三种酶联免疫吸附法筛选“渗漏”型SCID小鼠的比较
作者：李艺 崔恒 叶雪 姚煜
单位：北京大学人民医院妇科肿瘤中心，北京 100044
关键词：
北京医科大学学报000331 SCID(severe combined immunodeficiency)小鼠是一种严重联合免疫缺陷动物，在繁育过程中可能出现“渗漏”现象，即部分小鼠出现低水平的功能性T和B细胞，血清中Ig含量明显升高。在用SCID小鼠进行肿瘤或免疫学实验时，通常用酶联免疫吸附法(ELISA)测定鼠血清中总Ig含量来判断小鼠是否渗漏。一般要求Ig<1 mg.L-1用作实验。IgG占总Ig的80%以上，可反映总Ig含量。本文比较了3种ELISA法测定SCID小鼠、BALB/c裸小鼠及BALB/c小鼠血清IgG含量的效果。
方法：用羊抗小鼠IgG包被ELISA板，依次加入小鼠IgG标准品及待测鼠血清。(1)双抗夹心ELISA法：加HRP标记羊抗鼠IgG；(2)双抗夹心间接ELISA法：依次加羊抗鼠IgG和HRP-兔抗羊IgG；(3)生物素-亲和素夹心ELISA法：依次加生物素标记兔抗鼠IgG，HRP标记亲和素孵育。最后OPD显色，测OD490值。
结果：3种方法均可检测BALB/c裸小鼠和BALB/c小鼠血清中IgG，其IgG含量为4.1～4.4 g.L-1。只有生物素-亲和素夹心ELISA法可检测到SCID小鼠血清IgG，41只SCID小鼠中40只的IgG含量为(0.24±0.16) mg.L-1，只有1只为2.3 mg.L-1，渗漏比例为2.4%。另外两种方法灵敏度较差，均不能检测SCID小鼠血清IgG。
讨论：SCID小鼠中有一种所谓突变基因“渗漏型”(leakyphenotype)小鼠，其原因是抗原受体基因重组酶异常，导致受体基因可能随机重排，从而表达有功能的抗原受体，使部分淋巴细胞恢复功能。“渗漏”出现的频率及产生免疫球蛋白的水平，随小鼠年龄增加而升高，而且与未严格控制无病原体环境(SPF)有关。在SPF屏障系统中饲养的SCID小鼠，3～9月龄中检出Ig阳性的<5%，12～15月龄中至少30%检出Ig阳性。“渗漏”型小鼠的Ig水平一般为1～5mg.L-1，本文结果与文献报道一致。经比较以生物素-亲和素夹心ELISA法最敏感，可对SCID小鼠“渗漏”进行初筛，简便、敏感、可行。■
收稿日期：1999-11-30, http://www.100md.com
单位：北京大学人民医院妇科肿瘤中心，北京 100044
关键词：
北京医科大学学报000331 SCID(severe combined immunodeficiency)小鼠是一种严重联合免疫缺陷动物，在繁育过程中可能出现“渗漏”现象，即部分小鼠出现低水平的功能性T和B细胞，血清中Ig含量明显升高。在用SCID小鼠进行肿瘤或免疫学实验时，通常用酶联免疫吸附法(ELISA)测定鼠血清中总Ig含量来判断小鼠是否渗漏。一般要求Ig<1 mg.L-1用作实验。IgG占总Ig的80%以上，可反映总Ig含量。本文比较了3种ELISA法测定SCID小鼠、BALB/c裸小鼠及BALB/c小鼠血清IgG含量的效果。
方法：用羊抗小鼠IgG包被ELISA板，依次加入小鼠IgG标准品及待测鼠血清。(1)双抗夹心ELISA法：加HRP标记羊抗鼠IgG；(2)双抗夹心间接ELISA法：依次加羊抗鼠IgG和HRP-兔抗羊IgG；(3)生物素-亲和素夹心ELISA法：依次加生物素标记兔抗鼠IgG，HRP标记亲和素孵育。最后OPD显色，测OD490值。
结果：3种方法均可检测BALB/c裸小鼠和BALB/c小鼠血清中IgG，其IgG含量为4.1～4.4 g.L-1。只有生物素-亲和素夹心ELISA法可检测到SCID小鼠血清IgG，41只SCID小鼠中40只的IgG含量为(0.24±0.16) mg.L-1，只有1只为2.3 mg.L-1，渗漏比例为2.4%。另外两种方法灵敏度较差，均不能检测SCID小鼠血清IgG。
讨论：SCID小鼠中有一种所谓突变基因“渗漏型”(leakyphenotype)小鼠，其原因是抗原受体基因重组酶异常，导致受体基因可能随机重排，从而表达有功能的抗原受体，使部分淋巴细胞恢复功能。“渗漏”出现的频率及产生免疫球蛋白的水平，随小鼠年龄增加而升高，而且与未严格控制无病原体环境(SPF)有关。在SPF屏障系统中饲养的SCID小鼠，3～9月龄中检出Ig阳性的<5%，12～15月龄中至少30%检出Ig阳性。“渗漏”型小鼠的Ig水平一般为1～5mg.L-1，本文结果与文献报道一致。经比较以生物素-亲和素夹心ELISA法最敏感，可对SCID小鼠“渗漏”进行初筛，简便、敏感、可行。■
收稿日期：1999-11-30, http://www.100md.com