临床分离的大肠杆菌敏感株和多重耐药株的主动外排系统
作者：张小林 汪 复 朱德妹
单位：张小林 北京医科大学第一医院临床药理研究所，北京 100083；汪 复 朱德妹:上海医科大学华山医院
关键词：大肠杆菌；药物作用；四环素；代谢；青霉素；代谢；药物耐受
北京医科大学学报990120 摘要 目的：研究临床分离的大肠杆菌多重耐药株和敏感株中抗菌药物的主动外排系统。方法：用抽虑法测定大肠杆菌多重耐药株、敏感株以及标准质控菌对四环素和青霉素的积聚。结果：大肠杆菌敏感株和多重耐药株中四环素以及青霉素的稳定药物质量摩尔浓度呈能量依赖性降低，加入能量抑制剂，细胞内药物质量摩尔浓度上升，但敏感株变化轻微，而标准质控菌ATCC25922细胞内四环素和青霉素的质量摩尔浓度在加入能量抑制剂后显著下降。结论：临床分离的敏感株中亦存在能泵出四环素和青霉素的主动外排系统,但其外排功能显著低于多重耐药株。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R378.21
Active efflux of antibiotic in susceptible and mutiple-antibiotic-resistant Escherichia coli
ZHANG Xiao-Lin＃, WANG Fu, ZHU De-Mei
(＃Institute of Clinical Pharmacology, the First Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100083)
MeSH Escherichia coli/drug eff Tetracyclines/metab Penicillin G/metab Drug tolerance
, 百拇医药
ABSTRACT Objective: To investigate active efflux of drugs in clinical isolated strains of Escherichia coli. Methods: The accumulation of tetracycline and penicillin in multiple-antibiotic-resistance (Mar) and susceptible strains of Escherichia coli and ATCC25922 was determined using filitration method. Results: The steady concentration of tetracycline and penicillin in Mar and susceptible strains of Escherichia coli was decreased with supply of energy, with supply of inhibitor of energy; the steady concentration was remarkably increased, but the change in susceptible strain was less than in Mar strain. However, the concentration of tetracycline and penicillin in ATCC25922 was significantly decreased with supply of inhibitor of energy. Conclusion: There was active efflux of tetracycline and penicillin in clinical isolated strains of Escherichia coli, but the capability was less than in Mar strains.
, http://www.100md.com
(J Beijing Med Univ, 1999,31:67-70)
近年来对细菌耐药机制的研究发现,在大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌等耐药菌株中存在主动外排系统,主动外排系统的存在是这些细菌产生耐药性的重要原因[1～4]。主动外排系统由于能主动将抗菌药物从细胞内泵出细胞外而使细菌获得耐药性。然而,我们的研究表明,在临床分离的大肠杆菌敏感株中亦可能存在主动外排系统。
1 材料与方法
1.1 试剂
3H-四环素，2.849×1010 Bq*mmol-1，DuPont公司产品。 3H-青霉素(penicillin, Pen)，7.77×1011 Bq*mmol-1，Amshan公司产品。Luria-Bertani (LB)肉汤培养基，每升含NaCl 10 g、胰蛋白胨5 g、酵母抽提物10 g。
, http://www.100md.com
1.2 抗生素
氯霉素(chloramphenicol, Chl)、四环素(tetracyclin, Tet)、哌拉西林(piperacillin, Pip)、庆大霉素(gentamicin, Gen)、诺氯沙星(norfloxacin, Nor)、环丙沙星(ciprofloxacin, Cip)均为卫生部药品生物制品检验所标准品。
1.3 菌株
对上海医科大学华山医院1994～1995年度临床分离的大肠杆菌进行筛选。以对氯霉素、四环素、哌拉西林、庆大霉素、氟喹诺酮均耐药的菌株为多重耐药株,均敏感的菌株为敏感野生株。ATCC25922为药敏质控菌。LM313.1为野生株AG100经氯霉素诱导的耐药株,含多重耐药(multiple-antibiotic-resistance, Mar)操纵子。LM313.5是LM313.1经噬菌体将Tn5插入MarA并使之失活的突变株。该两株细菌由美国Tufts大学的Levy博士赠送。
, http://www.100md.com
1.4 最低抑菌浓度(minium inhibation concentra-
tion, MIC)测定
以琼脂对倍稀释法测定抗菌药物对大肠杆菌的MIC。
1.5 大肠杆菌对四环素和青霉素的积聚实验
大肠杆菌对四环素的积聚实验按文献[4]的方法并加改进。大肠杆菌对青霉素的积聚实验按文献[5]的方法并加以改进。大肠杆菌细胞内药物的稳态质量摩尔浓度以nmol*g-1表示。
2 结果
2.1 大肠杆菌对6种抗菌药物的敏感性(表1)
表1 选择大肠杆菌对抗菌药物的敏感性(MIC)
, 百拇医药
Table 1 The Susceptibility of Escherichia coli to 6 Antibiotics(MIC) Strain of
E.coli
ρ/mg.L-1
Pip
Gen
Tet
Chl
Nor
Cip
R12
≥256
, 百拇医药
≥16
≥32
≥64
≥32
≥8
R28
≥256
≥16
≥32
≥64
≥32
≥8
S36
, http://www.100md.com
≤4
≤0.5
≤1
≤2
≤1
≤0.25
LM313.1
4
0.25
4
≥64
0.5
0.125
, http://www.100md.com
LM313.5
0.06
0.25
0.25
8
0.03
0.016
ATCC25922
1
1
0.5
2
0.5
, 百拇医药
0.008
从临床分离的菌株中筛选出多重耐药株R12、R28,敏感株S36。
2.2 临床分离的大肠杆菌对四环素的积聚(图1)
CCCP was added at a final concentration of 0.25 mmol.L-1 at
the time indicated by the arrow.
图1 临床分离大肠杆菌对四环素的积聚
Figure 1 The accumulation of tetracycline in clinical
, http://www.100md.com
isolates of Escherichia coli
在加入3H-四环素后1 min R28、R12、S36细胞内药物质量摩尔浓度均接近稳态。R28细胞内药物的稳态质量摩尔浓度大约为S36的40%,R12约为S36的50%。加入氰氯苯腙(carbonyl cyanide m-chlorphenyl-hydrazone, CCCP)后,R28、R12细胞内四环素稳态质量摩尔浓度上升了大约1.5倍,S36略有上升。
2.3 临床分离大肠杆菌对青霉素的积聚(图2)
CCCP was added at a final concentration of 0.25 mmol.L-1 at the time indicated by the arrow and glucose was added at a final concentration of 0.2% at the time indicated by the black arrow.
, 百拇医药
图2 临床分离大肠杆菌对青霉素的积聚
Figure 2 The accumulation of penicillin in clinical
isolates of Escherichia coli
当悬浮液中不含葡萄糖时,S36、R12细胞内稳态青霉素质量摩尔浓度相似。加入葡萄糖后,两者细胞内青霉素质量摩尔浓度均下降,尤以R12为甚。而当加入CCCP后,细胞内青霉素质量摩尔浓度均上升,R12上升幅度大于S36。R28中加入CCCP后,细胞内青霉素质量摩尔浓度上升了3倍。
2.4 大肠杆菌LM313.1与LM313.5对四环素的积聚(图3)
CCCP was added at a final concentration of 0.25 mmol.L-1 at the time indicated by the arrow.
, 百拇医药
图3 大肠杆菌LM313.1和LM313.5对四环素的积聚
Figure 3 The accumulation of tetracycline in Escherichia coli
LM313.1 and LM313.5
LM313.1中Tet质量摩尔浓度约为LM313.5的60%,加入CCCP后,LM313.1中稳态四环素质量摩尔浓度上升了近60%,LM313.5仅轻度增加。
2.5 大肠杆菌ATCC25922对四环素和青霉素的积聚(图4)
CCCP was added at a final concentration of 0.25 mmol*L-1 at the time indicated by the arrow.
, 百拇医药
图4 大肠杆菌ATCC25922对青霉素和四环素的积聚
Figure 4 The accumulation of penicillin and
tetracycline in ATCC25922
大肠杆菌ATCC25922对四环素和青霉素的积聚在加入药物15 min后尚未达到稳态浓度。当加入CCCP后,ATCC25922细胞内四环素、青霉素质量摩尔浓度均显著下降,四环素下降到高峰质量摩尔浓度的30%,青霉素下降到高峰质量摩尔浓度的20%。
3 讨论
近年来发现的存在于许多细菌耐药株细胞内膜的药物主动外排系统在细菌耐药过程中起着重要作用[1～3]。主动外排系统是一种需能的主动运输系统，因此，存在主动外排系统的细菌的细胞内抗菌药物质量摩尔浓度呈能量依赖性降低。本实验中大肠杆菌多重耐药株R12和R28细胞内四环素和青霉素质量摩尔浓度变化和能量的关系以及对能量抑制剂CCCP的反应表明在临床分离的大肠杆菌多重耐药株中存在对四环素和青霉素的主动外排系统。
, 百拇医药
但大肠杆菌NCCLS标准质控菌ATCC25922细胞内四环素和青霉素的积聚对CCCP的反应和多重耐药株明显不同。当加入CCCP后，ATCC25922中四环素和青霉素质量摩尔浓度显著下降，表明ATCC25922中不存在主动外排系统。因为药物从细菌细胞外扩散进细胞内的过程是一种被动扩散过程,需跨膜的pH梯度提供动力[2],CCCP能够破坏细菌的跨膜的pH梯度使得抗菌药物向细胞内扩散失去动力,而且,正是由于这种pH梯度的存在产生的电离平衡以及抗菌药物与作用靶位的结合使得细菌细胞内抗菌药物质量摩尔浓度高于细胞外[4，7，8],因此pH梯度被破坏的结果使得抗菌药物向细菌细胞内扩散失去驱动力,而又由于产生了新的电离平衡，使得细菌细胞内抗菌药物质量摩尔浓度在加入CCCP后迅速下降[2]。因此,细菌是否具有主动外排系统,其细胞内抗菌药物质量摩尔浓度对能量状态的反应明显不同。大肠杆菌NCCLS标准质控菌ATCC25922对四环素和青霉素的积聚以及对CCCP的反应表明ATCC25922中可能没有主动外排系统，四环素和青霉素跨膜的转运过程只是被动扩散过程。但是ATCC25922中四环素和青霉素在15 min后尚未达到稳态质量摩尔浓度，其原因尚不清楚。
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然而,虽然临床分离株S36与ATCC25922同属于敏感株,但两者对四环素、青霉素的积聚以及对CCCP的反应却明显不同,S36与多重耐药株相似,虽然较多重耐药株的反应轻微得多。该结果表明临床分离的敏感株中亦存在主动外排系统，但其主动外排功能较低，不能引起明显的耐药。文献[6]报道主动外排系统的表达受Mar操纵子调控，本实验中也发现LM313.1与LM313.5对四环素主动外排程度的不同亦支持上述观点。敏感株中不存在或仅有失活的Mar操纵子，因此，其主动外排功能较低。另外主动外排系统能否使细菌产生耐药性与细菌外膜通透性亦有密切的关系。在耐药株中一般存在外膜通透性降低[2],抗菌药物向细菌细胞内扩速度降低,主动外排系统来得及将扩散进细胞内的药物泵出细胞外，从而产生明显的耐药性。但是,敏感株的外膜通透性均较高,药物向细胞内扩散速度较快,主动外排系统来不及将扩散进细胞内的药物出细胞外,因此不能降低细胞内的抗菌药物浓度,不能产生耐药性。
虽然敏感株中的主动外排系统并不能使其产生明显的耐药性，但敏感株中主动外排系统的存在可能与细菌泵出从环境中渗入的有害物质以适应环境有关[6]，同时，亦可能在敏感向耐药突变时起重要作用。
, 百拇医药
参考文献
1 Okusu H, Ma D, Nikaido H. AcrAB efflux pump plays a major role in the antibiotic resistance phenotype of Escherichia coli multiple-antibiotic-resistance (Mar) mutants. J Bacteriol， 1996,178:306-308
2 Li XZ, Livermore MD, Nikaido H. Role of efflux pump(s) in intrinsic resistance of Pseudomonas aeruginosa: resistance to tetracycline, chloramphenicol, and norfloxacin. Antimicrob Agents Chemother， 1994,38:1732-1741
, 百拇医药
3 Wondrack L, Massa M, Yang BV, et al. Clinical strains of Staphlococcus aureus inactivates and causes efflux of macrolides. Antimicrob Agents Chemother， 1996,40:992-998
4 McMurry LM, George AM, Levy SB. Active efflux of chlorphenicol in susceptible Escherichia coli strains and multiple-antibiotic-resistance(Mar) mutants. Antimicrob Agents Chemother， 1994,38:542-546
5 Li ZX, MA D, Livermore DM, et al. Role of efflux pump(s) in intrinsic resistance of Pseudomonas aeruginosa: active efflux as a contributing factor to β-lactam resistance. Antimicrob Agents Chemother， 1994,38:1742-1752
, 百拇医药
6 Ma D, Cook DN, Alberti M, et al. Genes acrA and acrB encode a stress-induced efflux system of Escherichia coli. Mol Microbiol， 1995,16:45-55
7 Neidhardt FC. Chemical composition of Escherichia coli. In： Neidhardt FC, et al. (ed). Escherichia coli and Salmonella typhimrium: cellular and molecular biology. Washington DC：American Society for Micrology, 1987.3-6
8 Thanassi DG, Suh GSB, and Nikaido H. Role of outer membrane barrier in efflux-mediated tetracycline resistance of Escherichia coli. J Bacteriol， 1995,177:998-1007
(1998-03-30收稿), http://www.100md.com
单位：张小林 北京医科大学第一医院临床药理研究所，北京 100083；汪 复 朱德妹:上海医科大学华山医院
关键词：大肠杆菌；药物作用；四环素；代谢；青霉素；代谢；药物耐受
北京医科大学学报990120 摘要 目的：研究临床分离的大肠杆菌多重耐药株和敏感株中抗菌药物的主动外排系统。方法：用抽虑法测定大肠杆菌多重耐药株、敏感株以及标准质控菌对四环素和青霉素的积聚。结果：大肠杆菌敏感株和多重耐药株中四环素以及青霉素的稳定药物质量摩尔浓度呈能量依赖性降低，加入能量抑制剂，细胞内药物质量摩尔浓度上升，但敏感株变化轻微，而标准质控菌ATCC25922细胞内四环素和青霉素的质量摩尔浓度在加入能量抑制剂后显著下降。结论：临床分离的敏感株中亦存在能泵出四环素和青霉素的主动外排系统,但其外排功能显著低于多重耐药株。
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中国图书资料分类法分类号 R378.21
Active efflux of antibiotic in susceptible and mutiple-antibiotic-resistant Escherichia coli
ZHANG Xiao-Lin＃, WANG Fu, ZHU De-Mei
(＃Institute of Clinical Pharmacology, the First Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100083)
MeSH Escherichia coli/drug eff Tetracyclines/metab Penicillin G/metab Drug tolerance
, 百拇医药
ABSTRACT Objective: To investigate active efflux of drugs in clinical isolated strains of Escherichia coli. Methods: The accumulation of tetracycline and penicillin in multiple-antibiotic-resistance (Mar) and susceptible strains of Escherichia coli and ATCC25922 was determined using filitration method. Results: The steady concentration of tetracycline and penicillin in Mar and susceptible strains of Escherichia coli was decreased with supply of energy, with supply of inhibitor of energy; the steady concentration was remarkably increased, but the change in susceptible strain was less than in Mar strain. However, the concentration of tetracycline and penicillin in ATCC25922 was significantly decreased with supply of inhibitor of energy. Conclusion: There was active efflux of tetracycline and penicillin in clinical isolated strains of Escherichia coli, but the capability was less than in Mar strains.
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(J Beijing Med Univ, 1999,31:67-70)
近年来对细菌耐药机制的研究发现,在大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌等耐药菌株中存在主动外排系统,主动外排系统的存在是这些细菌产生耐药性的重要原因[1～4]。主动外排系统由于能主动将抗菌药物从细胞内泵出细胞外而使细菌获得耐药性。然而,我们的研究表明,在临床分离的大肠杆菌敏感株中亦可能存在主动外排系统。
1 材料与方法
1.1 试剂
3H-四环素，2.849×1010 Bq*mmol-1，DuPont公司产品。 3H-青霉素(penicillin, Pen)，7.77×1011 Bq*mmol-1，Amshan公司产品。Luria-Bertani (LB)肉汤培养基，每升含NaCl 10 g、胰蛋白胨5 g、酵母抽提物10 g。
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1.2 抗生素
氯霉素(chloramphenicol, Chl)、四环素(tetracyclin, Tet)、哌拉西林(piperacillin, Pip)、庆大霉素(gentamicin, Gen)、诺氯沙星(norfloxacin, Nor)、环丙沙星(ciprofloxacin, Cip)均为卫生部药品生物制品检验所标准品。
1.3 菌株
对上海医科大学华山医院1994～1995年度临床分离的大肠杆菌进行筛选。以对氯霉素、四环素、哌拉西林、庆大霉素、氟喹诺酮均耐药的菌株为多重耐药株,均敏感的菌株为敏感野生株。ATCC25922为药敏质控菌。LM313.1为野生株AG100经氯霉素诱导的耐药株,含多重耐药(multiple-antibiotic-resistance, Mar)操纵子。LM313.5是LM313.1经噬菌体将Tn5插入MarA并使之失活的突变株。该两株细菌由美国Tufts大学的Levy博士赠送。
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1.4 最低抑菌浓度(minium inhibation concentra-
tion, MIC)测定
以琼脂对倍稀释法测定抗菌药物对大肠杆菌的MIC。
1.5 大肠杆菌对四环素和青霉素的积聚实验
大肠杆菌对四环素的积聚实验按文献[4]的方法并加改进。大肠杆菌对青霉素的积聚实验按文献[5]的方法并加以改进。大肠杆菌细胞内药物的稳态质量摩尔浓度以nmol*g-1表示。
2 结果
2.1 大肠杆菌对6种抗菌药物的敏感性(表1)
表1 选择大肠杆菌对抗菌药物的敏感性(MIC)
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Table 1 The Susceptibility of Escherichia coli to 6 Antibiotics(MIC) Strain of
E.coli
ρ/mg.L-1
Pip
Gen
Tet
Chl
Nor
Cip
R12
≥256
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≥16
≥32
≥64
≥32
≥8
R28
≥256
≥16
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≥64
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S36
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≤4
≤0.5
≤1
≤2
≤1
≤0.25
LM313.1
4
0.25
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≥64
0.5
0.125
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LM313.5
0.06
0.25
0.25
8
0.03
0.016
ATCC25922
1
1
0.5
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0.5
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0.008
从临床分离的菌株中筛选出多重耐药株R12、R28,敏感株S36。
2.2 临床分离的大肠杆菌对四环素的积聚(图1)
CCCP was added at a final concentration of 0.25 mmol.L-1 at
the time indicated by the arrow.
图1 临床分离大肠杆菌对四环素的积聚
Figure 1 The accumulation of tetracycline in clinical
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isolates of Escherichia coli
在加入3H-四环素后1 min R28、R12、S36细胞内药物质量摩尔浓度均接近稳态。R28细胞内药物的稳态质量摩尔浓度大约为S36的40%,R12约为S36的50%。加入氰氯苯腙(carbonyl cyanide m-chlorphenyl-hydrazone, CCCP)后,R28、R12细胞内四环素稳态质量摩尔浓度上升了大约1.5倍,S36略有上升。
2.3 临床分离大肠杆菌对青霉素的积聚(图2)
CCCP was added at a final concentration of 0.25 mmol.L-1 at the time indicated by the arrow and glucose was added at a final concentration of 0.2% at the time indicated by the black arrow.
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图2 临床分离大肠杆菌对青霉素的积聚
Figure 2 The accumulation of penicillin in clinical
isolates of Escherichia coli
当悬浮液中不含葡萄糖时,S36、R12细胞内稳态青霉素质量摩尔浓度相似。加入葡萄糖后,两者细胞内青霉素质量摩尔浓度均下降,尤以R12为甚。而当加入CCCP后,细胞内青霉素质量摩尔浓度均上升,R12上升幅度大于S36。R28中加入CCCP后,细胞内青霉素质量摩尔浓度上升了3倍。
2.4 大肠杆菌LM313.1与LM313.5对四环素的积聚(图3)
CCCP was added at a final concentration of 0.25 mmol.L-1 at the time indicated by the arrow.
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图3 大肠杆菌LM313.1和LM313.5对四环素的积聚
Figure 3 The accumulation of tetracycline in Escherichia coli
LM313.1 and LM313.5
LM313.1中Tet质量摩尔浓度约为LM313.5的60%,加入CCCP后,LM313.1中稳态四环素质量摩尔浓度上升了近60%,LM313.5仅轻度增加。
2.5 大肠杆菌ATCC25922对四环素和青霉素的积聚(图4)
CCCP was added at a final concentration of 0.25 mmol*L-1 at the time indicated by the arrow.
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图4 大肠杆菌ATCC25922对青霉素和四环素的积聚
Figure 4 The accumulation of penicillin and
tetracycline in ATCC25922
大肠杆菌ATCC25922对四环素和青霉素的积聚在加入药物15 min后尚未达到稳态浓度。当加入CCCP后,ATCC25922细胞内四环素、青霉素质量摩尔浓度均显著下降,四环素下降到高峰质量摩尔浓度的30%,青霉素下降到高峰质量摩尔浓度的20%。
3 讨论
近年来发现的存在于许多细菌耐药株细胞内膜的药物主动外排系统在细菌耐药过程中起着重要作用[1～3]。主动外排系统是一种需能的主动运输系统，因此，存在主动外排系统的细菌的细胞内抗菌药物质量摩尔浓度呈能量依赖性降低。本实验中大肠杆菌多重耐药株R12和R28细胞内四环素和青霉素质量摩尔浓度变化和能量的关系以及对能量抑制剂CCCP的反应表明在临床分离的大肠杆菌多重耐药株中存在对四环素和青霉素的主动外排系统。
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但大肠杆菌NCCLS标准质控菌ATCC25922细胞内四环素和青霉素的积聚对CCCP的反应和多重耐药株明显不同。当加入CCCP后，ATCC25922中四环素和青霉素质量摩尔浓度显著下降，表明ATCC25922中不存在主动外排系统。因为药物从细菌细胞外扩散进细胞内的过程是一种被动扩散过程,需跨膜的pH梯度提供动力[2],CCCP能够破坏细菌的跨膜的pH梯度使得抗菌药物向细胞内扩散失去动力,而且,正是由于这种pH梯度的存在产生的电离平衡以及抗菌药物与作用靶位的结合使得细菌细胞内抗菌药物质量摩尔浓度高于细胞外[4，7，8],因此pH梯度被破坏的结果使得抗菌药物向细菌细胞内扩散失去驱动力,而又由于产生了新的电离平衡，使得细菌细胞内抗菌药物质量摩尔浓度在加入CCCP后迅速下降[2]。因此,细菌是否具有主动外排系统,其细胞内抗菌药物质量摩尔浓度对能量状态的反应明显不同。大肠杆菌NCCLS标准质控菌ATCC25922对四环素和青霉素的积聚以及对CCCP的反应表明ATCC25922中可能没有主动外排系统，四环素和青霉素跨膜的转运过程只是被动扩散过程。但是ATCC25922中四环素和青霉素在15 min后尚未达到稳态质量摩尔浓度，其原因尚不清楚。
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然而,虽然临床分离株S36与ATCC25922同属于敏感株,但两者对四环素、青霉素的积聚以及对CCCP的反应却明显不同,S36与多重耐药株相似,虽然较多重耐药株的反应轻微得多。该结果表明临床分离的敏感株中亦存在主动外排系统，但其主动外排功能较低，不能引起明显的耐药。文献[6]报道主动外排系统的表达受Mar操纵子调控，本实验中也发现LM313.1与LM313.5对四环素主动外排程度的不同亦支持上述观点。敏感株中不存在或仅有失活的Mar操纵子，因此，其主动外排功能较低。另外主动外排系统能否使细菌产生耐药性与细菌外膜通透性亦有密切的关系。在耐药株中一般存在外膜通透性降低[2],抗菌药物向细菌细胞内扩速度降低,主动外排系统来得及将扩散进细胞内的药物泵出细胞外，从而产生明显的耐药性。但是,敏感株的外膜通透性均较高,药物向细胞内扩散速度较快,主动外排系统来不及将扩散进细胞内的药物出细胞外,因此不能降低细胞内的抗菌药物浓度,不能产生耐药性。
虽然敏感株中的主动外排系统并不能使其产生明显的耐药性，但敏感株中主动外排系统的存在可能与细菌泵出从环境中渗入的有害物质以适应环境有关[6]，同时，亦可能在敏感向耐药突变时起重要作用。
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参考文献
1 Okusu H, Ma D, Nikaido H. AcrAB efflux pump plays a major role in the antibiotic resistance phenotype of Escherichia coli multiple-antibiotic-resistance (Mar) mutants. J Bacteriol， 1996,178:306-308
2 Li XZ, Livermore MD, Nikaido H. Role of efflux pump(s) in intrinsic resistance of Pseudomonas aeruginosa: resistance to tetracycline, chloramphenicol, and norfloxacin. Antimicrob Agents Chemother， 1994,38:1732-1741
, 百拇医药
3 Wondrack L, Massa M, Yang BV, et al. Clinical strains of Staphlococcus aureus inactivates and causes efflux of macrolides. Antimicrob Agents Chemother， 1996,40:992-998
4 McMurry LM, George AM, Levy SB. Active efflux of chlorphenicol in susceptible Escherichia coli strains and multiple-antibiotic-resistance(Mar) mutants. Antimicrob Agents Chemother， 1994,38:542-546
5 Li ZX, MA D, Livermore DM, et al. Role of efflux pump(s) in intrinsic resistance of Pseudomonas aeruginosa: active efflux as a contributing factor to β-lactam resistance. Antimicrob Agents Chemother， 1994,38:1742-1752
, 百拇医药
6 Ma D, Cook DN, Alberti M, et al. Genes acrA and acrB encode a stress-induced efflux system of Escherichia coli. Mol Microbiol， 1995,16:45-55
7 Neidhardt FC. Chemical composition of Escherichia coli. In： Neidhardt FC, et al. (ed). Escherichia coli and Salmonella typhimrium: cellular and molecular biology. Washington DC：American Society for Micrology, 1987.3-6
8 Thanassi DG, Suh GSB, and Nikaido H. Role of outer membrane barrier in efflux-mediated tetracycline resistance of Escherichia coli. J Bacteriol， 1995,177:998-1007
(1998-03-30收稿), http://www.100md.com