绞股蓝对环磷酰胺诱发小鼠骨髓细胞突变的抑制作用
作者：钱晓薇1 翁振辉2 李绣兰3 朱小春4
单位：1 温州师范学院生物系(325027)； 2 温州市二中(325000)； 3 丽水市遂昌县中学(323300)； 4 温州医学院附属第一医院(325000)
关键词：绞股蓝；环磷酰胺；染色体畸变突变
温州医学院学报990114 摘 要 目的 观察干品绞股蓝对环磷酰胺(Cyclophosphamide，以下简称CP)诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核和染色体畸变的抑制作用。方法 小鼠骨髓细胞微核试验方法和小鼠骨髓细胞染色体畸度试验方法。结果 含10%绞股蓝的饲料使环磷酰胺诱发的微核率从33.17±3.54‰降至12.00±2.19‰(P<0.001)，染色体畸变率从26.33±3.50%降至14.67±2.25%(P<0.01)。结论 绞股蓝可抑制环磷酰胺诱发的DNA损伤，提示绞股蓝具有一定的抗诱变作用。
, 百拇医药
绞股蓝(Gynostemmapenlaphyllum(Thunb)macino)又名七叶胆，系葫芦科多年生草质藤本植物。广布于我国、朝鲜、日本、印度和东南亚地区。近年来有报道从绞股蓝中分离出多种皂甙，并含有人参皂甙中的Rb1、Rb3、Rd等成份[1，2]，被作为人参的代用品很受重视。绞股蓝具有清热解毒、止咳祛痰、抗癌、延缓衰老、抗疲劳、护肤育发、祛脂、减肥的功能，并可治疗多种疾病，如防治心血管疾病、乙型肝炎、肝硬化、白发、贫血等，具有广泛的应用和开发价值。因此本文就绞股蓝对CP诱发小鼠骨髓细胞微核和染色体畸变的影响进行了实验，以探讨其对CP诱发小鼠骨髓细胞突变的影响。
1 材料和方法
1.1 材料 绞股蓝购于温州市农贸市场[经浙江大学丁炳扬教授鉴定为葫芦科绞股蓝属的绞股蓝，学名为Gynostemmapenlaphyllum(Thunb)macino]。环磷酰胺由上海华联制药有限公司生产。秋水仙素由上海卫辉化学试剂厂Serva进口分装。SD小白鼠，体重20～22g，由温州医学院实验动物中心提供。
, 百拇医药
1.2 微核试验方法 实验小白鼠24只，雌雄各半，随机分成4组，每组6只。按不同组别给予不同饲料，让其自由摄食。CP阳性组和阴性对照组投放正常饲料，绞股蓝实验组和绞股蓝对照组投放含10%绞股蓝饲料。CP阳性组和绞股蓝实验组第七天开始给药，给药前小白鼠按体重计算药量，145mg/kg体重[3]。给药方式为腹腔注射。给药两次，第一与第二次给药间隔24h，第二次给药后6h取材。绞股蓝对照组和阴性对照组不作处理。小白鼠脱颈处死，取股骨骨髓，按常规制片[3]，10%Giemsa试剂染色，油镜下观察每小鼠1000个PCE中所含的微核细胞数。计算微核率(MNR)和抑制率(IR)。
1.3 染色体畸变试验方法 实验小白鼠分组、投放饲料及给药剂量和方式均与微核试验方法相同。喂养至第八天处死小鼠，处死前24h给药，处死前2h腹腔注射秋水仙素(4mg/kg体重)[4]。处死后取骨髓细胞，0.075MKCl低渗、固定、制作，5%Giemasa试剂染色[4]。油镜下观察每小鼠100个分裂相，并计算畸变率和抑制率(IR)。
, 百拇医药
2 结果
绞股蓝对CP诱发小鼠骨髓细胞微核率的影响及对染色体畸变率的影响分别见表1和表2。
表1 绞股蓝对CP诱发骨髓细胞微核率的影响 组 别
小鼠数
观察PCE数
1000PCE微核数
微核率‰(
±s)
抑制率(‰)
CP阳性组
6
, 百拇医药
6000
32、34、33、28、33、39
33.17±3.54
绞股蓝实验组
6
6000
10、13、13、15、12、9
12.00±2.19***
63.82
绞股蓝对照组
6
6000
, 百拇医药
0、0、1、2、0、0
0.50±0.84
阴性对照组
6
6000
2、0、1、0、1、1
0.83±0.75***
表2 绞股蓝对CP诱发骨髓细胞染色体畸变的影响
组 别
小鼠数
观察分
裂相
, 百拇医药
畸变细
胞数
畸变率‰
(±s)
抑制率(%)
CP阳性组
6
600
158
26.33±3.50
绞股蓝实验组
6
, http://www.100md.com
600
88
14.67±2.25**
44.28
绞股蓝对照组
6
600
2
0.33±0.52
阴性对照组
6
600
4
, 百拇医药
0.67±0.52***
注：IR=(CP阳性实验组畸变率-绞股蓝实验组畸变率)/CP阳性实验组畸变率；与阳性对照组比较，**P<0.01 ***P<0.001
3 讨论
本实验结果表明，含10%绞股蓝的饲料可明显降低CP诱发的小鼠骨髓PCE的微核率和染色体畸变率。使其微核率从33.17‰±3.54‰降至12.00‰±2.19‰(P<0.001)，畸变率从26.33%±3.50%降至14.67±2.25%(P<0.01)，组间差异非常显著。本实验说明绞股蓝对CP诱发的DNA损伤具有明显的抑制作用。CP阳性组与阴性对照组的微核率、畸变率差异均极为显著(P<0.01)，说明本实验系统是可靠。绞股蓝对照组与阴性对照组的微核率、畸变率差异均不显著(P>0.05)，说明绞股蓝本身无致畸作用。
绞股蓝性寒，无毒，含84种皂甙、18种氨基酸、19种微量元素，如对人体有价值的铁、锌、镁、硒、锰等[5]。绞股蓝中锌的相对含量较高，在生物体内锌参与20多种酶的合成，是金属酶和激酶的组成成份，缺锌会使核酸合成发生障碍，锌可能会促进DNA损伤的修复。有文献报道：硒能抑制过氧化、消除自由基、分解过氧化物和修复分子损伤的作用[6]。绞股蓝的主要成分是总皂甙，绞股蓝总皂甙具抗癌、抗诱变作用[7]。莫自耀等人经实验发现绞股蓝总皂甙可以明显抑制微粒体蛋白，表明绞股蓝总皂甙抗诱变的重要机制之一是通过对有关代谢酶的抑制而降低了诱变剂的代谢活性[9]。CP是1958年合成的烷化剂，为细胞周期非特异性药，但主要阻断G2期细胞，其体内活性代谢产物与核酸发生交联，引起DNA损伤[10]。CP本身无毒，只有在肝脏经肝微粒体混合功能氧化酶作用下才具有烷化活力[10]。绞股蓝总皂甙可能通过抑制肝微粒体混合功能氧化酶的活性，从而引起CP烷化活力和降低，因此抑制DNA的损伤。综上所述，绞股蓝的抗诱变性可能是总皂甙和微量元素共同作用的结果。
, http://www.100md.com
4 参考文献
[1] 竹本常松.ウソ科植物の成分研究(第11报)药学杂志，1984，104(10)∶1043
[2] 久保道德.人参(14).和汉药320号，1980，1∶6
[3] 北京大学生物系遗传学教研室编.遗传学实验方法和技术.北京：高等教育出版社，1985.222～223
[4] 黄幸纾，陈星若主编.环境化学物致突变致畸致癌试验方法.杭州：浙江科学技术出版社，1985.203～206
[5] 刘敏华，刘影.人间仙草——绞股蓝.生物学杂志，1992，(5)∶22～23
[6] 王夔主编.生命科学中的微量元素(下卷).北京：北京清华大学出版社，1988.250
, http://www.100md.com
[7] 杜琰琰，莫自耀.绞股蓝总皂甙致突变和抗诱变作用研究.癌变.畸变.突变，1995，7(3)∶160～163
[8] 王迎进，白元让.绞股蓝总皂甙在沙门菌试验中的抗诱变作用.中国药理学通报，1995，11(1)∶43～45
[9] 莫自耀，杜琰琰，夏清林等.绞股蓝总皂甙抗诱变机制研究.癌变.畸变.突变，1995，7(4)∶223～224
[10] 蒋明，朱立平，林孝义主编.风湿病学.北京：科学出版社.1995.1864～1868
(收稿：1998-08-10，修回：1998-11-02), http://www.100md.com(钱晓薇1 翁振辉2 李绣兰3 朱小春4)
单位：1 温州师范学院生物系(325027)； 2 温州市二中(325000)； 3 丽水市遂昌县中学(323300)； 4 温州医学院附属第一医院(325000)
关键词：绞股蓝；环磷酰胺；染色体畸变突变
温州医学院学报990114 摘 要 目的 观察干品绞股蓝对环磷酰胺(Cyclophosphamide，以下简称CP)诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核和染色体畸变的抑制作用。方法 小鼠骨髓细胞微核试验方法和小鼠骨髓细胞染色体畸度试验方法。结果 含10%绞股蓝的饲料使环磷酰胺诱发的微核率从33.17±3.54‰降至12.00±2.19‰(P<0.001)，染色体畸变率从26.33±3.50%降至14.67±2.25%(P<0.01)。结论 绞股蓝可抑制环磷酰胺诱发的DNA损伤，提示绞股蓝具有一定的抗诱变作用。
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绞股蓝(Gynostemmapenlaphyllum(Thunb)macino)又名七叶胆，系葫芦科多年生草质藤本植物。广布于我国、朝鲜、日本、印度和东南亚地区。近年来有报道从绞股蓝中分离出多种皂甙，并含有人参皂甙中的Rb1、Rb3、Rd等成份[1，2]，被作为人参的代用品很受重视。绞股蓝具有清热解毒、止咳祛痰、抗癌、延缓衰老、抗疲劳、护肤育发、祛脂、减肥的功能，并可治疗多种疾病，如防治心血管疾病、乙型肝炎、肝硬化、白发、贫血等，具有广泛的应用和开发价值。因此本文就绞股蓝对CP诱发小鼠骨髓细胞微核和染色体畸变的影响进行了实验，以探讨其对CP诱发小鼠骨髓细胞突变的影响。
1 材料和方法
1.1 材料 绞股蓝购于温州市农贸市场[经浙江大学丁炳扬教授鉴定为葫芦科绞股蓝属的绞股蓝，学名为Gynostemmapenlaphyllum(Thunb)macino]。环磷酰胺由上海华联制药有限公司生产。秋水仙素由上海卫辉化学试剂厂Serva进口分装。SD小白鼠，体重20～22g，由温州医学院实验动物中心提供。
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1.2 微核试验方法 实验小白鼠24只，雌雄各半，随机分成4组，每组6只。按不同组别给予不同饲料，让其自由摄食。CP阳性组和阴性对照组投放正常饲料，绞股蓝实验组和绞股蓝对照组投放含10%绞股蓝饲料。CP阳性组和绞股蓝实验组第七天开始给药，给药前小白鼠按体重计算药量，145mg/kg体重[3]。给药方式为腹腔注射。给药两次，第一与第二次给药间隔24h，第二次给药后6h取材。绞股蓝对照组和阴性对照组不作处理。小白鼠脱颈处死，取股骨骨髓，按常规制片[3]，10%Giemsa试剂染色，油镜下观察每小鼠1000个PCE中所含的微核细胞数。计算微核率(MNR)和抑制率(IR)。
1.3 染色体畸变试验方法 实验小白鼠分组、投放饲料及给药剂量和方式均与微核试验方法相同。喂养至第八天处死小鼠，处死前24h给药，处死前2h腹腔注射秋水仙素(4mg/kg体重)[4]。处死后取骨髓细胞，0.075MKCl低渗、固定、制作，5%Giemasa试剂染色[4]。油镜下观察每小鼠100个分裂相，并计算畸变率和抑制率(IR)。
, 百拇医药
2 结果
绞股蓝对CP诱发小鼠骨髓细胞微核率的影响及对染色体畸变率的影响分别见表1和表2。
表1 绞股蓝对CP诱发骨髓细胞微核率的影响 组 别
小鼠数
观察PCE数
1000PCE微核数
微核率‰(
±s)抑制率(‰)
CP阳性组
6
, 百拇医药
6000
32、34、33、28、33、39
33.17±3.54
绞股蓝实验组
6
6000
10、13、13、15、12、9
12.00±2.19***
63.82
绞股蓝对照组
6
6000
, 百拇医药
0、0、1、2、0、0
0.50±0.84
阴性对照组
6
6000
2、0、1、0、1、1
0.83±0.75***
表2 绞股蓝对CP诱发骨髓细胞染色体畸变的影响
组 别
小鼠数
观察分
裂相
, 百拇医药
畸变细
胞数
畸变率‰
(
±s)抑制率(%)
CP阳性组
6
600
158
26.33±3.50
绞股蓝实验组
6
, http://www.100md.com
600
88
14.67±2.25**
44.28
绞股蓝对照组
6
600
2
0.33±0.52
阴性对照组
6
600
4
, 百拇医药
0.67±0.52***
注：IR=(CP阳性实验组畸变率-绞股蓝实验组畸变率)/CP阳性实验组畸变率；与阳性对照组比较，**P<0.01 ***P<0.001
3 讨论
本实验结果表明，含10%绞股蓝的饲料可明显降低CP诱发的小鼠骨髓PCE的微核率和染色体畸变率。使其微核率从33.17‰±3.54‰降至12.00‰±2.19‰(P<0.001)，畸变率从26.33%±3.50%降至14.67±2.25%(P<0.01)，组间差异非常显著。本实验说明绞股蓝对CP诱发的DNA损伤具有明显的抑制作用。CP阳性组与阴性对照组的微核率、畸变率差异均极为显著(P<0.01)，说明本实验系统是可靠。绞股蓝对照组与阴性对照组的微核率、畸变率差异均不显著(P>0.05)，说明绞股蓝本身无致畸作用。
绞股蓝性寒，无毒，含84种皂甙、18种氨基酸、19种微量元素，如对人体有价值的铁、锌、镁、硒、锰等[5]。绞股蓝中锌的相对含量较高，在生物体内锌参与20多种酶的合成，是金属酶和激酶的组成成份，缺锌会使核酸合成发生障碍，锌可能会促进DNA损伤的修复。有文献报道：硒能抑制过氧化、消除自由基、分解过氧化物和修复分子损伤的作用[6]。绞股蓝的主要成分是总皂甙，绞股蓝总皂甙具抗癌、抗诱变作用[7]。莫自耀等人经实验发现绞股蓝总皂甙可以明显抑制微粒体蛋白，表明绞股蓝总皂甙抗诱变的重要机制之一是通过对有关代谢酶的抑制而降低了诱变剂的代谢活性[9]。CP是1958年合成的烷化剂，为细胞周期非特异性药，但主要阻断G2期细胞，其体内活性代谢产物与核酸发生交联，引起DNA损伤[10]。CP本身无毒，只有在肝脏经肝微粒体混合功能氧化酶作用下才具有烷化活力[10]。绞股蓝总皂甙可能通过抑制肝微粒体混合功能氧化酶的活性，从而引起CP烷化活力和降低，因此抑制DNA的损伤。综上所述，绞股蓝的抗诱变性可能是总皂甙和微量元素共同作用的结果。
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4 参考文献
[1] 竹本常松.ウソ科植物の成分研究(第11报)药学杂志，1984，104(10)∶1043
[2] 久保道德.人参(14).和汉药320号，1980，1∶6
[3] 北京大学生物系遗传学教研室编.遗传学实验方法和技术.北京：高等教育出版社，1985.222～223
[4] 黄幸纾，陈星若主编.环境化学物致突变致畸致癌试验方法.杭州：浙江科学技术出版社，1985.203～206
[5] 刘敏华，刘影.人间仙草——绞股蓝.生物学杂志，1992，(5)∶22～23
[6] 王夔主编.生命科学中的微量元素(下卷).北京：北京清华大学出版社，1988.250
, http://www.100md.com
[7] 杜琰琰，莫自耀.绞股蓝总皂甙致突变和抗诱变作用研究.癌变.畸变.突变，1995，7(3)∶160～163
[8] 王迎进，白元让.绞股蓝总皂甙在沙门菌试验中的抗诱变作用.中国药理学通报，1995，11(1)∶43～45
[9] 莫自耀，杜琰琰，夏清林等.绞股蓝总皂甙抗诱变机制研究.癌变.畸变.突变，1995，7(4)∶223～224
[10] 蒋明，朱立平，林孝义主编.风湿病学.北京：科学出版社.1995.1864～1868
(收稿：1998-08-10，修回：1998-11-02), http://www.100md.com(钱晓薇1 翁振辉2 李绣兰3 朱小春4)