人类神经丝蛋白基因hSTE的分子克隆*
作者：朱应葆 韩云 傅欣
单位：北京医科大学第三医院中心实验室，北京 100083
关键词：
北京医科大学学报990629 啤酒酵母是人类基因组计划的重要模式生物，它的全基因组测序已于两年前完成，其功能基因组研究亦已全面展开。到目前为止，在已知基因中约1/3功能已经清楚，余下2/3基因的功能有待进一步研究。在全基因组所有6 000多个基因中，约1/4的基因尚未被研究，其中一部分基因在功能上尚不能进行归类，称为“孤儿基因”(orphan genes)。我们根据系统测序发现的新的开放阅读框基因STE编码的蛋白质序列，在Internet下进行Blast分析，搜寻到一个高分值的人EST，再根据获得的EST序列设计两条引物分别和人脑cDNA文库插入子两端的载体序列配对组成类似于5′-RACE和3′-RACE的扩增体系，获得5′端序列和3′端序列。完成测序后和人的EST库中相关EST进行比较分析，拼接出一个全长为3773bp的cDNA，其中最长的开放阅读框在1～3078之间，编码的蛋白质含1026个氨基酸，并含有多个重复的KSP磷酸化位点。同源性检索发现它和人类神经丝蛋白H的同源性在90%以上。将克隆的该基因命名为hSTE并登录到Genbank,登记号为AF203032。利用模式生物对克隆的基因进行遗传互补测验的工作目前正在进行中。
*国家自然科学基金(39670235，39770409)及国家高技术发展计划青年基金(1998)资助课题；
(1999-11-26收稿), 百拇医药
单位：北京医科大学第三医院中心实验室，北京 100083
关键词：
北京医科大学学报990629 啤酒酵母是人类基因组计划的重要模式生物，它的全基因组测序已于两年前完成，其功能基因组研究亦已全面展开。到目前为止，在已知基因中约1/3功能已经清楚，余下2/3基因的功能有待进一步研究。在全基因组所有6 000多个基因中，约1/4的基因尚未被研究，其中一部分基因在功能上尚不能进行归类，称为“孤儿基因”(orphan genes)。我们根据系统测序发现的新的开放阅读框基因STE编码的蛋白质序列，在Internet下进行Blast分析，搜寻到一个高分值的人EST，再根据获得的EST序列设计两条引物分别和人脑cDNA文库插入子两端的载体序列配对组成类似于5′-RACE和3′-RACE的扩增体系，获得5′端序列和3′端序列。完成测序后和人的EST库中相关EST进行比较分析，拼接出一个全长为3773bp的cDNA，其中最长的开放阅读框在1～3078之间，编码的蛋白质含1026个氨基酸，并含有多个重复的KSP磷酸化位点。同源性检索发现它和人类神经丝蛋白H的同源性在90%以上。将克隆的该基因命名为hSTE并登录到Genbank,登记号为AF203032。利用模式生物对克隆的基因进行遗传互补测验的工作目前正在进行中。
*国家自然科学基金(39670235，39770409)及国家高技术发展计划青年基金(1998)资助课题；
(1999-11-26收稿), 百拇医药