慢性缺氧高二氧化碳大鼠支气管中结构型一氧化氮合酶的分布
作者：张洪勤 王良兴 吴淑珍
单位：(温州医学院分子生物学研究中心，温州，325027)
关键词：支气管；上皮细胞；平滑肌细胞；结构型一氧化氮合酶；原位杂交；高碳酸血症
温州医学院学报000108 摘 要：目的：研究结构型一氧化氮合酶(cNOS) 在慢性缺氧高二氧化碳的大鼠支气管中的表达及分布。方法：用原位杂交技术，对慢性缺氧高二氧化碳的大鼠支气管中cNOS的表达进行定位研究。结果：慢性缺氧高二氧化碳大鼠的各级支气管平滑肌细胞呈cNOS阳性染色反应，上皮细胞呈cNOS弱阳性染色反应。结论：慢性缺氧高二氧化碳时，cNOS在支气管上皮细胞中的表达被抑制。
分类号：R562.2 文献标识码：A
文章编号：1000-2138( 2000)01-00
, 百拇医药
Expression of constructive nitric oxide synthase in the bronchus of rat with chronic hypoxia and hypercapnia
ZHANG Hong-qin WU Shu-zhen
(Molecular Biology Research Center, Wenzhou Medical College, Wenzhou 325027)
WANG Liang-xing
Abstract：Objective：To study constructive nitric oxide synthase (cNOS) expression and localization in bronchus of rat with chronic hypoxia and hypercapnia. Methods： By in situ hybridization,the cNOS expression was observed in bronchus of rat with chronic hypoxia and hypercapnia. Results： In bronchus of rat with chronic hypoxia and hypercapnia,positive staining of cNOS was evident in the smooth muscle cell.Positive staining also presented in the epithelia, but it was absent in the smooth muscle cell. Conclusion： Expression of cNOS was inhibited im the epithelia of rat bronchus with chronic hypoxia and hypercapnia.
, 百拇医药
Key words：bronchus;epithlia;smooth muscle cell;constructive nitric oxide synthase; in situ hybridization▲
一氧化氮(NO)作为内皮衍生舒张因子，具有调节血管、舒张支气管、调节神经介质等众多生理、病理生理过程的功能[1]。近来，有大量证据表明NO在肺部疾病中具有重要作用。我们通过原位杂交技术，观察一氧化氮合酶(cNOS)在慢性缺氧高二氧化碳大鼠支气管中的表达与分布，探讨慢性缺氧高二氧化碳和cNOS之间的关系。
1 材料和方法
1.1 主要试剂 cNOS原位杂交试剂盒购自北京医科大学。
1.2 标本制备 雄性Sprague-Dawley大鼠(温州医学院实验动物中心提供)20只，体重180～280g，适应性饲养一周后，随机分为2组：第一组为正常对照组(A组，n=10)，作为常压氧下的对照；第二组为低O2 高CO2 四周组(B组，n=10)，置于常压低O2 高CO2 舱中(O2浓度 为 8.5%～11%， CO2 浓度为5.0%～6.5%)，每日10小时，其余时间与正常对照组在同一室内(室温15～20℃，相对湿度50%～70%)，饲养到规定时间后用20%乌拉坦麻醉，打开胸腔，取出肺组织马上置于10%的中性福尔马林溶液中固定24小时以上，脱水，石蜡包埋。切片厚度为5μm，覆于10% L-多聚赖氨酸处理过的载玻片上，65℃烘烤1小时。
, 百拇医药
1.3 原位杂交 按照cNOS原位杂交试剂盒中所提供的步骤进行操作。
2 结果
cNOS在A、B两组大鼠的各级支气管平滑肌细胞中均呈阳性表达，但在B组上皮细胞中呈弱阳性表达，甚至有的就没有cNOS表达。 (见图1、2)
图1 cNOS在缺氧高二氧化碳大鼠细支气管的分布(×160)
图2 cNOS在缺氧高二氧化碳大鼠终末细支气管的分布(×160)
3 讨论
NO作为非肾上腺能非胆碱能神经(NANC)的递质，有调节支气管舒张作用，与气道高反应性有关[2]。NOS是体内合成NO的唯一因子，可通过测定其含量和分布来反映体内NO的产量及合成场所。在临床上，缺氧是多种疾病特别呼吸系统疾病常见的病理生理过程，它是引起肺动脉高压的主要原因，其发病机理和一氧化氮合成减少及内皮素合成增加等因素有关。
, 百拇医药
本研究发现，在慢性缺氧高二氧化碳大鼠的各级支气管中，上皮细胞呈cNOS弱阳性染色，有的甚至为阴性。这提示慢性缺氧高二氧化碳抑制了cNOS在支气管上皮的表达，使内源性NO的合成和释放减少，从而促进支气管收缩。但A、B两组大鼠的各级支气管平滑肌细胞均呈cNOS阳性反应，提示慢性缺氧高二氧化碳环境主要作用于支气管上皮细胞，对平滑肌细胞cNOS的表达影响不大。这与李国红等[3]的结果不完全一致，但我们认为支气管NO的合成主要由支气管上皮细胞来调节。■
作者简介：张洪勤(1976-)，男，浙江丽水人，温州医学院分子生物学研究中心研究实习员，主要从事分子生物学方面研究。
参考文献：
[1] Gaston B,Drazen JM, Loscalzo J, et al. The biology of nitrogen oxides in the airways [J]. J Respir Crit Care Med,1994,149：538-551.
[2] 袁雅冬.一氧化氮与肺部疾病[J].国外医学呼吸系统分册，19-98，18(1)：48-50.
[3] 李国红，梁延杰，陆江阳等.缺氧性肺动脉高压时一氧化氮合酶、左旋精氨酸及亚硝基左旋精氨酸甲酯的研究 [J].中华病理学杂志，1998，27(5)：337-340.
收稿日期：1999-07-06
改稿日期：1999-10-15, 百拇医药
单位：(温州医学院分子生物学研究中心，温州，325027)
关键词：支气管；上皮细胞；平滑肌细胞；结构型一氧化氮合酶；原位杂交；高碳酸血症
温州医学院学报000108 摘 要：目的：研究结构型一氧化氮合酶(cNOS) 在慢性缺氧高二氧化碳的大鼠支气管中的表达及分布。方法：用原位杂交技术，对慢性缺氧高二氧化碳的大鼠支气管中cNOS的表达进行定位研究。结果：慢性缺氧高二氧化碳大鼠的各级支气管平滑肌细胞呈cNOS阳性染色反应，上皮细胞呈cNOS弱阳性染色反应。结论：慢性缺氧高二氧化碳时，cNOS在支气管上皮细胞中的表达被抑制。
分类号：R562.2 文献标识码：A
文章编号：1000-2138( 2000)01-00
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Expression of constructive nitric oxide synthase in the bronchus of rat with chronic hypoxia and hypercapnia
ZHANG Hong-qin WU Shu-zhen
(Molecular Biology Research Center, Wenzhou Medical College, Wenzhou 325027)
WANG Liang-xing
Abstract：Objective：To study constructive nitric oxide synthase (cNOS) expression and localization in bronchus of rat with chronic hypoxia and hypercapnia. Methods： By in situ hybridization,the cNOS expression was observed in bronchus of rat with chronic hypoxia and hypercapnia. Results： In bronchus of rat with chronic hypoxia and hypercapnia,positive staining of cNOS was evident in the smooth muscle cell.Positive staining also presented in the epithelia, but it was absent in the smooth muscle cell. Conclusion： Expression of cNOS was inhibited im the epithelia of rat bronchus with chronic hypoxia and hypercapnia.
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Key words：bronchus;epithlia;smooth muscle cell;constructive nitric oxide synthase; in situ hybridization▲
一氧化氮(NO)作为内皮衍生舒张因子，具有调节血管、舒张支气管、调节神经介质等众多生理、病理生理过程的功能[1]。近来，有大量证据表明NO在肺部疾病中具有重要作用。我们通过原位杂交技术，观察一氧化氮合酶(cNOS)在慢性缺氧高二氧化碳大鼠支气管中的表达与分布，探讨慢性缺氧高二氧化碳和cNOS之间的关系。
1 材料和方法
1.1 主要试剂 cNOS原位杂交试剂盒购自北京医科大学。
1.2 标本制备 雄性Sprague-Dawley大鼠(温州医学院实验动物中心提供)20只，体重180～280g，适应性饲养一周后，随机分为2组：第一组为正常对照组(A组，n=10)，作为常压氧下的对照；第二组为低O2 高CO2 四周组(B组，n=10)，置于常压低O2 高CO2 舱中(O2浓度 为 8.5%～11%， CO2 浓度为5.0%～6.5%)，每日10小时，其余时间与正常对照组在同一室内(室温15～20℃，相对湿度50%～70%)，饲养到规定时间后用20%乌拉坦麻醉，打开胸腔，取出肺组织马上置于10%的中性福尔马林溶液中固定24小时以上，脱水，石蜡包埋。切片厚度为5μm，覆于10% L-多聚赖氨酸处理过的载玻片上，65℃烘烤1小时。
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1.3 原位杂交 按照cNOS原位杂交试剂盒中所提供的步骤进行操作。
2 结果
cNOS在A、B两组大鼠的各级支气管平滑肌细胞中均呈阳性表达，但在B组上皮细胞中呈弱阳性表达，甚至有的就没有cNOS表达。 (见图1、2)
图1 cNOS在缺氧高二氧化碳大鼠细支气管的分布(×160)
图2 cNOS在缺氧高二氧化碳大鼠终末细支气管的分布(×160)
3 讨论
NO作为非肾上腺能非胆碱能神经(NANC)的递质，有调节支气管舒张作用，与气道高反应性有关[2]。NOS是体内合成NO的唯一因子，可通过测定其含量和分布来反映体内NO的产量及合成场所。在临床上，缺氧是多种疾病特别呼吸系统疾病常见的病理生理过程，它是引起肺动脉高压的主要原因，其发病机理和一氧化氮合成减少及内皮素合成增加等因素有关。
, 百拇医药
本研究发现，在慢性缺氧高二氧化碳大鼠的各级支气管中，上皮细胞呈cNOS弱阳性染色，有的甚至为阴性。这提示慢性缺氧高二氧化碳抑制了cNOS在支气管上皮的表达，使内源性NO的合成和释放减少，从而促进支气管收缩。但A、B两组大鼠的各级支气管平滑肌细胞均呈cNOS阳性反应，提示慢性缺氧高二氧化碳环境主要作用于支气管上皮细胞，对平滑肌细胞cNOS的表达影响不大。这与李国红等[3]的结果不完全一致，但我们认为支气管NO的合成主要由支气管上皮细胞来调节。■
作者简介：张洪勤(1976-)，男，浙江丽水人，温州医学院分子生物学研究中心研究实习员，主要从事分子生物学方面研究。
参考文献：
[1] Gaston B,Drazen JM, Loscalzo J, et al. The biology of nitrogen oxides in the airways [J]. J Respir Crit Care Med,1994,149：538-551.
[2] 袁雅冬.一氧化氮与肺部疾病[J].国外医学呼吸系统分册，19-98，18(1)：48-50.
[3] 李国红，梁延杰，陆江阳等.缺氧性肺动脉高压时一氧化氮合酶、左旋精氨酸及亚硝基左旋精氨酸甲酯的研究 [J].中华病理学杂志，1998，27(5)：337-340.
收稿日期：1999-07-06
改稿日期：1999-10-15, 百拇医药