自制培养基对链球菌溶血素O产量的影响
作者：曹杰 屠静
单位：北京大学微生物学系，北京 100083
关键词：链球菌溶血素类；分类；培养基；链球菌属
北京医科大学学报000329 [中图分类号]R37 [文献标识码] A
[文章编号] 1000-1530(2000)03-0288-01▲
乙型溶血性链球菌产生的溶血素O(streptolysin O,SLO)抗原性强，85%～95%链球菌感染的患者，感染后2～3周至病愈后数月甚至1年内均可检出SLO抗体。临床上常测定SLO抗体作为风湿热活动的辅助诊断[1]。SLO是测定SLO抗体不可缺少的试剂，在医学微生物教学中，也是常用的实验材料。为提高实验课教学质量，作者采用自制培养液和几种常用培养液培养2株乙型溶血性链球菌，以获取SLO，并进行溶血实验。发现自制培养液的SLO产量明显高于其它培养液。现将方法介绍如下。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 菌种准备
将乙型溶血性链球菌标准株32172——菌1(由中国药品生物制品检定所提供)及临床分离株B110株——菌2(由西安医科大学微生物学和免疫学系方亮教授提供)接种血平板，并传数代备用。
1.2 常用培养液制备
按细菌学培养基操作常规制备溶血素O肉汤(培1)、 消化肉汤(培2)、肉浸液肉汤(培3)、肉膏汤(培4)、黄豆消化液(培5)、酵母浸液(培6)各100 ml，常规灭菌备用。
1.3 自制培养液(培7)制备
, 百拇医药
将酵母浸膏100 mg、氨基氮50 mg、泛酸0.6 mg、烟酸0.1 mg、维生素B1 0.02 mg、维生素B2 0.12 mg、维生素B6 0.025 mg、维生素B12 0.04 mg加入100 ml普通肉汤内，100℃水浴加热溶解，pH7.6，常规灭菌备用。
1.4 实验方法
将菌1、菌2分别接种上述培养液置37℃ 18～24 h震荡培养。以滤过法除菌。将各培养液滤液还原处理后用生理盐水按0.25 ml量稀释成不同稀释度[2]，各管补0.5 ml生理盐水后，分别加入1%(体积分数)兔红细胞0.25 ml，置37℃，45 min，观察结果。以出现全部溶血的最高稀释度(体积分数)作为SLO的溶血效价。
2 结果
, 百拇医药
7种不同培养基的SLO产量比较结果见表1。
表1 7种不同培养基的SLO产量比较
Table 1 Comparison of different media for output of SLO Bacteria
ω(haemolysis)
Medium1
Medium2
Medium3
Medium4
Medium5
, 百拇医药
Medium6
Medium7
Strain1
1∶64
1∶16
1∶8
1∶4
1∶2
1∶32
1∶128
Strain2
1∶64
, 百拇医药
1∶16
1∶8
1∶4
1∶2
1∶32
1∶128
There is no significant difference between SLO outputs of Strain1 and Strain2, with seven different media in thirty haemolysis experiments, respectively.
3 讨论
上述结果表明，自制培养液的SLO产量明显高于其它培养液。依据文献[3]要求，经透析处理后的浓制溶血素O，其溶血效价(体积比)不低于1∶128。本法的未经透析浓缩粗制SLO溶血效价就已达到规定标准。其效价提高原因，一方面可能得益于该培养基中多种维生素对细菌代谢的影响；一方面可能是由于氨基氮含量增加为合成SLO提供了必要的氮源保证。在本系实验课教学改革中，由于采用自制培养液，增加了学生操作的成功率，提高了教学质量，节省了教育经费。该法制备过程简单，SLO稳定性好，于-6℃保存，5年内效价几无改变，便于基层实验室推广，并可降低抗链球菌溶血素O胶乳试剂盒的成本。■
参考文献
[1]冯树异，程松高，于修平主编.医学微生物学[M].北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1999.98-99
[2]柴顺根主编.临床微生物学及检验实验指导[M].吉林：吉林科学技术出版社，1995.49-50
[3]中华人民共和国卫生部.中国生物制品规程(二部)[M].北京：卫生部生物制品标准化委员会出版，1993.129-130
收稿日期：1999-04-05, 百拇医药
单位：北京大学微生物学系，北京 100083
关键词：链球菌溶血素类；分类；培养基；链球菌属
北京医科大学学报000329 [中图分类号]R37 [文献标识码] A
[文章编号] 1000-1530(2000)03-0288-01▲
乙型溶血性链球菌产生的溶血素O(streptolysin O,SLO)抗原性强，85%～95%链球菌感染的患者，感染后2～3周至病愈后数月甚至1年内均可检出SLO抗体。临床上常测定SLO抗体作为风湿热活动的辅助诊断[1]。SLO是测定SLO抗体不可缺少的试剂，在医学微生物教学中，也是常用的实验材料。为提高实验课教学质量，作者采用自制培养液和几种常用培养液培养2株乙型溶血性链球菌，以获取SLO，并进行溶血实验。发现自制培养液的SLO产量明显高于其它培养液。现将方法介绍如下。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 菌种准备
将乙型溶血性链球菌标准株32172——菌1(由中国药品生物制品检定所提供)及临床分离株B110株——菌2(由西安医科大学微生物学和免疫学系方亮教授提供)接种血平板，并传数代备用。
1.2 常用培养液制备
按细菌学培养基操作常规制备溶血素O肉汤(培1)、 消化肉汤(培2)、肉浸液肉汤(培3)、肉膏汤(培4)、黄豆消化液(培5)、酵母浸液(培6)各100 ml，常规灭菌备用。
1.3 自制培养液(培7)制备
, 百拇医药
将酵母浸膏100 mg、氨基氮50 mg、泛酸0.6 mg、烟酸0.1 mg、维生素B1 0.02 mg、维生素B2 0.12 mg、维生素B6 0.025 mg、维生素B12 0.04 mg加入100 ml普通肉汤内，100℃水浴加热溶解，pH7.6，常规灭菌备用。
1.4 实验方法
将菌1、菌2分别接种上述培养液置37℃ 18～24 h震荡培养。以滤过法除菌。将各培养液滤液还原处理后用生理盐水按0.25 ml量稀释成不同稀释度[2]，各管补0.5 ml生理盐水后，分别加入1%(体积分数)兔红细胞0.25 ml，置37℃，45 min，观察结果。以出现全部溶血的最高稀释度(体积分数)作为SLO的溶血效价。
2 结果
, 百拇医药
7种不同培养基的SLO产量比较结果见表1。
表1 7种不同培养基的SLO产量比较
Table 1 Comparison of different media for output of SLO Bacteria
ω(haemolysis)
Medium1
Medium2
Medium3
Medium4
Medium5
, 百拇医药
Medium6
Medium7
Strain1
1∶64
1∶16
1∶8
1∶4
1∶2
1∶32
1∶128
Strain2
1∶64
, 百拇医药
1∶16
1∶8
1∶4
1∶2
1∶32
1∶128
There is no significant difference between SLO outputs of Strain1 and Strain2, with seven different media in thirty haemolysis experiments, respectively.
3 讨论
上述结果表明，自制培养液的SLO产量明显高于其它培养液。依据文献[3]要求，经透析处理后的浓制溶血素O，其溶血效价(体积比)不低于1∶128。本法的未经透析浓缩粗制SLO溶血效价就已达到规定标准。其效价提高原因，一方面可能得益于该培养基中多种维生素对细菌代谢的影响；一方面可能是由于氨基氮含量增加为合成SLO提供了必要的氮源保证。在本系实验课教学改革中，由于采用自制培养液，增加了学生操作的成功率，提高了教学质量，节省了教育经费。该法制备过程简单，SLO稳定性好，于-6℃保存，5年内效价几无改变，便于基层实验室推广，并可降低抗链球菌溶血素O胶乳试剂盒的成本。■
参考文献
[1]冯树异，程松高，于修平主编.医学微生物学[M].北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1999.98-99
[2]柴顺根主编.临床微生物学及检验实验指导[M].吉林：吉林科学技术出版社，1995.49-50
[3]中华人民共和国卫生部.中国生物制品规程(二部)[M].北京：卫生部生物制品标准化委员会出版，1993.129-130
收稿日期：1999-04-05, 百拇医药