酰胺，上海第十二制药厂产(批号：960210)。
1.3 试剂
溶菌酶，中科院上海生化所东风生化技术公司产(批号：9211316)；琼脂，青岛四方区化学试剂厂分装；黄色微球菌，同济医科大学免疫教研室提供；绵羊红细胞，同济医科大学实验动物中心提供；补体，新鲜豚鼠(4只)，混合血清SRBC(10∶1)，于4°C吸收30分钟后置-20°C以下备用。
1.4 仪器
751—分光光度计，上海医用仪器厂产。
2 实验方法
2.1 非特异性免疫功能及特异性体液免疫功能
, 百拇医药
取小白鼠60只，雌雄各半，随机分为6组。除正常对照外，另五组每组10只造模。造模组分别灌胃给予生理盐水、小儿咳喘灵、小儿清肺止咳露(10g/kg、20g/kg、30g/kg)，连续给药7天。从第5天起，每天腹腔注射环磷酰胺水液50mg/kg，1次/d，连续3天，造成免疫功能低下模型。第5天，小鼠腹腔注射10%SRBC液，0.1ml/只。第8天，断头处死小鼠，取血，分离血清，按文献法测定血清溶菌酶含量[1，2]。按文献法用分光光度计(波长510nm)测定吸收度OD值[3]。
2.2 特异性细胞免疫功能
取小白鼠60只，雌雄各半，随机分为6组。其中，正常对照组10只作空白对照，另五组每组10只造模。造模每组10只分别灌胃给予生理盐水、小儿咳喘灵、小儿清肺止咳露(10g/kg、20g/kg、30g/kg)。连续给药9天。从第5天起，每天腹腔注射环磷酰胺水溶液50mg/kg，1次/d，连续5天，造成免疫功能低下模型。第5天，小鼠腹腔注射10%SRBC液，0.1ml/只。第10天，小鼠右足垫注射20%SRBC液，50μl/只；24小时后，按文献法测定小鼠左、右足垫厚度，以左、右足垫厚度之差作为足垫肿胀厚度值[4]。
, 百拇医药
3 实验结果
环磷酰胺造模后，生理盐水组小鼠出现明显的免疫功能低下症状，血清溶菌酶含量、溶血素OD值、足垫肿胀厚度与正常组比较，有非常显著差异(P<0.01，P<0.001)。而小儿清肺止咳露组的血清溶菌酶含量、溶血素OD值、足垫肿胀厚度与生理盐水组比较，有显著或非常显著性差异(P<0.05，P<0.01)，且随剂量加大，差异越明显。说明小儿清肺止咳露具有明显的提高非特异性免疫、体液免疫及细胞免疫功能。结果见表1、表2、表3。
表1 小儿清肺止咳露对小鼠血清溶菌酶含量的影响 组 别
动物数
剂量(g/kg)
溶菌酶含量(μ/ml)
±SD
, 百拇医药
正常组
10
～
2352.3±238.91
生理盐水组
10
等体积
1709.6±206.74△
咳喘灵组
10
8.0
1861.1±207.43
小剂量组
, 百拇医药
10
10.0
1904.9±73.32*
中剂量组
10
20.0
2120.0±151.59**
大剂量组
10
30.0
2202.0±237.27**
与正常组比较，△P<0.05；与生理盐水组比较，P<0.05，**P<0.01
, 百拇医药
表2 小儿清肺止咳露对小鼠溶血素抗体形成的影响 组 别
动物数
剂量(g/kg)
OD值±SD
正常组
10
～
1.04±0.31
生理盐水组
10
等体积
, http://www.100md.com
0.58±0.10△
咳喘灵组
10
8.0
0.61±0.19
小剂量组
10
10.0
0.73±0.32
中剂量组
10
20.0
0.68±0.17
, http://www.100md.com
大剂量组
10
30.0
0.85±0.36*
与正常组比较 △ P<0.001；与生理盐水组比较 P<0.05表3 小儿清肺止咳露对小鼠迟发型超敏反应的影响 组 别
动物数
剂量(g/kg)
足垫肿胀厚度(mm)±SD
正常组
10
, 百拇医药
～
0.418±0.145
生理盐水组
10
等体积
0.107±0.051△
咳喘灵组
10
8.0
0.229±0.107*
小剂量组
10
10.0
, http://www.100md.com
0.283±0.183*
中剂量组
10
20.0
0.329±0.107**
大剂量组
10
30.0
0.361±0.135**
与正常组比较， △P<0.001； 与生理盐水组比较， P<0.01；**P<0.0014 讨论
小儿清肺止咳露主要用于治疗小儿咳嗽、气喘之症。方中药物皆为治小儿咳喘常用药。现代医学认为，小儿咳喘多为抵抗力下降，病原体感染人体所致。免疫力低下是小儿感冒咳嗽频发的原因，本研究从免疫学角度阐明临床常用药物的作用机理。在所选指标中，血清溶菌酶含量与非特异免疫有关，溶血素OD值均有升高作用，并能加强其特异性细胞免疫功能(作用优于咳喘灵)，说明提高抗体免疫力是小儿清肺止咳露取得疗效的机理之一。
, http://www.100md.com
曾亚男，女，1971年生，药师.
参考文献
1 新药(西药)临床前研究指导原则汇编(药学、药理学、毒理学).[S]北京：中华人民共和国卫生部药政局，1993.128～425
2 毕爱华，刘恭植.医学免疫学[M].武汉：同济医科大学，1986.281～282
3 毕爱华，王立人.谷氨酸免疫抑制作用的研究[J].同济医科大学学报，1985，(6)：419
4 Hirofmi Taki,Shin-Zchi Morinaga,et al.Reduction of delayed-type hypersensitivity my the injection of n-3 Polyunsaturated fatty acids in mice[J].Transplantation，1992，54:511～514, http://www.100md.com
单位：曾亚男(武汉市中医医院 430014)；彭连生(武汉市中医医院 430014)；许国振(武汉市中医医院 430014)；任建平(武汉市中医医院 430014)
关键词：小儿清肺止咳露；免疫抑制动物模型；免疫作用
湖北中医学院学报000109
摘要：以腹腔注射环磷酰胺引起的免疫抑制小鼠为模型，用小儿清肺止咳露灌胃，并以小儿咳喘宁为阳性对照药，观察小儿清肺止咳露对小鼠血清溶菌酶含量、溶血素抗体形成，以及迟发型超敏反应—鼠足垫肿胀试验等非特异性、特异性免疫功能的影响。结果：小儿清肺止咳露可不同程度地提高小鼠血清溶菌酶含量、溶血素抗体形成以及迟发型超敏反应。表明小儿清肺止咳露可明显提高免疫功能。
中图分类号：R272 文献标识码：A 文章编号：1008-987X(2000)01-0021-02
, 百拇医药
Experimental Study on Immunopharmacology of Xiaoer Qingfei Zike Distillat
Zeng yanan，Peng Liansheng，Xu Guozhen,et al
Wuhan Hospital of TCM (430051)
Abstract:To study immunization of xiaoer qingfei zike distillat.Methods:The mice immunosuppressant model was made by injecting cychophosphamide.xiaoer qingfei zike distillat was experimental group.xiaoer kechuan ning was positive control group.Results:xiaoer qingfei zike distillat could increase lysozyme content,promote hemolytic antibody forming and improve delayed hypersensitivity in the mice.Conclusion:xiaoer qingfei zike distillat could raise immunologic function remarkably.
, 百拇医药
Key words:xiaoer qingfei zike distillat Immunosuppressant animal model
Immunologic function
小儿清肺止咳露是我院研制的纯中药制剂，由麦冬、苦杏仁、牡荆叶、陈皮、防风等十几味中药组成，具有养阴润肺、理气健脾、止咳祛痰平喘之功效，临床多用于治疗小儿咳嗽、喘息、痰多，疗效较好。笔者对小儿清肺止咳露进行了免疫药理实验研究。现报道如下。
1 实验材料
1.1 动物
NIH种小白鼠，体重18～22g，年龄1～2月，雌雄各半，由武汉生物制品研究所动物室提供。
1.2 药物
, 百拇医药
小儿清肺止咳露，武汉市中医医院制备；小儿咳喘灵冲剂，广州众胜药厂产(批号：950203)；环磷酰胺，上海第十二制药厂产(批号：960210)。
1.3 试剂
溶菌酶，中科院上海生化所东风生化技术公司产(批号：9211316)；琼脂，青岛四方区化学试剂厂分装；黄色微球菌，同济医科大学免疫教研室提供；绵羊红细胞，同济医科大学实验动物中心提供；补体，新鲜豚鼠(4只)，混合血清SRBC(10∶1)，于4°C吸收30分钟后置-20°C以下备用。
1.4 仪器
751—分光光度计，上海医用仪器厂产。
2 实验方法
2.1 非特异性免疫功能及特异性体液免疫功能
, 百拇医药
取小白鼠60只，雌雄各半，随机分为6组。除正常对照外，另五组每组10只造模。造模组分别灌胃给予生理盐水、小儿咳喘灵、小儿清肺止咳露(10g/kg、20g/kg、30g/kg)，连续给药7天。从第5天起，每天腹腔注射环磷酰胺水液50mg/kg，1次/d，连续3天，造成免疫功能低下模型。第5天，小鼠腹腔注射10%SRBC液，0.1ml/只。第8天，断头处死小鼠，取血，分离血清，按文献法测定血清溶菌酶含量[1，2]。按文献法用分光光度计(波长510nm)测定吸收度OD值[3]。
2.2 特异性细胞免疫功能
取小白鼠60只，雌雄各半，随机分为6组。其中，正常对照组10只作空白对照，另五组每组10只造模。造模每组10只分别灌胃给予生理盐水、小儿咳喘灵、小儿清肺止咳露(10g/kg、20g/kg、30g/kg)。连续给药9天。从第5天起，每天腹腔注射环磷酰胺水溶液50mg/kg，1次/d，连续5天，造成免疫功能低下模型。第5天，小鼠腹腔注射10%SRBC液，0.1ml/只。第10天，小鼠右足垫注射20%SRBC液，50μl/只；24小时后，按文献法测定小鼠左、右足垫厚度，以左、右足垫厚度之差作为足垫肿胀厚度值[4]。
, 百拇医药
3 实验结果
环磷酰胺造模后，生理盐水组小鼠出现明显的免疫功能低下症状，血清溶菌酶含量、溶血素OD值、足垫肿胀厚度与正常组比较，有非常显著差异(P<0.01，P<0.001)。而小儿清肺止咳露组的血清溶菌酶含量、溶血素OD值、足垫肿胀厚度与生理盐水组比较，有显著或非常显著性差异(P<0.05，P<0.01)，且随剂量加大，差异越明显。说明小儿清肺止咳露具有明显的提高非特异性免疫、体液免疫及细胞免疫功能。结果见表1、表2、表3。
表1 小儿清肺止咳露对小鼠血清溶菌酶含量的影响 组 别
动物数
剂量(g/kg)
溶菌酶含量(μ/ml)
±SD, 百拇医药
正常组
10
～
2352.3±238.91
生理盐水组
10
等体积
1709.6±206.74△
咳喘灵组
10
8.0
1861.1±207.43
小剂量组
, 百拇医药
10
10.0
1904.9±73.32*
中剂量组
10
20.0
2120.0±151.59**
大剂量组
10
30.0
2202.0±237.27**
与正常组比较，△P<0.05；与生理盐水组比较，P<0.05，**P<0.01
, 百拇医药
表2 小儿清肺止咳露对小鼠溶血素抗体形成的影响 组 别
动物数
剂量(g/kg)
OD值
±SD正常组
10
～
1.04±0.31
生理盐水组
10
等体积
, http://www.100md.com
0.58±0.10△
咳喘灵组
10
8.0
0.61±0.19
小剂量组
10
10.0
0.73±0.32
中剂量组
10
20.0
0.68±0.17
, http://www.100md.com
大剂量组
10
30.0
0.85±0.36*
与正常组比较 △ P<0.001；与生理盐水组比较 P<0.05表3 小儿清肺止咳露对小鼠迟发型超敏反应的影响 组 别
动物数
剂量(g/kg)
足垫肿胀厚度(mm)
±SD正常组
10
, 百拇医药
～
0.418±0.145
生理盐水组
10
等体积
0.107±0.051△
咳喘灵组
10
8.0
0.229±0.107*
小剂量组
10
10.0
, http://www.100md.com
0.283±0.183*
中剂量组
10
20.0
0.329±0.107**
大剂量组
10
30.0
0.361±0.135**
与正常组比较， △P<0.001； 与生理盐水组比较， P<0.01；**P<0.0014 讨论
小儿清肺止咳露主要用于治疗小儿咳嗽、气喘之症。方中药物皆为治小儿咳喘常用药。现代医学认为，小儿咳喘多为抵抗力下降，病原体感染人体所致。免疫力低下是小儿感冒咳嗽频发的原因，本研究从免疫学角度阐明临床常用药物的作用机理。在所选指标中，血清溶菌酶含量与非特异免疫有关，溶血素OD值均有升高作用，并能加强其特异性细胞免疫功能(作用优于咳喘灵)，说明提高抗体免疫力是小儿清肺止咳露取得疗效的机理之一。
, http://www.100md.com
曾亚男，女，1971年生，药师.
参考文献
1 新药(西药)临床前研究指导原则汇编(药学、药理学、毒理学).[S]北京：中华人民共和国卫生部药政局，1993.128～425
2 毕爱华，刘恭植.医学免疫学[M].武汉：同济医科大学，1986.281～282
3 毕爱华，王立人.谷氨酸免疫抑制作用的研究[J].同济医科大学学报，1985，(6)：419
4 Hirofmi Taki,Shin-Zchi Morinaga,et al.Reduction of delayed-type hypersensitivity my the injection of n-3 Polyunsaturated fatty acids in mice[J].Transplantation，1992，54:511～514, http://www.100md.com