小动物眼球冰冻切片技巧
作者：郑湖玲
单位：510060 广州，中山医科大学中山眼科中心病理室
关键词：
中华病理学杂志980226 小动物眼球虽小，同样有一般眼球的结构，且晶体所占眼球体积较大(占80%以上)，质坚硬，球内有前房、后房及玻璃体等空腔，整个眼球结构密度不同，根本无法进行完整眼球冰冻切片，如果把小眼球切开取小部位组织切片，因眼球壁薄，切开的眼球容易变形，眼球缺乏完整结构，不容易观察判断、分析，所以，本人经过多次实验，认为影响小眼球整个冰冻切片的关键是晶体，将晶体取出(可另外切片)，用OCT包埋剂填充眼球空腔，以改善眼球密度，从而达到能够把小眼球(不含晶体)进行完整冰冻切片的目的，现将方法介绍如下。
一、材料与方法
Tissne-TEK Ⅱ冰冻切片机
1.将持物器放于冷冻切片机的冷冻棒上，将摘出的新鲜眼球以眼球水平方向放于持物器上，滴加小量OCT包埋剂，使眼球和OCT液凝结于持物器上。
2.用锐利刀片于角巩缘处将眼球壁切开一窗口，用小针把晶体轻轻从窗口挑出，将晶体按前后囊方向平放于另一持物器上，并加小量OCT液，以备切片，如不观察晶体，可以丢弃。
3.将OCT液滴进眼球腔里并包围整个眼球，并用小针把眼球腔内的气泡挑出，然后把压力提出器放于OCT包埋的眼球上面，让其凝固，约5分钟。
4.把固定有眼球的持物器放于切片机的“Chuck”标本匣里，拧紧螺旋，牢固持物器。
5.将自动调节厚度器解开，用左手转动螺盘控制厚度，右手转动手轮，使标本慢慢移向刀锋至两者接触，然后修切标本表面至见到整个眼球切面。
6.将自动调节厚度器锁上，并调好合适厚度(刻度)，转动手轮切片，每切一张，用毛笔轻轻拉平切片于切片刀上，并用载玻片轻贴切片。如果切片机配有切片夹板，可按说明书所述调好与刀口的角度，可得平整连续切片。
7.把贴有切片的载玻片放入甲醇固定，并进行HE染色或组织化学、免疫组化或分子生物学的研究(图1，2)。
二、结果和讨论
1.由于小动物(如小鼠、大白鼠、豚鼠)眼球晶体占眼球体积约80%以上，晶体纤维排列紧密，经冰冻后更坚硬，切片时形成碎片，并附贴于眼球上，妨碍眼球的观察，所以，必须先取去晶体。
2.摘取新鲜眼球时立即剖开眼球取出晶体，势必使眼球凹陷变形，如果固定后剖开眼球取出晶体，虽眼球可保持现状，但经固定的眼球冰冻切片，染色容易脱片，整个眼球固定需时较长，对免疫组化染色部分抗原的检测有一定影响，故先不固定为佳。
3.本法的技巧在于把新鲜眼球冰冻后，取出晶体，以保持眼球不变形，用OCT包埋剂填满眼球空腔，再冰冻，使眼球和OCT液凝固以改善整个眼球的密度，这样切出的无晶体眼球片平整，均匀，有利于进行各种不同染色，开展各种实验研究。
图1 角膜显微照相 HE×20 图2 豚鼠眼球后极部视网膜 HE×50 (收稿：1997-08-04 修回：1997-11-26), 百拇医药
单位：510060 广州，中山医科大学中山眼科中心病理室
关键词：
中华病理学杂志980226 小动物眼球虽小，同样有一般眼球的结构，且晶体所占眼球体积较大(占80%以上)，质坚硬，球内有前房、后房及玻璃体等空腔，整个眼球结构密度不同，根本无法进行完整眼球冰冻切片，如果把小眼球切开取小部位组织切片，因眼球壁薄，切开的眼球容易变形，眼球缺乏完整结构，不容易观察判断、分析，所以，本人经过多次实验，认为影响小眼球整个冰冻切片的关键是晶体，将晶体取出(可另外切片)，用OCT包埋剂填充眼球空腔，以改善眼球密度，从而达到能够把小眼球(不含晶体)进行完整冰冻切片的目的，现将方法介绍如下。
一、材料与方法
Tissne-TEK Ⅱ冰冻切片机
1.将持物器放于冷冻切片机的冷冻棒上，将摘出的新鲜眼球以眼球水平方向放于持物器上，滴加小量OCT包埋剂，使眼球和OCT液凝结于持物器上。
2.用锐利刀片于角巩缘处将眼球壁切开一窗口，用小针把晶体轻轻从窗口挑出，将晶体按前后囊方向平放于另一持物器上，并加小量OCT液，以备切片，如不观察晶体，可以丢弃。
3.将OCT液滴进眼球腔里并包围整个眼球，并用小针把眼球腔内的气泡挑出，然后把压力提出器放于OCT包埋的眼球上面，让其凝固，约5分钟。
4.把固定有眼球的持物器放于切片机的“Chuck”标本匣里，拧紧螺旋，牢固持物器。
5.将自动调节厚度器解开，用左手转动螺盘控制厚度，右手转动手轮，使标本慢慢移向刀锋至两者接触，然后修切标本表面至见到整个眼球切面。
6.将自动调节厚度器锁上，并调好合适厚度(刻度)，转动手轮切片，每切一张，用毛笔轻轻拉平切片于切片刀上，并用载玻片轻贴切片。如果切片机配有切片夹板，可按说明书所述调好与刀口的角度，可得平整连续切片。
7.把贴有切片的载玻片放入甲醇固定，并进行HE染色或组织化学、免疫组化或分子生物学的研究(图1，2)。
二、结果和讨论
1.由于小动物(如小鼠、大白鼠、豚鼠)眼球晶体占眼球体积约80%以上，晶体纤维排列紧密，经冰冻后更坚硬，切片时形成碎片，并附贴于眼球上，妨碍眼球的观察，所以，必须先取去晶体。
2.摘取新鲜眼球时立即剖开眼球取出晶体，势必使眼球凹陷变形，如果固定后剖开眼球取出晶体，虽眼球可保持现状，但经固定的眼球冰冻切片，染色容易脱片，整个眼球固定需时较长，对免疫组化染色部分抗原的检测有一定影响，故先不固定为佳。
3.本法的技巧在于把新鲜眼球冰冻后，取出晶体，以保持眼球不变形，用OCT包埋剂填满眼球空腔，再冰冻，使眼球和OCT液凝固以改善整个眼球的密度，这样切出的无晶体眼球片平整，均匀，有利于进行各种不同染色，开展各种实验研究。
图1 角膜显微照相 HE×20 图2 豚鼠眼球后极部视网膜 HE×50 (收稿：1997-08-04 修回：1997-11-26), 百拇医药