方法学比较实验的设计及对两种白蛋白测定法的比较
作者：郭健 谢洁红 赵海舰
单位：卫生部北京医院 卫生部临床检验中心 100730
关键词：白蛋白类；溴甲酚绿；溴甲酚紫
中华检验医学杂志000607 【摘要】 目的 分析溴甲酚绿(BCG)法和溴甲酚紫(BCP)法进行血清样本白蛋白(ALB)测定时的偏倚。 方法 依据美国国家临床实验室标准协会EP9-A文件，每天取临床样本8份，分别用两种方法测定样本白蛋白含量，共测定5 d，记录检验结果，去除离散点，计算线性方程和相关系数，进行偏倚估计。结果 在进行患者新鲜血清样本白蛋白测定时，BCG法和BCP法测定结果的预期相对偏倚在ALB浓度=50 g/L时为1.8%，白蛋白=40 g/L时为5.5%，白蛋白=30 g/L时为11.6%；在测定质控品白蛋白时，两种方法测定结果的相对偏倚可达36%。结论 BCG和BCP方法在测定血清样本白蛋白时，测定结果的相对偏倚随白蛋白浓度降低而增加；在测定质控品时，其相对偏倚随产品不同而不同，最大可达36%。
, 百拇医药
Design of method comparison study and bias estimation for albumin assays
GUO Jian XIE Jiehong ZHAO Haijian
(National Center for Clinical Laboratory, Beijing Hospital, Beijing 100730, China)
【Abstract】 Objective It describes procedures for designing an analyzing a method-comparison experiment for serum albumin(ALB) assay and determining the relative bias between two methods using split patient samples.Method According to the procedure described by the NCCL approved guideline: method comparison and bias estimation using patient samples; 40 patient samples were analyzed in 5 operating days, analyze each patient sample in duplicate using both BCG and BCP method. The duplicates were assessed for each method within the same run. The coefficient of correlation was calculated as well as the bia between the methods.Results In the patient′s serum sample, the bias between BCG and BCP methods were 1.8% at 50g/L or 5.5% at 40 g/L or 11.6% at 30 g/L for albumin. In the commercial quality control serum products, the bias between the two methods varied up to 36%.Conclusion In determination of the patient′s ALB, the bias between BCG and BCP goes up when the concentration of ALB is decreased. But the bias between the two methods varies up to 36% when the quality control serum is determined.
, 百拇医药
【Key words】 Albumins; Bromcresol green; Bromcresol purple
根据对全国室间质评资料的分析，我国临床实验室使用的白蛋白测定商品试剂中所含的染料主要为溴甲酚绿(BCG)和溴甲酚紫(BCP)，方法学的差异对临床样本和质控品的影响不同。我们依据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)批准的《用患者样本进行方法学对比及偏差评估EP-9-A指南文件》(Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline, EP9-A)，对上述两种方法测定患者样本的结果和测定质控血清的结果进行了分析，以系统地对两种方法进行比较及偏倚评估。同时，介绍一种进行方法学比较的新途径。
材料和方法
1.仪器：日立7170A(日本)及贝克曼CX9ALX(美国)全自动生化分析仪。
, 百拇医药
2.白蛋白试剂及校准品：罗氏白蛋白BCG试剂，批号69937401；贝克曼白蛋白BCP试剂，批号M811232；校准品：CFAS, 批号：19560405；贝克曼多项定标液，批号：M808080。
3.临床样本：北京医院检验科临床样本。
4.质控品：不同来源和批号的质控血清分别为贝克曼公司、宝灵曼公司、豪迈公司(德)、北京凯泰汇龙公司、北京九强公司、美国纽约州室间质评用质控品、Bio-Rad公司及Dade公司。
5.测定及分析方法[1]：(1)白蛋白测定的溴甲酚绿法(X)采用罗氏试剂在日立仪器上测定；溴甲酚紫法(Y)采用贝克曼试剂在贝克曼仪器上测定。(2)每天选取8份临床病人样本，分别用两种方法按顺序1→8进行样本测定，再按相反顺序8→1重复测定。(3)记录测定结果(Xij和Yij)，计算每个样本测定结果的均值(Xi和Yi)、样本重复测定值间差值的绝对值(Dxi和Dyi)及两种方法测定结果均值间的差值(Yi-Xi)。(4)以Yi对Xi作散点图。(5)以(Yi-Xi)对Xi作偏差图。(6)目测离群点。计算：计算样本重复测定值间差值(Dxi和Dyi)的平均数。计算两种方法测定结果均值间差值(Yi-Xi)的平均数。判断：超出上述平均数4倍时，检验结果视为无效。
, 百拇医药
结果
1.部分病人样本检验结果见表1，Yi对Xi均值散点图见图1，偏差图见图2。
2.由于第31号样本重复测定值间的差值(-9.4)和两种方法测定结果均值间的差值(-14.2)皆大于4倍的相应平均值(-0.41及-2.7)，因此，31号样本的结果为无效结果。
3.排除离群点后，计算两种方法测定病人血清样本ALB浓度结果的线性回归方程为：Y=1.13X-7.4，相关系数r2为0.989。
图1 Yi-Xi均值散点图
图2 (Yi-Xi)-Xi偏倚图
, http://www.100md.com
表1 病人样本检验结果 样品
号
贝克曼(Y)(g/L)
日立(X)(g/L)
Yi-Xi
结果
1(Y1)
结果
2(Y2)
均值
(Yi)
DYi
结果
, http://www.100md.com
1(X1)
结果
2(X2)
均值
(Xi)
DXi
1
25
25
25
0
28.3
28.1
, 百拇医药
28.2
0.2
-3.2
2
46
47
46.5
1
47.5
47.4
47.5
0.1
-1
, http://www.100md.com
3
36
36
36
0
38.4
38.1
38.3
0.2
-2.3
4
39
40
, 百拇医药 39.5
1
41.3
40.8
41.1
0.5
-0.6
31
17
17
17
0
35.9
, http://www.100md.com
26.5
31.2
9.4
-14.2
37
38
38
38
0
38.6
38.9
38.7
, 百拇医药
0.3
-0.7
38
43
43
43
0
45
44.9
44.9
0.1
-1.9
39
, http://www.100md.com 35
35
35
0
36.9
37
36.9
0.1
-1.9
40
44
45
44.5
1
, 百拇医药
44.8
45.3
45
0.5
-0.5
平均数
0.37
0.41
-2.7
注：表内部分结果已省略 4.根据上述线性方程，对使用BCP法测定病人血清ALB与BCG法测定的结果进行预期偏倚估计，结果见表2。
表2 BCP与BCG法测定血清ALB时结果的预期偏倚估计 BPG法(g/L)
, 百拇医药
BCP法(g/L)
预期偏倚(g/L)
相对偏倚(%)
30
26.5
-3.5
11.6
40
37.8
-2.2
5.5
50
49.1
, http://www.100md.com
-0.9
1.8
5.使用BCG和BCP法测定不同来源及批号质控品的结果见表3。
表3 BCG和BCP法测定血清白蛋白质控品的结果 质控品
编号
批号
测定结果(g/L)
偏倚
(g/L)
相对偏倚
(%)
BCG法
, 百拇医药
BCP法
1
M812001
29.3
27
-2.3
7.8
M812002
34.6
32
-2.6
7.5
2
, http://www.100md.com
185259
27.7
25
-2.7
9.7
98032
32.4
31
-1.4
4.3
3
98061
33.6
, 百拇医药
31.5
-2.1
6.3
4
99015
29.7
19
-10.7
36.0
99012
47.9
35
-12.9
, 百拇医药
26.9
5
99023
29.9
29.5
-0.4
1.3
99021
42.9
45
2.1
5.1
6
, 百拇医药
C78
36.4
33
-3.4
6.6
C77
47.7
47
-0.7
1.5
7
977135
26.6
, http://www.100md.com
25
-1.6
6.0
977023
47.6
48.5
0.9
1.9
讨论
1.我们依据NCCLS的标准化文件EP-9A对测定血清ALB的两种方法(BCG和BCP)进行了比较。EP-9文件为临床实验室设备的使用者及生产厂家提供了对评价测定同一被测物的两种方法之间偏倚的实验设计。对于使用者，评价的目的在于确定两种方法在允许范围内能否得到相同的结果。在临床实验室中，经常会进行方法学评价的实验，EP-9A为临床实验室工作者提供了采用患者样本进行方法学比较的标准化途径。
, 百拇医药
2.根据EP-9A文件，比较实验至少应有40例样本，排除离群点数不得多于1。当r2≤0.95时，应增加测定样本量。
3.本试验结果表明，使用BCG和BCP方法测定病人血清样本ALB浓度时，随ALB浓度下降，两种方法测定结果的预期偏倚增加。ALB浓度为30～50 g/L范围内，两种方法的预期偏倚≤12%，BCP法的测定结果低于BCG法的测定结果。
4.在测定质控品ALB浓度时，BCG和BCP方法间存在较大的差异，这种差异随质控品的生产厂家不同、批号不同而不同，两种方法测定结果的预期相对偏倚可达30%以上。因此，在使用质控品评价或监控方法准确性(如进行室间质评)时，应选择适当的产品。在使用定值质控品评价方法准确性时，应考虑测定原理对测定结果的影响。
参考文献
1，National Committee for Clinical Laboratory Standards. Method comparison and bias estimation using patient samples; approved guideline, EP9-A, pennsylvania. NCCLS, 1986.1-14.
(收稿日期：2000-03-23), http://www.100md.com
单位：卫生部北京医院 卫生部临床检验中心 100730
关键词：白蛋白类；溴甲酚绿；溴甲酚紫
中华检验医学杂志000607 【摘要】 目的 分析溴甲酚绿(BCG)法和溴甲酚紫(BCP)法进行血清样本白蛋白(ALB)测定时的偏倚。 方法 依据美国国家临床实验室标准协会EP9-A文件，每天取临床样本8份，分别用两种方法测定样本白蛋白含量，共测定5 d，记录检验结果，去除离散点，计算线性方程和相关系数，进行偏倚估计。结果 在进行患者新鲜血清样本白蛋白测定时，BCG法和BCP法测定结果的预期相对偏倚在ALB浓度=50 g/L时为1.8%，白蛋白=40 g/L时为5.5%，白蛋白=30 g/L时为11.6%；在测定质控品白蛋白时，两种方法测定结果的相对偏倚可达36%。结论 BCG和BCP方法在测定血清样本白蛋白时，测定结果的相对偏倚随白蛋白浓度降低而增加；在测定质控品时，其相对偏倚随产品不同而不同，最大可达36%。
, 百拇医药
Design of method comparison study and bias estimation for albumin assays
GUO Jian XIE Jiehong ZHAO Haijian
(National Center for Clinical Laboratory, Beijing Hospital, Beijing 100730, China)
【Abstract】 Objective It describes procedures for designing an analyzing a method-comparison experiment for serum albumin(ALB) assay and determining the relative bias between two methods using split patient samples.Method According to the procedure described by the NCCL approved guideline: method comparison and bias estimation using patient samples; 40 patient samples were analyzed in 5 operating days, analyze each patient sample in duplicate using both BCG and BCP method. The duplicates were assessed for each method within the same run. The coefficient of correlation was calculated as well as the bia between the methods.Results In the patient′s serum sample, the bias between BCG and BCP methods were 1.8% at 50g/L or 5.5% at 40 g/L or 11.6% at 30 g/L for albumin. In the commercial quality control serum products, the bias between the two methods varied up to 36%.Conclusion In determination of the patient′s ALB, the bias between BCG and BCP goes up when the concentration of ALB is decreased. But the bias between the two methods varies up to 36% when the quality control serum is determined.
, 百拇医药
【Key words】 Albumins; Bromcresol green; Bromcresol purple
根据对全国室间质评资料的分析，我国临床实验室使用的白蛋白测定商品试剂中所含的染料主要为溴甲酚绿(BCG)和溴甲酚紫(BCP)，方法学的差异对临床样本和质控品的影响不同。我们依据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)批准的《用患者样本进行方法学对比及偏差评估EP-9-A指南文件》(Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline, EP9-A)，对上述两种方法测定患者样本的结果和测定质控血清的结果进行了分析，以系统地对两种方法进行比较及偏倚评估。同时，介绍一种进行方法学比较的新途径。
材料和方法
1.仪器：日立7170A(日本)及贝克曼CX9ALX(美国)全自动生化分析仪。
, 百拇医药
2.白蛋白试剂及校准品：罗氏白蛋白BCG试剂，批号69937401；贝克曼白蛋白BCP试剂，批号M811232；校准品：CFAS, 批号：19560405；贝克曼多项定标液，批号：M808080。
3.临床样本：北京医院检验科临床样本。
4.质控品：不同来源和批号的质控血清分别为贝克曼公司、宝灵曼公司、豪迈公司(德)、北京凯泰汇龙公司、北京九强公司、美国纽约州室间质评用质控品、Bio-Rad公司及Dade公司。
5.测定及分析方法[1]：(1)白蛋白测定的溴甲酚绿法(X)采用罗氏试剂在日立仪器上测定；溴甲酚紫法(Y)采用贝克曼试剂在贝克曼仪器上测定。(2)每天选取8份临床病人样本，分别用两种方法按顺序1→8进行样本测定，再按相反顺序8→1重复测定。(3)记录测定结果(Xij和Yij)，计算每个样本测定结果的均值(Xi和Yi)、样本重复测定值间差值的绝对值(Dxi和Dyi)及两种方法测定结果均值间的差值(Yi-Xi)。(4)以Yi对Xi作散点图。(5)以(Yi-Xi)对Xi作偏差图。(6)目测离群点。计算：计算样本重复测定值间差值(Dxi和Dyi)的平均数。计算两种方法测定结果均值间差值(Yi-Xi)的平均数。判断：超出上述平均数4倍时，检验结果视为无效。
, 百拇医药
结果
1.部分病人样本检验结果见表1，Yi对Xi均值散点图见图1，偏差图见图2。
2.由于第31号样本重复测定值间的差值(-9.4)和两种方法测定结果均值间的差值(-14.2)皆大于4倍的相应平均值(-0.41及-2.7)，因此，31号样本的结果为无效结果。
3.排除离群点后，计算两种方法测定病人血清样本ALB浓度结果的线性回归方程为：Y=1.13X-7.4，相关系数r2为0.989。
图1 Yi-Xi均值散点图
图2 (Yi-Xi)-Xi偏倚图
, http://www.100md.com
表1 病人样本检验结果 样品
号
贝克曼(Y)(g/L)
日立(X)(g/L)
Yi-Xi
结果
1(Y1)
结果
2(Y2)
均值
(Yi)
DYi
结果
, http://www.100md.com
1(X1)
结果
2(X2)
均值
(Xi)
DXi
1
25
25
25
0
28.3
28.1
, 百拇医药
28.2
0.2
-3.2
2
46
47
46.5
1
47.5
47.4
47.5
0.1
-1
, http://www.100md.com
3
36
36
36
0
38.4
38.1
38.3
0.2
-2.3
4
39
40
, 百拇医药 39.5
1
41.3
40.8
41.1
0.5
-0.6
31
17
17
17
0
35.9
, http://www.100md.com
26.5
31.2
9.4
-14.2
37
38
38
38
0
38.6
38.9
38.7
, 百拇医药
0.3
-0.7
38
43
43
43
0
45
44.9
44.9
0.1
-1.9
39
, http://www.100md.com 35
35
35
0
36.9
37
36.9
0.1
-1.9
40
44
45
44.5
1
, 百拇医药
44.8
45.3
45
0.5
-0.5
平均数
0.37
0.41
-2.7
注：表内部分结果已省略 4.根据上述线性方程，对使用BCP法测定病人血清ALB与BCG法测定的结果进行预期偏倚估计，结果见表2。
表2 BCP与BCG法测定血清ALB时结果的预期偏倚估计 BPG法(g/L)
, 百拇医药
BCP法(g/L)
预期偏倚(g/L)
相对偏倚(%)
30
26.5
-3.5
11.6
40
37.8
-2.2
5.5
50
49.1
, http://www.100md.com
-0.9
1.8
5.使用BCG和BCP法测定不同来源及批号质控品的结果见表3。
表3 BCG和BCP法测定血清白蛋白质控品的结果 质控品
编号
批号
测定结果(g/L)
偏倚
(g/L)
相对偏倚
(%)
BCG法
, 百拇医药
BCP法
1
M812001
29.3
27
-2.3
7.8
M812002
34.6
32
-2.6
7.5
2
, http://www.100md.com
185259
27.7
25
-2.7
9.7
98032
32.4
31
-1.4
4.3
3
98061
33.6
, 百拇医药
31.5
-2.1
6.3
4
99015
29.7
19
-10.7
36.0
99012
47.9
35
-12.9
, 百拇医药
26.9
5
99023
29.9
29.5
-0.4
1.3
99021
42.9
45
2.1
5.1
6
, 百拇医药
C78
36.4
33
-3.4
6.6
C77
47.7
47
-0.7
1.5
7
977135
26.6
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25
-1.6
6.0
977023
47.6
48.5
0.9
1.9
讨论
1.我们依据NCCLS的标准化文件EP-9A对测定血清ALB的两种方法(BCG和BCP)进行了比较。EP-9文件为临床实验室设备的使用者及生产厂家提供了对评价测定同一被测物的两种方法之间偏倚的实验设计。对于使用者，评价的目的在于确定两种方法在允许范围内能否得到相同的结果。在临床实验室中，经常会进行方法学评价的实验，EP-9A为临床实验室工作者提供了采用患者样本进行方法学比较的标准化途径。
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2.根据EP-9A文件，比较实验至少应有40例样本，排除离群点数不得多于1。当r2≤0.95时，应增加测定样本量。
3.本试验结果表明，使用BCG和BCP方法测定病人血清样本ALB浓度时，随ALB浓度下降，两种方法测定结果的预期偏倚增加。ALB浓度为30～50 g/L范围内，两种方法的预期偏倚≤12%，BCP法的测定结果低于BCG法的测定结果。
4.在测定质控品ALB浓度时，BCG和BCP方法间存在较大的差异，这种差异随质控品的生产厂家不同、批号不同而不同，两种方法测定结果的预期相对偏倚可达30%以上。因此，在使用质控品评价或监控方法准确性(如进行室间质评)时，应选择适当的产品。在使用定值质控品评价方法准确性时，应考虑测定原理对测定结果的影响。
参考文献
1，National Committee for Clinical Laboratory Standards. Method comparison and bias estimation using patient samples; approved guideline, EP9-A, pennsylvania. NCCLS, 1986.1-14.
(收稿日期：2000-03-23), http://www.100md.com