系统性红斑狼疮BXSB小鼠骨髓B细胞系细胞的分化发育
作者：徐志伟 邓鸿业 邓玉兰 丁桂凤
单位：北京大学基础医学院免疫学系，北京 100083
关键词：B细胞活化抗原；分离和提纯；骨髓细胞；生长和发育；红斑狼疮；系统性；自身抗体；生物合成；Yaa基因
北京医科大学学报000410 [摘 要] 目的：研究Yaa基因与骨髓B细胞系细胞的分化发育是否有相互关系。方法：用Whitlock-Witte法从骨髓细胞中培养纯化出B细胞系细胞，继而检测B细胞系细胞对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激后的表型、增殖反应和抗DNA抗体的产生以及对地塞米松诱导后的凋亡情况。结果：用Whitlock-Witte法成功地从骨髓细胞中培养分离出B细胞系细胞。经LPS刺激后，雌雄BXSB小鼠B细胞系细胞膜表面CD19抗原和膜表面Ig的分布相似，都出现较强的增殖反应和产生IgM类型的抗ssDNA和dsDNA 抗体，但是对地塞米松诱导的凋亡作用不敏感。结论：Yaa基因对BXSB小鼠骨髓中B细胞系细胞的分化发育无影响，提示Yaa基因仅在外周免疫器官的成熟B细胞中表达活性；并且BXSB小鼠骨髓中的自身反应性B细胞系细胞未被删除，可能是产生自身抗体的内在原因之一。
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[中图分类号] R758.62-332 [文献标识码] A [文章编号] 1000-1530(2000)04-0320-04
Study on the differentiation and development of bone marrow B
cell lineage cells from systemic lupus erythematosus BXSB mice
XU Zhi-Wei
(Department of Immunology, Peking University, Beijing 100083, China)
DENG Hong-Ye
, 百拇医药
(Department of Immunology, Peking University, Beijing 100083, China)
DENG Yu-Lan
(Department of Immunology, Peking University, Beijing 100083, China)
DING Gui-Feng
(Department of Immunology, Peking University, Beijing 100083, China)
ABSTRACT Objective： To obtain B cell lineage cells from the bone marrow of lupus BXSB mice and observe whether there is an interrelation between the Yaa gene and B cell lineage differentiation. Methods： B cell lineage cells were isolated with Whitlock-Witte method, and their surface phenotype， proliferation， production of anti-DNA antibody after response to lipopolysaccharide (LPS) and apoptosis status induced by dexamethasone were detected. Results:B cell lineage cells derived from male or female BXSB mice had identical distribution of CD19 and surface membrane Ig , proliferative response with similar intensity and produced approximate levels of IgM anti-DNA antibodies after LPS stimulation. Besides , the B cell lineage cells were resistant to the Dex- induced apoptosis. Conclusion: Yaa gene has no effects on the differentiation and development of the bone marrow B cell lineage cells in SLE BXSB mice, suggesting that its activity only appears in the peripheral mature B cells. The autoactive B cell lineage cells in the bone marrow of BXSB mice are not deleted, which maybe is one of the intrinsic reasons of producing autoantibodies.
, 百拇医药
KEY WORDS B-cell activation antigen/isol; Bone marrow cells/growth; Lupus erythematosus, systemic; Autoantibodies/biosyn; Gene Yaa
(J Beijing Med Univ, 2000,32:320-322)
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus， SLE)是由于免疫复合物形成而造成多器官损伤的自身免疫性疾病。但其病因及发病机制仍不明朗。近来，对遗传背景不同的SLE小鼠模型进行了多方面的研究表明，由于B细胞的内在缺陷导致其表型异常和功能亢进是SLE发生的主要细胞学基础。在SLE小鼠模型BXSB品系，由于Yaa(Y chromosome associated -autoimmune accelerator)基因的作用，使得雄性小鼠发病早且严重，而雌性小鼠发病迟且相对轻，这与雄性小鼠外周淋巴器官中出现Yaa基因相关的B细胞异常有关，包括对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)的高增殖反应，膜表面粘附或辅助分子的高表达以及出现异常的CD40配体分子等[1]。骨髓移植实验证明，雄性BXSB小鼠的早发病与造血干细胞有关，那么Yaa基因是否与骨髓中B细胞系的分化发育相关有待澄清。为此，本实验对BXSB小鼠骨髓B细胞系细胞进行了分离培养，并进一步检测分析了在诱导剂的作用下骨髓B细胞系细胞的分化和凋亡的情况。
, 百拇医药
1 材料与方法
动物：BXSB小鼠，3周龄，雌雄各3～5只(该小鼠由第三临床医学院皮肤科陈学荣教授自美国Jackson实验室引进，本研究室饲养繁殖)。
优质胎牛血清(FCS)(Hyclone)，RPMI1640(Gibco), PE-CD19mAb(深圳晶美公司)，FITC-RaMIg(本室制备)，组织培养板及培养皿(Falcon)。
骨髓B细胞系细胞的体外培养与分离，采用Dorshlick介绍的Whitlock-Witte方法[2]。获取小鼠后肢骨髓细胞，用含体积分数5%的胎牛血清的RPMI1640培养液配成1×106 ml-1细胞浓度，放入6孔组织培养板内，每孔3 ml，在37℃和体积分数5%的CO2条件下培养。第3天时加入3 ml的含体积分数5%的FCS的RPMI1640培养液(下同)。此后的第3天弃去80%的培养液，加入1.5 ml的培养液。以后每周半量换培养液2次。
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收集B细胞系细胞：用尖吸管吹打悬起细胞，然后将细胞转移到新的组织培养皿中，在37℃和体积分数5%的CO2条件下放置2 h。此时饲养细胞贴壁，将处于悬浮状态的B细胞系细胞收集，洗涤。再用含体积分数10%的FCS的RPMI1640培养液配成1×106 ml-1的细胞浓度。
将细胞放入24孔细胞培养板，每孔1 ml，加LPS至终(质量)浓度20 mg*L-1，在37℃和体积分数5%的CO2条件下，连续培养3 d。收集细胞，用PE-CD19mAb和FITC-RaMIg对细胞进行双染色，上流式细胞仪分析。
用上述方法连续培养5 d后，收集上清，用ELISA法测定IgM和IgG类型抗ssDNA和dsDNA抗体[3]。
将上述相同细胞浓度和相同LPS质量浓度的细胞悬液，加入96孔培养板，每孔0.2 ml，在相同条件下培养48 h，然后每孔加入7.4×105Bq的3H-TdR，继续培养24 h。收获细胞，用Wallac仪测定细胞内参入DNA中的3H-TdR的放射性活度。
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细胞悬液加入终浓度为10-6 mol.L-1的地塞米松，在37℃和体积分数5%的CO2条件下培养12 h。收集细胞，用PI染色。经流式细胞仪测量亚二倍体细胞数量作为凋亡细胞的含量。
2 结果
骨髓细胞经过1周的培养后，可见较小的B细胞系细胞集落。经过3周培养后，可见B细胞系细胞形成的较大集落或密集分布于饲养层细胞下面。
从雌雄BXSB小鼠骨髓细胞中培养分离出的骨髓B细胞系细胞，经LPS作用后，细胞表面的CD19抗原和膜表面Ig抗原的分布极为相似(图1)。近90%的细胞表达CD19抗原，其中Ig阴性的B细胞与Ig阳性的B细胞的比例接近1∶1。CD19抗原阴性的细胞可能是更加原始的细胞。
, 百拇医药
A, male BXSB mice; B, female BXSB mice.
图1 Pre-B细胞系细胞膜表面CD19和Ig抗原的分布
Figure 1 CD19 and SmIg distribution on Pre-B lineage cells
雌雄BXSB小鼠的骨髓B细胞系细胞一般不能自发产生IgM和IgG类型的抗ssDNA和dsDNA的抗体。在体外经LPS刺激后，雌、雄BXSB小鼠的骨髓B细胞系产生IgM类型的抗ssDNA抗体[光密度D(
±s)分别是1.09±0.08和0.89±0.24]和抗dsDNA抗体[D(±s)分别是1.20±0.06和0.82±0.14]，前者的水平稍高于后者；但是，雌雄BXSB小鼠的骨髓B细胞系细胞均不产生IgG类型的抗DNA抗体。
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雌雄BXSB小鼠的骨髓B细胞系细胞对LPS刺激有非常明显的增殖反应。雌性BXSB小鼠骨髓B细胞系细胞的增殖反应[活度(±s)是(2 254±148)Bq]稍高于雄性BXSB小鼠的骨髓B细胞系细胞[活度(±s)是(1 723±100)Bq]。
雌雄BXSB小鼠的骨髓B细胞系细胞对地塞米松的凋亡诱导作用不敏感，经10-6 mol.L-1浓度的地塞米松作用12 h后，两者均不到10%的细胞出现凋亡(图2)。此与小鼠胸腺细胞不同，我们在以前的实验中用相同浓度的地塞米松处理相同时间，大于80%的胸腺细胞出现凋亡。
, http://www.100md.com A, male BXSB mice; B, female BXSB mice.
图2 地塞米松诱导的Pre-B细胞系细胞凋亡的检测结果
Figure 2 Detection for Dex-induced apoptosis of Pre-B lineage cells
by flow cytometry
3 讨论
Whitlock-Witte方法是从骨髓细胞中培养分离B细胞的经典方法[2],用该法获得的B细胞系细胞含有各个阶段的B细胞，从Pre-B细胞到SmIg+的B细胞。用此法从雌雄BXSB小鼠骨髓细胞中培养分离的B细胞系细胞中有近90%细胞表达B细胞系特异的CD19抗原。经LPS刺激后，雌雄BXSB小鼠的CD19抗原阳性的骨髓B细胞系细胞中膜表面Ig阳性和阴性的B细胞的比例都接近1∶1，表明Yaa基因对骨髓B细胞系细胞膜抗原的分化过程无作用。
, 百拇医药
其次，雌雄BXSB小鼠骨髓B细胞系细胞中有相当一部分对LPS的刺激产生应答：骨髓B细胞系细胞对LPS 有明显的增殖反应，而雌性小鼠的反应稍强于雄性小鼠；在LPS 的刺激下，雌雄BXSB小鼠的骨髓B 细胞系细胞具有相似的能力产生IgM类型的抗ssDNA和dsDNA 抗体，但不产生IgG类型的抗DNA 抗体。未受 LPS刺激的骨髓B细胞系细胞几乎不产生任何类型的抗DNA抗体。提示狼疮性BXSB 小鼠的B细胞分化发育的中枢免疫器官骨髓中，对DNA自身抗原反应的B 细胞没有被删除，可能是产生抗DNA抗体的内因所在。因此，骨髓B细胞系细胞只有进入外周免疫器官，接受自身抗原的刺激并在T 细胞的协助下才能产生IgM类型的抗DNA抗体或向产生 IgG类型抗DNA抗体转换。
地塞米松是淋巴细胞凋亡的诱导剂，但是从雌雄BXSB小鼠骨髓来源的B细胞系细胞均对地塞米松的凋亡诱导作用不敏感，也提示Yaa 基因对凋亡的诱导过程无影响。至于雌雄BXSB小鼠骨髓B细胞系细胞对地塞米松的凋亡诱导作用不敏感，而正常小鼠的胸腺细胞对地塞米松的凋亡诱导作用敏感的原因不清。
, 百拇医药
实验表明，Yaa基因的活性表达有时空性，它在BXSB 小鼠骨髓内 B细胞系的分化发育过程中不发挥作用，但对外周免疫器官的成熟B细胞发挥效应，通过改变 B细胞的表型和功能而促进SLE 的发生与发展。今后若将雌雄BXSB小鼠骨髓的B细胞系细胞培养分离后，分别转移给组织相容性且受射线照射过的正常小鼠受体，以研究小鼠受体的发病有无或程度，可进一步分析Yaa基因活性的表达与B细胞在致病中的作用的相互关系。
基金项目：高等院校博士点专项科研基金资助([1999]26)。
参考文献
1，Blossom S, Gibert KM. Antibody production in autoimmune BXSB mice. I. CD40 ligand-expressing B cells need fewer signals for polyclonal antibody synthesis[J]. Clin Exp Immunol, 1999,118:147-153
, 百拇医药
2，Dorshkind R, Landreth KS. Use of long term bone culture and cloned stromal cell lines to grow B cell lineage cells. In: Immunology Methods mannual,edited by Ivan Lefkovits[M]. Volume 2.Inc San Diego, Califonia： Academic Press, 1997. 889-900
3，徐志伟,邓鸿业,丁桂凤.狼疮性BXSB小鼠抗DNA抗体水平的动态变化[J].免疫学杂志，2000, 16:13-15
(2000-03-30收稿), http://www.100md.com
单位：北京大学基础医学院免疫学系，北京 100083
关键词：B细胞活化抗原；分离和提纯；骨髓细胞；生长和发育；红斑狼疮；系统性；自身抗体；生物合成；Yaa基因
北京医科大学学报000410 [摘 要] 目的：研究Yaa基因与骨髓B细胞系细胞的分化发育是否有相互关系。方法：用Whitlock-Witte法从骨髓细胞中培养纯化出B细胞系细胞，继而检测B细胞系细胞对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激后的表型、增殖反应和抗DNA抗体的产生以及对地塞米松诱导后的凋亡情况。结果：用Whitlock-Witte法成功地从骨髓细胞中培养分离出B细胞系细胞。经LPS刺激后，雌雄BXSB小鼠B细胞系细胞膜表面CD19抗原和膜表面Ig的分布相似，都出现较强的增殖反应和产生IgM类型的抗ssDNA和dsDNA 抗体，但是对地塞米松诱导的凋亡作用不敏感。结论：Yaa基因对BXSB小鼠骨髓中B细胞系细胞的分化发育无影响，提示Yaa基因仅在外周免疫器官的成熟B细胞中表达活性；并且BXSB小鼠骨髓中的自身反应性B细胞系细胞未被删除，可能是产生自身抗体的内在原因之一。
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[中图分类号] R758.62-332 [文献标识码] A [文章编号] 1000-1530(2000)04-0320-04
Study on the differentiation and development of bone marrow B
cell lineage cells from systemic lupus erythematosus BXSB mice
XU Zhi-Wei
(Department of Immunology, Peking University, Beijing 100083, China)
DENG Hong-Ye
, 百拇医药
(Department of Immunology, Peking University, Beijing 100083, China)
DENG Yu-Lan
(Department of Immunology, Peking University, Beijing 100083, China)
DING Gui-Feng
(Department of Immunology, Peking University, Beijing 100083, China)
ABSTRACT Objective： To obtain B cell lineage cells from the bone marrow of lupus BXSB mice and observe whether there is an interrelation between the Yaa gene and B cell lineage differentiation. Methods： B cell lineage cells were isolated with Whitlock-Witte method, and their surface phenotype， proliferation， production of anti-DNA antibody after response to lipopolysaccharide (LPS) and apoptosis status induced by dexamethasone were detected. Results:B cell lineage cells derived from male or female BXSB mice had identical distribution of CD19 and surface membrane Ig , proliferative response with similar intensity and produced approximate levels of IgM anti-DNA antibodies after LPS stimulation. Besides , the B cell lineage cells were resistant to the Dex- induced apoptosis. Conclusion: Yaa gene has no effects on the differentiation and development of the bone marrow B cell lineage cells in SLE BXSB mice, suggesting that its activity only appears in the peripheral mature B cells. The autoactive B cell lineage cells in the bone marrow of BXSB mice are not deleted, which maybe is one of the intrinsic reasons of producing autoantibodies.
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KEY WORDS B-cell activation antigen/isol; Bone marrow cells/growth; Lupus erythematosus, systemic; Autoantibodies/biosyn; Gene Yaa
(J Beijing Med Univ, 2000,32:320-322)
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus， SLE)是由于免疫复合物形成而造成多器官损伤的自身免疫性疾病。但其病因及发病机制仍不明朗。近来，对遗传背景不同的SLE小鼠模型进行了多方面的研究表明，由于B细胞的内在缺陷导致其表型异常和功能亢进是SLE发生的主要细胞学基础。在SLE小鼠模型BXSB品系，由于Yaa(Y chromosome associated -autoimmune accelerator)基因的作用，使得雄性小鼠发病早且严重，而雌性小鼠发病迟且相对轻，这与雄性小鼠外周淋巴器官中出现Yaa基因相关的B细胞异常有关，包括对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)的高增殖反应，膜表面粘附或辅助分子的高表达以及出现异常的CD40配体分子等[1]。骨髓移植实验证明，雄性BXSB小鼠的早发病与造血干细胞有关，那么Yaa基因是否与骨髓中B细胞系的分化发育相关有待澄清。为此，本实验对BXSB小鼠骨髓B细胞系细胞进行了分离培养，并进一步检测分析了在诱导剂的作用下骨髓B细胞系细胞的分化和凋亡的情况。
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1 材料与方法
动物：BXSB小鼠，3周龄，雌雄各3～5只(该小鼠由第三临床医学院皮肤科陈学荣教授自美国Jackson实验室引进，本研究室饲养繁殖)。
优质胎牛血清(FCS)(Hyclone)，RPMI1640(Gibco), PE-CD19mAb(深圳晶美公司)，FITC-RaMIg(本室制备)，组织培养板及培养皿(Falcon)。
骨髓B细胞系细胞的体外培养与分离，采用Dorshlick介绍的Whitlock-Witte方法[2]。获取小鼠后肢骨髓细胞，用含体积分数5%的胎牛血清的RPMI1640培养液配成1×106 ml-1细胞浓度，放入6孔组织培养板内，每孔3 ml，在37℃和体积分数5%的CO2条件下培养。第3天时加入3 ml的含体积分数5%的FCS的RPMI1640培养液(下同)。此后的第3天弃去80%的培养液，加入1.5 ml的培养液。以后每周半量换培养液2次。
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收集B细胞系细胞：用尖吸管吹打悬起细胞，然后将细胞转移到新的组织培养皿中，在37℃和体积分数5%的CO2条件下放置2 h。此时饲养细胞贴壁，将处于悬浮状态的B细胞系细胞收集，洗涤。再用含体积分数10%的FCS的RPMI1640培养液配成1×106 ml-1的细胞浓度。
将细胞放入24孔细胞培养板，每孔1 ml，加LPS至终(质量)浓度20 mg*L-1，在37℃和体积分数5%的CO2条件下，连续培养3 d。收集细胞，用PE-CD19mAb和FITC-RaMIg对细胞进行双染色，上流式细胞仪分析。
用上述方法连续培养5 d后，收集上清，用ELISA法测定IgM和IgG类型抗ssDNA和dsDNA抗体[3]。
将上述相同细胞浓度和相同LPS质量浓度的细胞悬液，加入96孔培养板，每孔0.2 ml，在相同条件下培养48 h，然后每孔加入7.4×105Bq的3H-TdR，继续培养24 h。收获细胞，用Wallac仪测定细胞内参入DNA中的3H-TdR的放射性活度。
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细胞悬液加入终浓度为10-6 mol.L-1的地塞米松，在37℃和体积分数5%的CO2条件下培养12 h。收集细胞，用PI染色。经流式细胞仪测量亚二倍体细胞数量作为凋亡细胞的含量。
2 结果
骨髓细胞经过1周的培养后，可见较小的B细胞系细胞集落。经过3周培养后，可见B细胞系细胞形成的较大集落或密集分布于饲养层细胞下面。
从雌雄BXSB小鼠骨髓细胞中培养分离出的骨髓B细胞系细胞，经LPS作用后，细胞表面的CD19抗原和膜表面Ig抗原的分布极为相似(图1)。近90%的细胞表达CD19抗原，其中Ig阴性的B细胞与Ig阳性的B细胞的比例接近1∶1。CD19抗原阴性的细胞可能是更加原始的细胞。
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A, male BXSB mice; B, female BXSB mice.
图1 Pre-B细胞系细胞膜表面CD19和Ig抗原的分布
Figure 1 CD19 and SmIg distribution on Pre-B lineage cells
雌雄BXSB小鼠的骨髓B细胞系细胞一般不能自发产生IgM和IgG类型的抗ssDNA和dsDNA的抗体。在体外经LPS刺激后，雌、雄BXSB小鼠的骨髓B细胞系产生IgM类型的抗ssDNA抗体[光密度D(
±s)分别是1.09±0.08和0.89±0.24]和抗dsDNA抗体[D(±s)分别是1.20±0.06和0.82±0.14]，前者的水平稍高于后者；但是，雌雄BXSB小鼠的骨髓B细胞系细胞均不产生IgG类型的抗DNA抗体。, http://www.100md.com
雌雄BXSB小鼠的骨髓B细胞系细胞对LPS刺激有非常明显的增殖反应。雌性BXSB小鼠骨髓B细胞系细胞的增殖反应[活度(
±s)是(2 254±148)Bq]稍高于雄性BXSB小鼠的骨髓B细胞系细胞[活度(±s)是(1 723±100)Bq]。雌雄BXSB小鼠的骨髓B细胞系细胞对地塞米松的凋亡诱导作用不敏感，经10-6 mol.L-1浓度的地塞米松作用12 h后，两者均不到10%的细胞出现凋亡(图2)。此与小鼠胸腺细胞不同，我们在以前的实验中用相同浓度的地塞米松处理相同时间，大于80%的胸腺细胞出现凋亡。
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图2 地塞米松诱导的Pre-B细胞系细胞凋亡的检测结果
Figure 2 Detection for Dex-induced apoptosis of Pre-B lineage cells
by flow cytometry
3 讨论
Whitlock-Witte方法是从骨髓细胞中培养分离B细胞的经典方法[2],用该法获得的B细胞系细胞含有各个阶段的B细胞，从Pre-B细胞到SmIg+的B细胞。用此法从雌雄BXSB小鼠骨髓细胞中培养分离的B细胞系细胞中有近90%细胞表达B细胞系特异的CD19抗原。经LPS刺激后，雌雄BXSB小鼠的CD19抗原阳性的骨髓B细胞系细胞中膜表面Ig阳性和阴性的B细胞的比例都接近1∶1，表明Yaa基因对骨髓B细胞系细胞膜抗原的分化过程无作用。
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其次，雌雄BXSB小鼠骨髓B细胞系细胞中有相当一部分对LPS的刺激产生应答：骨髓B细胞系细胞对LPS 有明显的增殖反应，而雌性小鼠的反应稍强于雄性小鼠；在LPS 的刺激下，雌雄BXSB小鼠的骨髓B 细胞系细胞具有相似的能力产生IgM类型的抗ssDNA和dsDNA 抗体，但不产生IgG类型的抗DNA 抗体。未受 LPS刺激的骨髓B细胞系细胞几乎不产生任何类型的抗DNA抗体。提示狼疮性BXSB 小鼠的B细胞分化发育的中枢免疫器官骨髓中，对DNA自身抗原反应的B 细胞没有被删除，可能是产生抗DNA抗体的内因所在。因此，骨髓B细胞系细胞只有进入外周免疫器官，接受自身抗原的刺激并在T 细胞的协助下才能产生IgM类型的抗DNA抗体或向产生 IgG类型抗DNA抗体转换。
地塞米松是淋巴细胞凋亡的诱导剂，但是从雌雄BXSB小鼠骨髓来源的B细胞系细胞均对地塞米松的凋亡诱导作用不敏感，也提示Yaa 基因对凋亡的诱导过程无影响。至于雌雄BXSB小鼠骨髓B细胞系细胞对地塞米松的凋亡诱导作用不敏感，而正常小鼠的胸腺细胞对地塞米松的凋亡诱导作用敏感的原因不清。
, 百拇医药
实验表明，Yaa基因的活性表达有时空性，它在BXSB 小鼠骨髓内 B细胞系的分化发育过程中不发挥作用，但对外周免疫器官的成熟B细胞发挥效应，通过改变 B细胞的表型和功能而促进SLE 的发生与发展。今后若将雌雄BXSB小鼠骨髓的B细胞系细胞培养分离后，分别转移给组织相容性且受射线照射过的正常小鼠受体，以研究小鼠受体的发病有无或程度，可进一步分析Yaa基因活性的表达与B细胞在致病中的作用的相互关系。
基金项目：高等院校博士点专项科研基金资助([1999]26)。
参考文献
1，Blossom S, Gibert KM. Antibody production in autoimmune BXSB mice. I. CD40 ligand-expressing B cells need fewer signals for polyclonal antibody synthesis[J]. Clin Exp Immunol, 1999,118:147-153
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2，Dorshkind R, Landreth KS. Use of long term bone culture and cloned stromal cell lines to grow B cell lineage cells. In: Immunology Methods mannual,edited by Ivan Lefkovits[M]. Volume 2.Inc San Diego, Califonia： Academic Press, 1997. 889-900
3，徐志伟,邓鸿业,丁桂凤.狼疮性BXSB小鼠抗DNA抗体水平的动态变化[J].免疫学杂志，2000, 16:13-15
(2000-03-30收稿), http://www.100md.com