和CD23共沉淀的新分子的发现
作者：晋康新 王卫莉 陈建 徐德胜
单位：北京医科大学细胞生物学教研室，北京 100083
关键词：
990335 CD23的功能是多方面的，其信号传导通路十分复杂，涉及蛋白激酶C、磷酸肌醇、cGMP及cAMP通路、NOS通路等，并和一系列分子发生相互作用，如CD21/CD19/TAPA-1/Leu-13复合体、HLA-DR、p59fyn、CD11b和CD11c等。现在一般认为，IgFc受体除受体分子外，还存在若干辅助分子，这些辅助分子在维持受体构型、识别配体及传导信号等方面都起着必不可少的作用。CD23是否具有辅助分子，目前仍无确切报道。本实验通过免疫共沉淀方法获得了一个相对分子质量约为110000的分子，该分子很可能就是我们要寻找的辅助分子，当然也可能是信号传导途径的下游分子。
免疫共沉淀方法如下：取RPMI-8866细胞约1×108个，用无血清RPMI-1640培养液洗两次；加入1ml细胞裂解液，4℃作用1h；12000r.min离心10min，取上清；上清与抗体标记的Sephrose4B按15∶1(体积比)混合，4℃轻摇反应20h
以上；用细胞裂解液洗两次，再用不含去污剂的细胞裂解液洗两次，最后用含1g*L-1去污剂的细胞裂解液洗两次，SDS-PAGE电泳。
免疫共沉淀结果：在Lane3中有4条带，除抗体轻、重链、CD23抗原带(经Westem验证)外，相对分子质量110000处出现一条新的蛋白带(pp110)。pp110和上述提到的蛋白质分子在相对分子质量上有显著的差异。在实验中，Digitonin能使pp110和CD23分子共沉淀出来，NP-40则破坏了它们之间的结合，说明pp110和CD23之间以微弱的非共价键结合。B细胞膜上CD23为a型，胞内部分有23个氨基酸残基，不大可能构成蛋白激酶的活性区域，其中有一个酪氨酸区域，因此pp110可能作用于此区域，从而使信号得以传递。pp110的结构及功能都在进一步研究中。
* 国家自然科学基金(39470353)资助项目。
(1999-03-02收稿), http://www.100md.com
单位：北京医科大学细胞生物学教研室，北京 100083
关键词：
990335 CD23的功能是多方面的，其信号传导通路十分复杂，涉及蛋白激酶C、磷酸肌醇、cGMP及cAMP通路、NOS通路等，并和一系列分子发生相互作用，如CD21/CD19/TAPA-1/Leu-13复合体、HLA-DR、p59fyn、CD11b和CD11c等。现在一般认为，IgFc受体除受体分子外，还存在若干辅助分子，这些辅助分子在维持受体构型、识别配体及传导信号等方面都起着必不可少的作用。CD23是否具有辅助分子，目前仍无确切报道。本实验通过免疫共沉淀方法获得了一个相对分子质量约为110000的分子，该分子很可能就是我们要寻找的辅助分子，当然也可能是信号传导途径的下游分子。
免疫共沉淀方法如下：取RPMI-8866细胞约1×108个，用无血清RPMI-1640培养液洗两次；加入1ml细胞裂解液，4℃作用1h；12000r.min离心10min，取上清；上清与抗体标记的Sephrose4B按15∶1(体积比)混合，4℃轻摇反应20h
以上；用细胞裂解液洗两次，再用不含去污剂的细胞裂解液洗两次，最后用含1g*L-1去污剂的细胞裂解液洗两次，SDS-PAGE电泳。
免疫共沉淀结果：在Lane3中有4条带，除抗体轻、重链、CD23抗原带(经Westem验证)外，相对分子质量110000处出现一条新的蛋白带(pp110)。pp110和上述提到的蛋白质分子在相对分子质量上有显著的差异。在实验中，Digitonin能使pp110和CD23分子共沉淀出来，NP-40则破坏了它们之间的结合，说明pp110和CD23之间以微弱的非共价键结合。B细胞膜上CD23为a型，胞内部分有23个氨基酸残基，不大可能构成蛋白激酶的活性区域，其中有一个酪氨酸区域，因此pp110可能作用于此区域，从而使信号得以传递。pp110的结构及功能都在进一步研究中。
* 国家自然科学基金(39470353)资助项目。
(1999-03-02收稿), http://www.100md.com