粒单核系和粒细胞集落刺激因子在人胎盘细胞的确定
作者：刘桂兰 孙敏 张莹 虞有智 回允中
单位：
关键词：
一 一、材料和方法
1.材料来源和制备：胎盘标本来源于我院产科妊娠37～40周，健康孕妇，足月顺产分娩的正常胎盘组织10份。胎盘娩出后，立即送病理科冰冻。将标本在低温恒冷切片机中做成10 μm厚的切片，贴附于APES片上，室温干燥30分钟，95%乙醇固定15分钟，放4℃冰箱内备用。
2.免疫组织化学染色(APAAP法)：细胞的检测：抗粒单核细胞集落刺激因子(anti-GM-CSF)单克隆抗体和碱性磷酸酶(羊抗鼠IgG)桥联酶标试剂盒，购自北京邦定公司；抗粒细胞集落刺激因子(anti-G-CSF)单克隆抗体，购自协和医院诊断试剂厂。(1)将制备好的标本从冰箱内取出，用0.05 mol/L Tris缓冲液37℃温箱内孵育10分钟。(2)加一抗50 μl，anti-G-CSF单克隆抗体1∶100稀释，anti-G-CSF单克隆抗体1∶100稀释，湿盒内4℃冰箱过液。(3)复温10分钟，Tris缓冲液洗3遍。(4)加二抗50 μl，羊抗鼠IgG室温下湿盒内30分钟，Tris缓冲液洗3遍。(5)加碱性酸酶底物显色，取20～40 μl A、B两种混合的底物液加于标本上，湿盒内显色15分钟，低倍显微镜下观察，当细胞浆内出现清晰红色标记物时用自来水冲洗中止显色。(6)加苏木红1滴复染2分钟，自来水冲洗，用甘油明胶封片。
, 百拇医药
阴性对照，用PBS代替一抗，其他条件和方法相同。
光学显微镜、高倍镜下观察，细胞核呈蓝色，细胞表面有红色标记物的细胞为阳性细胞，无红色标记物的细胞为阴性细胞。
二、结果
我们应用anti-GM-CSF和anti-G-CSF两种单克隆抗体，进行APAAP法，分别检测了妊娠37+3～40+1周健康孕妇分娩的正常胎盘组织10份。同时设计了阴性对照，即在实验中加PBS代替一抗，测得10份胎盘组织标本，在胎盘滋养层的郎罕细胞和合体细胞与anti-GM-CSF和anti-G-CSF两种单克隆抗体呈阳性反应(图1，2)。用PBS代替一抗者呈阴性反应。
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图1 胎盘标本加anti-GM-CSF单克隆抗体，在胎盘滋养层的郎罕细胞和合体细胞呈阳性反应，成纤维细胞及其他细胞无阳性表达 ×400 图2 胎盘标本加anti-G-CSF单克隆抗体，在胎盘滋养层的郎罕细胞和合体细胞呈阳性反应，成纤维细胞及其他细胞均呈阴性反应 ×400 (图1，2均为APAAP法染色)
三、讨论
Laver[1]于1990年用生物学方法分别测得正常足月儿脐血浆中GM-CSF为19.91±5.2 U/ml，而正常人血浆中未测出，G-CSF比正常人高16倍左右。我们用G-CSF ELISA检测试剂盒测定的50例阳性脐血清(浆)中G-CSF含量比正常人血清中G-CSF含量高10倍以上[2]。脐血中如此高的造血因子究竟来源于何处，由什么细胞产生，国外报道主要来源于胎盘[3]。为了确定胎儿在母体内由什么部位及何种细胞产生的造血因子供给胎儿血，我们用anti-GM-CSF和anti-G-CSF两种单克隆抗体，用APAAP法，测定了10份胎盘组织标本，在胎盘滋养层的郎罕细胞和合体细胞与anti-GM-CSF和anti-G-CSF两种单克隆抗体呈明显阳性反应，阴性对照呈阴性反应。这一结果与Saitos等[4]新近报告的结果比较接近，证明胎盘滋养层的郎罕细胞和合体细胞可能是产生脐血中GM-CSF和G-CSF的主要细胞，表明胎儿在母体期间GM-CSF和G-CSF的来源在胎盘。这一发现有助于认识人类的造血过程和新生儿的造血特点。
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参考文献
1 Laver J, Duncan E, Abboud M, et al. High levels of granuiocyte and granuiocyte macrophage colony-stimuiating factors in cord blood of normal full-term. J Pediatr，1990,116：627.
2 刘桂兰，殷慧君，蒋佩华，等.酶联免疫吸附实验检测正常足月儿脐血中粒细胞集落刺激因子含量.中华血液学杂志，1995，16：615.
3 Ishii E, Masuyama T, Yamaguchi H, et al. Production and expression of granulocyte and macrophage-colony-stimulating factors in newborns: their roles in leukcytosis at birth. Acta haematol, 1995,94：23-31.
4 Saitos. Expression of granulocyte colony-stimulating factor and its receptor at the fetoma-termal interface in murine and human pregnancy. Growth Factors，1994，101：135-143.
(收稿：1997-01-11 修回：1997-12-15), 百拇医药
单位：
关键词：
一 一、材料和方法
1.材料来源和制备：胎盘标本来源于我院产科妊娠37～40周，健康孕妇，足月顺产分娩的正常胎盘组织10份。胎盘娩出后，立即送病理科冰冻。将标本在低温恒冷切片机中做成10 μm厚的切片，贴附于APES片上，室温干燥30分钟，95%乙醇固定15分钟，放4℃冰箱内备用。
2.免疫组织化学染色(APAAP法)：细胞的检测：抗粒单核细胞集落刺激因子(anti-GM-CSF)单克隆抗体和碱性磷酸酶(羊抗鼠IgG)桥联酶标试剂盒，购自北京邦定公司；抗粒细胞集落刺激因子(anti-G-CSF)单克隆抗体，购自协和医院诊断试剂厂。(1)将制备好的标本从冰箱内取出，用0.05 mol/L Tris缓冲液37℃温箱内孵育10分钟。(2)加一抗50 μl，anti-G-CSF单克隆抗体1∶100稀释，anti-G-CSF单克隆抗体1∶100稀释，湿盒内4℃冰箱过液。(3)复温10分钟，Tris缓冲液洗3遍。(4)加二抗50 μl，羊抗鼠IgG室温下湿盒内30分钟，Tris缓冲液洗3遍。(5)加碱性酸酶底物显色，取20～40 μl A、B两种混合的底物液加于标本上，湿盒内显色15分钟，低倍显微镜下观察，当细胞浆内出现清晰红色标记物时用自来水冲洗中止显色。(6)加苏木红1滴复染2分钟，自来水冲洗，用甘油明胶封片。
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阴性对照，用PBS代替一抗，其他条件和方法相同。
光学显微镜、高倍镜下观察，细胞核呈蓝色，细胞表面有红色标记物的细胞为阳性细胞，无红色标记物的细胞为阴性细胞。
二、结果
我们应用anti-GM-CSF和anti-G-CSF两种单克隆抗体，进行APAAP法，分别检测了妊娠37+3～40+1周健康孕妇分娩的正常胎盘组织10份。同时设计了阴性对照，即在实验中加PBS代替一抗，测得10份胎盘组织标本，在胎盘滋养层的郎罕细胞和合体细胞与anti-GM-CSF和anti-G-CSF两种单克隆抗体呈阳性反应(图1，2)。用PBS代替一抗者呈阴性反应。
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图1 胎盘标本加anti-GM-CSF单克隆抗体，在胎盘滋养层的郎罕细胞和合体细胞呈阳性反应，成纤维细胞及其他细胞无阳性表达 ×400 图2 胎盘标本加anti-G-CSF单克隆抗体，在胎盘滋养层的郎罕细胞和合体细胞呈阳性反应，成纤维细胞及其他细胞均呈阴性反应 ×400 (图1，2均为APAAP法染色)
三、讨论
Laver[1]于1990年用生物学方法分别测得正常足月儿脐血浆中GM-CSF为19.91±5.2 U/ml，而正常人血浆中未测出，G-CSF比正常人高16倍左右。我们用G-CSF ELISA检测试剂盒测定的50例阳性脐血清(浆)中G-CSF含量比正常人血清中G-CSF含量高10倍以上[2]。脐血中如此高的造血因子究竟来源于何处，由什么细胞产生，国外报道主要来源于胎盘[3]。为了确定胎儿在母体内由什么部位及何种细胞产生的造血因子供给胎儿血，我们用anti-GM-CSF和anti-G-CSF两种单克隆抗体，用APAAP法，测定了10份胎盘组织标本，在胎盘滋养层的郎罕细胞和合体细胞与anti-GM-CSF和anti-G-CSF两种单克隆抗体呈明显阳性反应，阴性对照呈阴性反应。这一结果与Saitos等[4]新近报告的结果比较接近，证明胎盘滋养层的郎罕细胞和合体细胞可能是产生脐血中GM-CSF和G-CSF的主要细胞，表明胎儿在母体期间GM-CSF和G-CSF的来源在胎盘。这一发现有助于认识人类的造血过程和新生儿的造血特点。
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参考文献
1 Laver J, Duncan E, Abboud M, et al. High levels of granuiocyte and granuiocyte macrophage colony-stimuiating factors in cord blood of normal full-term. J Pediatr，1990,116：627.
2 刘桂兰，殷慧君，蒋佩华，等.酶联免疫吸附实验检测正常足月儿脐血中粒细胞集落刺激因子含量.中华血液学杂志，1995，16：615.
3 Ishii E, Masuyama T, Yamaguchi H, et al. Production and expression of granulocyte and macrophage-colony-stimulating factors in newborns: their roles in leukcytosis at birth. Acta haematol, 1995,94：23-31.
4 Saitos. Expression of granulocyte colony-stimulating factor and its receptor at the fetoma-termal interface in murine and human pregnancy. Growth Factors，1994，101：135-143.
(收稿：1997-01-11 修回：1997-12-15), 百拇医药