加味温胆汤对亚急性衰老大鼠血GSH-Px及肝、脑MAO、LPF的影响
作者：皮明钧 刘 莺 陈 力 杨嗣明 陈北阳 邓常青 张克纯
单位：皮明钧 刘 莺 陈 力 杨嗣明 陈北阳 邓常青 张克纯(湖南中医学院 长沙 410007)
关键词：温胆汤；衰老；D-半乳糖；单胺氧化酶；脂褐素
中国中医基础医学杂志990205 摘 要 目的 探讨加味温胆汤对衰老的作用机理。方法 采用D-半乳糖大鼠亚急性衰老模型，观察加味温胆汤抗衰老的作用。大鼠皮下注射D-半乳糖(48mg/Kg)连续40d可使其脑组织MAO活性升高(P<0.05)，肝脏LPF含量升高(P<0.05)，而其血中GSH-Px活性降低(P<0.01)。在注射D-半乳糖同时灌胃加味温胆汤(φ(生药)=18.5g/kg)，可抑制模型动物肝LPF含量的升高(P<0.05)和脑MAO活性的升高(P<0.01)，提高血中GSH-Px活性(P<0.01)。提示加味温胆汤具有抗衰老的作用，其作用机理可能与其抑制自由基反应，提高抗氧化酶活性及清除老化产物有关。
, 百拇医药
EFFECT OF JIAWEI WENDAN DECOCTION ON BLOOD GSH-PX,LIVER, BRAIN MAO AND LPF IN SUBACUTE RATS
Pi Mingjun, Liu Ying, Chen Li, et al
(Hunan College of TCM, Changsha 410007)
Abstract:ABSTRACT D-galactose was in Jected into subcutaneous part of rats (48mg/kg). Activity of brain MAO and content of liver LPF were incresased (P<0.05), whereas activity of blood GSH-Px was decreased (P<0.01) 40 days later. When Jiawei Wendan decoction was added via mouth (18.5g/kg),increasing of liver LPF and brain MAO were inhibited (P<0.05,P<0.01).Activity of blood GSH-Px was increased (P<0.01). The results suggested that Jiawei Wendan decoction could inhibit sentility. The mechanism was probably related with the inhibitation of free radical reaction, increasing of antioxidase activity and clearing of aged products.
, 百拇医药
Key words: wendan decoction; senility; D-galactose; free radical; MAO; LPF.
人体的衰老是一个渐进而又复杂的过程，一方面随着年龄的增长，体内各脏腑的生理功能逐渐衰退，另一方面，由于脏腑功能的衰退，代谢迟缓或紊乱以致痰饮等病理性产物在体内积聚，而这些产物的积聚，又将进一步影响内脏的生理功能，加速衰老的进程，并导致一系列老年病的发生。采用化痰开窍等治法可清除人体内的代谢产物而延缓衰老过程[1]。自由基为体内在生化反应过程中产生的代谢产物，其性质活泼，具有强烈的氧化作用，而且，自由基引发的交联物——脂褐素等的累积，是导致机体衰老的重要物质。已有研究表明，衰老和抗衰老治疗与其具有密切关系[2]，并由此推测体内痰浊积聚与自由基等具有密切联系。温胆汤为中医学化痰法的名方之一。故本研究由“痰”入手，从自由基角度研究了该方加味对D-半乳糖所致衰老大鼠的影响。
, 百拇医药
材料与方法
1 药物
加味温胆汤由陈皮9g，法夏10g，茯苓15g，枳壳10g，竹茹10g，炙甘草6g，远志8g，石菖蒲10g，郁金10g组成，以上药物由本院药剂科一次性购齐并鉴定。先以7倍量的冷蒸馏水浸泡2h后煎煮40min取滤液，再加5倍量的蒸馏水煎煮30min取滤液，合并两次药液浓缩至生药含量为1g/ml，冰箱冷藏备用。
2 试剂与仪器
D-半乳糖为Sigma公司产品，用时以生理盐水配制。5，5′-二硫对硝基苯甲酸(DTNB)为Fluka产品。苄胺为上海试剂公司进口分装产品。硫酸奎宁为Bochringer公司产品。754分光光度计，960MC荧光分光光度计(上海第三分析仪器厂)。其他试剂均为国产分析纯。
3 动物实验
, 百拇医药
参照谭子虎等所采用的衰老模型方法[3]。SD大鼠，雌雄各半，由本院实验动物中心提供，体重140g～170g，随机分为空白对照组(简称对照组)，D-半乳糖模型组(简称模型组)和加味温胆汤组(简称中药组)。模型组每天灌胃等量蒸馏水，同时每日皮下注射D-半乳糖溶液48mg/kg；中药组每天灌胃加味温胆汤18.5g/kg，并每日皮下注射D-半乳糖；对照组每天灌胃等量蒸馏水和皮下注射等量生理盐水。连续40h，于第41天处死大鼠，取血和肝、脑作测试用。
4 观察指标
4.1 全血谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)活性 按DTNB还原法[4]。
4.2 肝、脑单胺氧化酶(MAO)活性 肝、脑制成匀浆液，经抽提后按紫外分光光度法测定[5]。
4.3 肝、脑脂褐素(LPF)含量 按荧光法改良[6]。
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5 统计分析
多组计量资料采用方差分析和q检验进行两两比较。
结果
1 对全血GSH-Px活性的影响(见表1)
表1 各组全血GSH-Px活性比较 (
±s) 组 别
动物数
GSH-Px(u/8μl全血)
对照组
9
75.9±3.5
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模型组
7
63.4±6.0ΔΔ
中药组
8
73.2±5.3**
注射D-半乳糖所致的模型组全血GSH-Px活性明显低于对照组(P<0.01)，而中药组血GSH-Px活性下降不明显，显著高于模型组(P<0.01)，而与对照组接近(P>0.05)。
注：与对照组比较Δ和ΔΔ：P<0.05和P<0.01；与模型组比较*和**：P<0.05和P<0.01，下表同。
2 对肝、脑MAO活性的影响(见表2)表2 各组肝、脑MAO活性比较 (±s) 组 别
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MAO(μ/g组织湿重)
肝
脑
对照组
69.9±2.5
36.0±13.7
(10)
(9)
模型组
70.4±2.4
47.2± 9.0Δ
(8)
, 百拇医药
(9)
中药组
69.9±3.6
28.6±17.7**
(8)
(8)
注：括号内为鼠数。
三组肝脏MAO活性比较差异无显著性意义(P<0.05)，模型组脑MAO活性明显高于对照组(P>0.05)。模型组脑MAO活性明显高于对照组(P<0.05)，而中药组MAO活性则明显低于模型组(P<0.01)。
3 对肝、脑组织LPF含量的影响 (结果见表3)
, 百拇医药 表3 各组肝、脑LPF含量比较 (±s) 组 别
LPF(μg/g组织湿重)
肝
脑
对照组
311.8± 89.2
115.6±39.6
(8)
(6)
模型组
426.8±103.0Δ
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130.2±32.2
(8)
(9)
中药组
344.0±145.6
131.8±31.6
(7)
(6)
模型组肝脏LPF含量明显高于对照组(P<0.05)，而中药组肝LPF含量降低不明显，与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。模型组和中药组脑组织LPF含量虽较正常组升高，但差异无显著性意义(P>0.05)。
讨论
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近年来中医学抗衰老研究表明，衰老是多因素综合作用的结果，其中五脏虚衰是衰老的基本原因，痰浊、瘀血等积滞是导致衰老的重要因素[7]。故衰老过程的病理变化多是在“虚”的基础上，病理产物积聚所形成的虚实夹杂状态是其基本病理。而且痰浊、瘀血等一旦停留于体内，又可进一步损伤正气，影响脏腑的功能，导致脏器愈衰，痰瘀愈积，加速机体的衰老[8]。因此，抗衰老的研究，还应重视清除体内病理产物的积聚，化痰开窍即是其中方法之一。温胆汤为化痰之名方，故采用温胆汤加味防治机体衰老，具有其理论基础。
自由基在衰老的发生、发展中具有重要的作用。已有研究表明，自由基主要在线粒体内产生[9]。它可与细胞的磷脂和蛋白质等发生脂质过氧化反应，损伤组织细胞，形成脂质过氧化物和脂褐素。机体内存在着清除内源性自由基的酶系统，如SOD、GSH-Px等。体内自由基触发的脂质过氧化物含量随着增龄而递增，而其清除系统酶活性则逐渐降低，故自由基及其清除酶的变化可反映机体的衰老程度[10]。本研究表明，大鼠注射D-半乳糖后肝脏中自由基产物LPF含量升高。其血中清除酶GSH-Px活性降低。说明D-半乳糖可导致机体自由基代谢紊乱，符合衰老的特征，与已有的研究相符[11]。灌胃加味温胆汤后，可使肝脏LPF含量降低，提高血中GSH-Px活性，表明该方具有抗衰老作用，可对抗衰老时自由基引起的脂质过氧化反应，提高抗氧化酶的活性，增加自由基的清除。
, 百拇医药
脑内MAO具有随增龄而活性增高的特点。本文结果表明，模型组MAO活性明显高于对照组，说明模型组呈现衰老表现。加味温胆汤可使动物脑的MAO活性降低，也表明该方对D-半乳糖所致的衰老过程具有抑制作用。
总之，加味温胆汤可对抗D-半乳糖所致的大鼠亚急性衰老过程，降低脑内MAO活性，同时，该方可降低肝内LPF的含量，提高血中抗氧化酶GSH-Px的活性，提示抗自由基的损伤作用可能为该方的作用机理之一。至于该方通过何种途径发挥其抗自由基作用，还有待于进一步研究。
参考文献
[1] 杜怀棠，周丽珍.近十年中医衰老学说研究述评.北京中医药大学学报 1996；18(12)：2
[2] 宋鲁成，孙兆英.自由基与老年病及衰老关系的研究概况.山东医药 1992；32(9)：45
, 百拇医药
[3] 谭子虎，吕维端，朱明方.加减薯蓣丸对D-半乳糖衰老作用的影响.中华老年医学杂志 1995；14(5)：268
[4] 李仪奎主编.中药药理实验方法学.第1版，上海：上海科学出版社，1991：208
[5] 李仪奎主编.中药药理实验方法学.第1版，上海：上海科技出版社，1991：210
[6] 许士凯主编.抗衰老药物学.第1版.北京：中国医药科技出版社，1994：152
[7] 瞿延晖，张六通，梅家俊.析中医学衰老机理——兼论多虚实因素综合致衰老.中国中医基础医学杂志 1996；2(1)：27
[8] 姜惟.肾虚、痰瘀与衰老的关系初探.辽宁中医杂志 1994；2(3)：106
[9] 赵卫华.线粒体氧自由基与衰老的关系.国外医学*神经病学、神经外科学分册 1996；23(2)：130
[10] 薛文隽，吴国忠.活血化瘀中药抗衰老作用的现代药理学研究进展.中医药研究 1998；14(1)：53
[11] 李端，徐翔，李丹，等.水解珍珠粉对D-半乳糖或臭氧所致衰老模型小鼠的抗氧化作用.中药药理与临床 1996；12(5)：32
(收稿日期 1998—05—26 修回日期 1998—10—15), 百拇医药
单位：皮明钧 刘 莺 陈 力 杨嗣明 陈北阳 邓常青 张克纯(湖南中医学院 长沙 410007)
关键词：温胆汤；衰老；D-半乳糖；单胺氧化酶；脂褐素
中国中医基础医学杂志990205 摘 要 目的 探讨加味温胆汤对衰老的作用机理。方法 采用D-半乳糖大鼠亚急性衰老模型，观察加味温胆汤抗衰老的作用。大鼠皮下注射D-半乳糖(48mg/Kg)连续40d可使其脑组织MAO活性升高(P<0.05)，肝脏LPF含量升高(P<0.05)，而其血中GSH-Px活性降低(P<0.01)。在注射D-半乳糖同时灌胃加味温胆汤(φ(生药)=18.5g/kg)，可抑制模型动物肝LPF含量的升高(P<0.05)和脑MAO活性的升高(P<0.01)，提高血中GSH-Px活性(P<0.01)。提示加味温胆汤具有抗衰老的作用，其作用机理可能与其抑制自由基反应，提高抗氧化酶活性及清除老化产物有关。
, 百拇医药
EFFECT OF JIAWEI WENDAN DECOCTION ON BLOOD GSH-PX,LIVER, BRAIN MAO AND LPF IN SUBACUTE RATS
Pi Mingjun, Liu Ying, Chen Li, et al
(Hunan College of TCM, Changsha 410007)
Abstract:ABSTRACT D-galactose was in Jected into subcutaneous part of rats (48mg/kg). Activity of brain MAO and content of liver LPF were incresased (P<0.05), whereas activity of blood GSH-Px was decreased (P<0.01) 40 days later. When Jiawei Wendan decoction was added via mouth (18.5g/kg),increasing of liver LPF and brain MAO were inhibited (P<0.05,P<0.01).Activity of blood GSH-Px was increased (P<0.01). The results suggested that Jiawei Wendan decoction could inhibit sentility. The mechanism was probably related with the inhibitation of free radical reaction, increasing of antioxidase activity and clearing of aged products.
, 百拇医药
Key words: wendan decoction; senility; D-galactose; free radical; MAO; LPF.
人体的衰老是一个渐进而又复杂的过程，一方面随着年龄的增长，体内各脏腑的生理功能逐渐衰退，另一方面，由于脏腑功能的衰退，代谢迟缓或紊乱以致痰饮等病理性产物在体内积聚，而这些产物的积聚，又将进一步影响内脏的生理功能，加速衰老的进程，并导致一系列老年病的发生。采用化痰开窍等治法可清除人体内的代谢产物而延缓衰老过程[1]。自由基为体内在生化反应过程中产生的代谢产物，其性质活泼，具有强烈的氧化作用，而且，自由基引发的交联物——脂褐素等的累积，是导致机体衰老的重要物质。已有研究表明，衰老和抗衰老治疗与其具有密切关系[2]，并由此推测体内痰浊积聚与自由基等具有密切联系。温胆汤为中医学化痰法的名方之一。故本研究由“痰”入手，从自由基角度研究了该方加味对D-半乳糖所致衰老大鼠的影响。
, 百拇医药
材料与方法
1 药物
加味温胆汤由陈皮9g，法夏10g，茯苓15g，枳壳10g，竹茹10g，炙甘草6g，远志8g，石菖蒲10g，郁金10g组成，以上药物由本院药剂科一次性购齐并鉴定。先以7倍量的冷蒸馏水浸泡2h后煎煮40min取滤液，再加5倍量的蒸馏水煎煮30min取滤液，合并两次药液浓缩至生药含量为1g/ml，冰箱冷藏备用。
2 试剂与仪器
D-半乳糖为Sigma公司产品，用时以生理盐水配制。5，5′-二硫对硝基苯甲酸(DTNB)为Fluka产品。苄胺为上海试剂公司进口分装产品。硫酸奎宁为Bochringer公司产品。754分光光度计，960MC荧光分光光度计(上海第三分析仪器厂)。其他试剂均为国产分析纯。
3 动物实验
, 百拇医药
参照谭子虎等所采用的衰老模型方法[3]。SD大鼠，雌雄各半，由本院实验动物中心提供，体重140g～170g，随机分为空白对照组(简称对照组)，D-半乳糖模型组(简称模型组)和加味温胆汤组(简称中药组)。模型组每天灌胃等量蒸馏水，同时每日皮下注射D-半乳糖溶液48mg/kg；中药组每天灌胃加味温胆汤18.5g/kg，并每日皮下注射D-半乳糖；对照组每天灌胃等量蒸馏水和皮下注射等量生理盐水。连续40h，于第41天处死大鼠，取血和肝、脑作测试用。
4 观察指标
4.1 全血谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)活性 按DTNB还原法[4]。
4.2 肝、脑单胺氧化酶(MAO)活性 肝、脑制成匀浆液，经抽提后按紫外分光光度法测定[5]。
4.3 肝、脑脂褐素(LPF)含量 按荧光法改良[6]。
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5 统计分析
多组计量资料采用方差分析和q检验进行两两比较。
结果
1 对全血GSH-Px活性的影响(见表1)
表1 各组全血GSH-Px活性比较 (
±s) 组 别动物数
GSH-Px(u/8μl全血)
对照组
9
75.9±3.5
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模型组
7
63.4±6.0ΔΔ
中药组
8
73.2±5.3**
注射D-半乳糖所致的模型组全血GSH-Px活性明显低于对照组(P<0.01)，而中药组血GSH-Px活性下降不明显，显著高于模型组(P<0.01)，而与对照组接近(P>0.05)。
注：与对照组比较Δ和ΔΔ：P<0.05和P<0.01；与模型组比较*和**：P<0.05和P<0.01，下表同。
2 对肝、脑MAO活性的影响(见表2)表2 各组肝、脑MAO活性比较 (
±s) 组 别, http://www.100md.com
MAO(μ/g组织湿重)
肝
脑
对照组
69.9±2.5
36.0±13.7
(10)
(9)
模型组
70.4±2.4
47.2± 9.0Δ
(8)
, 百拇医药
(9)
中药组
69.9±3.6
28.6±17.7**
(8)
(8)
注：括号内为鼠数。
三组肝脏MAO活性比较差异无显著性意义(P<0.05)，模型组脑MAO活性明显高于对照组(P>0.05)。模型组脑MAO活性明显高于对照组(P<0.05)，而中药组MAO活性则明显低于模型组(P<0.01)。
3 对肝、脑组织LPF含量的影响 (结果见表3)
, 百拇医药 表3 各组肝、脑LPF含量比较 (
±s) 组 别LPF(μg/g组织湿重)
肝
脑
对照组
311.8± 89.2
115.6±39.6
(8)
(6)
模型组
426.8±103.0Δ
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130.2±32.2
(8)
(9)
中药组
344.0±145.6
131.8±31.6
(7)
(6)
模型组肝脏LPF含量明显高于对照组(P<0.05)，而中药组肝LPF含量降低不明显，与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。模型组和中药组脑组织LPF含量虽较正常组升高，但差异无显著性意义(P>0.05)。
讨论
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近年来中医学抗衰老研究表明，衰老是多因素综合作用的结果，其中五脏虚衰是衰老的基本原因，痰浊、瘀血等积滞是导致衰老的重要因素[7]。故衰老过程的病理变化多是在“虚”的基础上，病理产物积聚所形成的虚实夹杂状态是其基本病理。而且痰浊、瘀血等一旦停留于体内，又可进一步损伤正气，影响脏腑的功能，导致脏器愈衰，痰瘀愈积，加速机体的衰老[8]。因此，抗衰老的研究，还应重视清除体内病理产物的积聚，化痰开窍即是其中方法之一。温胆汤为化痰之名方，故采用温胆汤加味防治机体衰老，具有其理论基础。
自由基在衰老的发生、发展中具有重要的作用。已有研究表明，自由基主要在线粒体内产生[9]。它可与细胞的磷脂和蛋白质等发生脂质过氧化反应，损伤组织细胞，形成脂质过氧化物和脂褐素。机体内存在着清除内源性自由基的酶系统，如SOD、GSH-Px等。体内自由基触发的脂质过氧化物含量随着增龄而递增，而其清除系统酶活性则逐渐降低，故自由基及其清除酶的变化可反映机体的衰老程度[10]。本研究表明，大鼠注射D-半乳糖后肝脏中自由基产物LPF含量升高。其血中清除酶GSH-Px活性降低。说明D-半乳糖可导致机体自由基代谢紊乱，符合衰老的特征，与已有的研究相符[11]。灌胃加味温胆汤后，可使肝脏LPF含量降低，提高血中GSH-Px活性，表明该方具有抗衰老作用，可对抗衰老时自由基引起的脂质过氧化反应，提高抗氧化酶的活性，增加自由基的清除。
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脑内MAO具有随增龄而活性增高的特点。本文结果表明，模型组MAO活性明显高于对照组，说明模型组呈现衰老表现。加味温胆汤可使动物脑的MAO活性降低，也表明该方对D-半乳糖所致的衰老过程具有抑制作用。
总之，加味温胆汤可对抗D-半乳糖所致的大鼠亚急性衰老过程，降低脑内MAO活性，同时，该方可降低肝内LPF的含量，提高血中抗氧化酶GSH-Px的活性，提示抗自由基的损伤作用可能为该方的作用机理之一。至于该方通过何种途径发挥其抗自由基作用，还有待于进一步研究。
参考文献
[1] 杜怀棠，周丽珍.近十年中医衰老学说研究述评.北京中医药大学学报 1996；18(12)：2
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[8] 姜惟.肾虚、痰瘀与衰老的关系初探.辽宁中医杂志 1994；2(3)：106
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[10] 薛文隽，吴国忠.活血化瘀中药抗衰老作用的现代药理学研究进展.中医药研究 1998；14(1)：53
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(收稿日期 1998—05—26 修回日期 1998—10—15), 百拇医药