T细胞性淋巴瘤组织CD56的检测及其与EB病毒的关系
作者：江庆萍 周慕珩 林汉良 侯景辉
单位：
关键词：淋巴瘤；T细胞；疱疹病毒4型；人；免疫组织化学；原位杂交
中华病理学杂志980406 【摘要】 目的 探讨T细胞性淋巴瘤(TCL)中CD56的表达情况及CD56阳性表达同爱波斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr Virus ,EBV)感染的关系。方法 对46例TCL进行CD56的免疫组织化学LSAB法检测及EBERs的原位杂交检测。结果 (1)46例TCL中8例CD56阳性(17.4%)，其中鼻腔、咽部和口腔阳性率最高(5/17例，29.4%)。弥漫性大细胞型淋巴瘤CD56阳性率最高(6/16例，37.5%)。(2)46例TCL中24例EBERs阳性(52.2%)。(3)8例CD56阳性病例中，4例EBERs阳性。结论 CD56的表达同TCL发生部位和类型有一定关系。CD56阳性表达与EB病毒感染未发现相关性。
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The detection of CD56 in T-cell lymphoma and its relationship with Epstein-Barr virus Jiang Qingping, Zhou Muheng, Lin Hanliang, et al. Department of Pathology, Sun Yat-Sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510089
【Abstract】 Objective To investigate the expression of CD56 and the relationship between CD56 positive expression and EBV infection in T-cell lymphoma (TCL) in Guangdong province. Methods Immunohistochemistry was used to detect CD56 and in situ hybridization was used to detect EBER in 46 cases of TCL. Results (1) 17.4% (8/46) TCL were CD56 positive. According to the site of origin, the TCL originated from the nose, pharynx and oral cavity had the highest CD56 positive rate (5/17, 29.4%). Anyhow, according to the type pattern, the diffuse large cell lymphoma had the highest CD56 positive rate (6/16, 37.5%). (2) 52.2% (24/46) of the TCl were EBER positive. (3) 4/8 cases of the CD56 positive TCl expressed EBER. Conclusion The findings suggest that the expression of CD56 in TCL was possibly related to original sites and TCL subtypes. EBV infection was not related to CD56 positive TCL in this study.
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【Key words】 Lymphoma, T-cell Herpsvirus 4, human Immunohistochemistry In situ hybridization
近年来，国外一些学者发现，EB病毒感染的T细胞性淋巴瘤(TCL)常表现出一种不同于其它TCL的特殊免疫表型CD2阳性、CD3阴性、CD56阳性，并认为TCL中EB病毒感染和CD56阳性表达有密切关系。我们采用免疫组织化学法检测CD56和原位杂交法检测EBERs，探讨TCL中CD56的表达情况及CD56阳性表达同EB病毒感染的关系。
材料与方法
1.标本来源：收集本教研室及中山医科大学附属肿瘤医院病理科1990～1997年存档TCL活检蜡块46例。包括淋巴结内13例，淋巴结外33例。在淋巴结外，鼻腔、咽部和口腔17例，胃肠8例，其它部位8例。
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2.试剂方法：(1) 免疫组织化学法：采用链菌素抗生物素蛋白-辣根过氧化物酶(LSAB)法检测CD56(Monosan公司，MON1006)，经微波预处理13分钟和一抗4℃过夜。阳性对照用已知CD56阳性的TCL。(2) 原位杂交法：探针为异硫氰酸荧光素(FITC)标记的脱氧寡核糖核酸(DAKO，Y017)。主要步骤为：0.1 mg/ml蛋白酶K于37℃消化30分钟，95%酒精脱水，滴加EBERs探针5～10 μl于37℃杂交2小时，50 μl碱性磷酸酶偶联的抗FITC(DAKO公司，K0046)37℃孵育30分钟，BCIP/NPT显色，甲基氯复染。阳性对照为已知EBERs阳性的TCL。
结果
1.组织学分型：按Working Formulation分类，淋巴母细胞型淋巴瘤(LB)6例，免疫母细胞型淋(IBL)1例，弥漫性大细胞型淋巴瘤(DL)16例，弥漫性大小细胞混合型淋巴瘤(DM)22例，小细胞型淋巴瘤(SL)2例。46例均经免疫组化染色证实为T细胞性淋巴瘤，即UCHL1阳性，L26阴性。
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图1 T细胞淋巴瘤，瘤细胞CD56阳性位于细胞膜上，呈棕黄色 LSAB法 ×100 图2 T细胞淋巴瘤，EBERs阳性，细胞核呈蓝紫色颗粒 原位杂交 ×200
2.CD56表达情况：46例TCL中8例CD56阳性。阳性信号为细胞膜显示棕黄或棕褐色颗粒(图1)。在部位上，13例淋巴结内TCL CD56均阴性，33例结外TCL中8例CD56阳性，统计学分析(χ2检验)，P<0.05。在结外，鼻腔、咽部和口腔CD56阳性率最高(5/17例，29.4%)，其次为胃肠(2/8，25%)，另有1例CD56阳性病例为纵隔TCL。在类型上，8例CD56阳性病例中，DL 6例(6/16例，37.5%)，为阳性率最高；DM、SL各1例，而LB、IBL无CD56阳性表达。
3.CD56同EBERs阳性表达情况比较：46例TCL中24例EBERs阳性(52.2%)，阳性信号为细胞核内呈紫蓝色颗粒着色(图2)。同CD56的表达情况进行比较，仅有4例TCL的CD56和EBERs共同阳性。相关性比较(P>0.05)，说明EBERs和CD56表达无相关性；差异性检验(P<0.05),说明EBERs阳性表达明显高于CD56。
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讨论
CD56是神经细胞粘附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)的一个异构体。NCAM是最早提取、鉴定和克隆的免疫球蛋白超分子家族。其仅由一个基因编码定位于11q23，至少有24个外显子组成，通过mRNA剪接产生不同异构体，分子大小取决于羧基端的长度。根据其所含2-(2，8)多聚唾液酸单位的多少，分为高唾液酸化的NCAM-H型，与低唾液酸化的NCAM-L型。高唾液酸化可形成碳水化合物屏障，减少接触介导作用，降低细胞粘附力，可能与肿瘤侵袭行为有关[1]。CD56是一种能被抗Leu-19、NKH-1单克隆抗体识别的糖蛋白，含有175 000-185 000分子量，N端连有丰富唾液酸，主要表达于人类NK细胞上及少数介导人类主要组织相容性抗原非限制性细胞作用的T淋巴细胞上，序列免疫沉淀法证明CD56同表达于神经母细胞瘤上的NCAM分子有类似的结构，提示CD56可能同神经细胞上的NCAM有类似功能，即介导细胞粘附作用[2，3]。近年来，一些国外文献报道EB病毒感染的结外TCL同CD56阳性表达有密切联系。
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本研究中，CD56阳性表达同EB病毒感染相比较，仅有4例CD56和EBERs均阳性(3例为鼻腔和鼻咽部，1例为阑尾)。经统计学分析表明TCL中CD56和EBERs表达未发现相关性，EBERs阳性率(52.2%)远高于CD56阳性率(17.4%)。Harabuchi等[4]和Tsang等[5]分别报道鼻部TCL的EB病毒感染与CD56阳性有100%相关性。至于鼻部以外TCL，EB病毒感染与CD56阳性表达的关系则意见不一。Tsang和Clain[5]报道15例鼻部以外CD56阳性TCL病例中10例EBERs阳性(66.7%)及9例TCL的CD56和EBERs均阳性(100%)。他认为不管在淋巴结外任何部位，有CD2阳性、CD3阴性、CD56阳性这样免疫表型的TCL就会表现出同EB病毒密切的关系[5]。Nakamura等[6]报道10例CD56阳性的非呼吸道TCL中，只有3例EBERs阳性(33%)，表现出EBERs阳性和CD56阳性的不一致性。并认为这是由于TCL的部位限制性(site-restricted)导致的。本研究结果显示发生于鼻部及鼻部以外的TCL的CD56阳性表达同EB病毒感染均表现出高度不一致性。其原因有待进一步探讨。另外，本研究发现TCL中CD56阳性表达可能同TCL发生部位和类型有一定关系。
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参考文献
1Cunningham A, Hemperly J, Murray A, et al. Neural cell adhesion molecule: structure, immunoglobulin-like domains, cell surface modulation, and alternative RNA splicing. Science, 1987, 236：799-806.
2Lanier LL, Testi R, Bindl J, et al. Identity of Leu-19(CD56) leukocyte differentiation antigen and neural cell adhesion molecule. J Exp Med, 1987, 169：2233-2238.
3Nitta T, Yagita H, Sato K, et al. Involvement of CD56 (NKH-1/Leu-19 antigen) as an adhesion molecule in natural killer-target cell interaction. J Exp Med, 1989, 170：1757-1761.
, 百拇医药
4Harabuchi Y, Imai S, Wakashima J, et al. Nasal T-cell lymphoma causally associated with Epstein-Barr virus clinicopathologic phenotypic, and genotypic studies. Cancer, 1996, 77：2137-2149.
5Tsang WY, Clain JK. EBV and T-cell lymphoma. Histopathology. 1994, 25：501-502.
6Nakamura S, Sasajima Y, Koshikawa T, et al. Inconsistent association of Epstein-Barr virus with CD56 (NCAM)-Positive angiocentric lymphoma occurring in sites other than the upper and lower respirary tract. Pathology, 1996, 28：111-120.
, 百拇医药
(收稿：1997-08-18 修回：1998-04-11)
参考文献
1Wharton LR. Two cases of supernumerary ovary and one of accessary ovary with a analysis of previously reported cases. Am J Obstet Gynecol, 1959, 78：1101-1119.
2Cruikshank SH, Van Drie DM. Supernumerary ovaries: update and review. Obstet Gynecol, 1982, 60：126-129.
3Printz JL, Choate JW, Townes PL, et al. The embryology of supernumerary ovaries. Obstet Gynecol, 1973, 41：246-252.
(收稿：1997-10-16 修回：1998-04-07)), 百拇医药
单位：
关键词：淋巴瘤；T细胞；疱疹病毒4型；人；免疫组织化学；原位杂交
中华病理学杂志980406 【摘要】 目的 探讨T细胞性淋巴瘤(TCL)中CD56的表达情况及CD56阳性表达同爱波斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr Virus ,EBV)感染的关系。方法 对46例TCL进行CD56的免疫组织化学LSAB法检测及EBERs的原位杂交检测。结果 (1)46例TCL中8例CD56阳性(17.4%)，其中鼻腔、咽部和口腔阳性率最高(5/17例，29.4%)。弥漫性大细胞型淋巴瘤CD56阳性率最高(6/16例，37.5%)。(2)46例TCL中24例EBERs阳性(52.2%)。(3)8例CD56阳性病例中，4例EBERs阳性。结论 CD56的表达同TCL发生部位和类型有一定关系。CD56阳性表达与EB病毒感染未发现相关性。
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The detection of CD56 in T-cell lymphoma and its relationship with Epstein-Barr virus Jiang Qingping, Zhou Muheng, Lin Hanliang, et al. Department of Pathology, Sun Yat-Sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510089
【Abstract】 Objective To investigate the expression of CD56 and the relationship between CD56 positive expression and EBV infection in T-cell lymphoma (TCL) in Guangdong province. Methods Immunohistochemistry was used to detect CD56 and in situ hybridization was used to detect EBER in 46 cases of TCL. Results (1) 17.4% (8/46) TCL were CD56 positive. According to the site of origin, the TCL originated from the nose, pharynx and oral cavity had the highest CD56 positive rate (5/17, 29.4%). Anyhow, according to the type pattern, the diffuse large cell lymphoma had the highest CD56 positive rate (6/16, 37.5%). (2) 52.2% (24/46) of the TCl were EBER positive. (3) 4/8 cases of the CD56 positive TCl expressed EBER. Conclusion The findings suggest that the expression of CD56 in TCL was possibly related to original sites and TCL subtypes. EBV infection was not related to CD56 positive TCL in this study.
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【Key words】 Lymphoma, T-cell Herpsvirus 4, human Immunohistochemistry In situ hybridization
近年来，国外一些学者发现，EB病毒感染的T细胞性淋巴瘤(TCL)常表现出一种不同于其它TCL的特殊免疫表型CD2阳性、CD3阴性、CD56阳性，并认为TCL中EB病毒感染和CD56阳性表达有密切关系。我们采用免疫组织化学法检测CD56和原位杂交法检测EBERs，探讨TCL中CD56的表达情况及CD56阳性表达同EB病毒感染的关系。
材料与方法
1.标本来源：收集本教研室及中山医科大学附属肿瘤医院病理科1990～1997年存档TCL活检蜡块46例。包括淋巴结内13例，淋巴结外33例。在淋巴结外，鼻腔、咽部和口腔17例，胃肠8例，其它部位8例。
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2.试剂方法：(1) 免疫组织化学法：采用链菌素抗生物素蛋白-辣根过氧化物酶(LSAB)法检测CD56(Monosan公司，MON1006)，经微波预处理13分钟和一抗4℃过夜。阳性对照用已知CD56阳性的TCL。(2) 原位杂交法：探针为异硫氰酸荧光素(FITC)标记的脱氧寡核糖核酸(DAKO，Y017)。主要步骤为：0.1 mg/ml蛋白酶K于37℃消化30分钟，95%酒精脱水，滴加EBERs探针5～10 μl于37℃杂交2小时，50 μl碱性磷酸酶偶联的抗FITC(DAKO公司，K0046)37℃孵育30分钟，BCIP/NPT显色，甲基氯复染。阳性对照为已知EBERs阳性的TCL。
结果
1.组织学分型：按Working Formulation分类，淋巴母细胞型淋巴瘤(LB)6例，免疫母细胞型淋(IBL)1例，弥漫性大细胞型淋巴瘤(DL)16例，弥漫性大小细胞混合型淋巴瘤(DM)22例，小细胞型淋巴瘤(SL)2例。46例均经免疫组化染色证实为T细胞性淋巴瘤，即UCHL1阳性，L26阴性。
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图1 T细胞淋巴瘤，瘤细胞CD56阳性位于细胞膜上，呈棕黄色 LSAB法 ×100 图2 T细胞淋巴瘤，EBERs阳性，细胞核呈蓝紫色颗粒 原位杂交 ×200
2.CD56表达情况：46例TCL中8例CD56阳性。阳性信号为细胞膜显示棕黄或棕褐色颗粒(图1)。在部位上，13例淋巴结内TCL CD56均阴性，33例结外TCL中8例CD56阳性，统计学分析(χ2检验)，P<0.05。在结外，鼻腔、咽部和口腔CD56阳性率最高(5/17例，29.4%)，其次为胃肠(2/8，25%)，另有1例CD56阳性病例为纵隔TCL。在类型上，8例CD56阳性病例中，DL 6例(6/16例，37.5%)，为阳性率最高；DM、SL各1例，而LB、IBL无CD56阳性表达。
3.CD56同EBERs阳性表达情况比较：46例TCL中24例EBERs阳性(52.2%)，阳性信号为细胞核内呈紫蓝色颗粒着色(图2)。同CD56的表达情况进行比较，仅有4例TCL的CD56和EBERs共同阳性。相关性比较(P>0.05)，说明EBERs和CD56表达无相关性；差异性检验(P<0.05),说明EBERs阳性表达明显高于CD56。
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讨论
CD56是神经细胞粘附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)的一个异构体。NCAM是最早提取、鉴定和克隆的免疫球蛋白超分子家族。其仅由一个基因编码定位于11q23，至少有24个外显子组成，通过mRNA剪接产生不同异构体，分子大小取决于羧基端的长度。根据其所含2-(2，8)多聚唾液酸单位的多少，分为高唾液酸化的NCAM-H型，与低唾液酸化的NCAM-L型。高唾液酸化可形成碳水化合物屏障，减少接触介导作用，降低细胞粘附力，可能与肿瘤侵袭行为有关[1]。CD56是一种能被抗Leu-19、NKH-1单克隆抗体识别的糖蛋白，含有175 000-185 000分子量，N端连有丰富唾液酸，主要表达于人类NK细胞上及少数介导人类主要组织相容性抗原非限制性细胞作用的T淋巴细胞上，序列免疫沉淀法证明CD56同表达于神经母细胞瘤上的NCAM分子有类似的结构，提示CD56可能同神经细胞上的NCAM有类似功能，即介导细胞粘附作用[2，3]。近年来，一些国外文献报道EB病毒感染的结外TCL同CD56阳性表达有密切联系。
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本研究中，CD56阳性表达同EB病毒感染相比较，仅有4例CD56和EBERs均阳性(3例为鼻腔和鼻咽部，1例为阑尾)。经统计学分析表明TCL中CD56和EBERs表达未发现相关性，EBERs阳性率(52.2%)远高于CD56阳性率(17.4%)。Harabuchi等[4]和Tsang等[5]分别报道鼻部TCL的EB病毒感染与CD56阳性有100%相关性。至于鼻部以外TCL，EB病毒感染与CD56阳性表达的关系则意见不一。Tsang和Clain[5]报道15例鼻部以外CD56阳性TCL病例中10例EBERs阳性(66.7%)及9例TCL的CD56和EBERs均阳性(100%)。他认为不管在淋巴结外任何部位，有CD2阳性、CD3阴性、CD56阳性这样免疫表型的TCL就会表现出同EB病毒密切的关系[5]。Nakamura等[6]报道10例CD56阳性的非呼吸道TCL中，只有3例EBERs阳性(33%)，表现出EBERs阳性和CD56阳性的不一致性。并认为这是由于TCL的部位限制性(site-restricted)导致的。本研究结果显示发生于鼻部及鼻部以外的TCL的CD56阳性表达同EB病毒感染均表现出高度不一致性。其原因有待进一步探讨。另外，本研究发现TCL中CD56阳性表达可能同TCL发生部位和类型有一定关系。
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参考文献
1Cunningham A, Hemperly J, Murray A, et al. Neural cell adhesion molecule: structure, immunoglobulin-like domains, cell surface modulation, and alternative RNA splicing. Science, 1987, 236：799-806.
2Lanier LL, Testi R, Bindl J, et al. Identity of Leu-19(CD56) leukocyte differentiation antigen and neural cell adhesion molecule. J Exp Med, 1987, 169：2233-2238.
3Nitta T, Yagita H, Sato K, et al. Involvement of CD56 (NKH-1/Leu-19 antigen) as an adhesion molecule in natural killer-target cell interaction. J Exp Med, 1989, 170：1757-1761.
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4Harabuchi Y, Imai S, Wakashima J, et al. Nasal T-cell lymphoma causally associated with Epstein-Barr virus clinicopathologic phenotypic, and genotypic studies. Cancer, 1996, 77：2137-2149.
5Tsang WY, Clain JK. EBV and T-cell lymphoma. Histopathology. 1994, 25：501-502.
6Nakamura S, Sasajima Y, Koshikawa T, et al. Inconsistent association of Epstein-Barr virus with CD56 (NCAM)-Positive angiocentric lymphoma occurring in sites other than the upper and lower respirary tract. Pathology, 1996, 28：111-120.
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(收稿：1997-08-18 修回：1998-04-11)
参考文献
1Wharton LR. Two cases of supernumerary ovary and one of accessary ovary with a analysis of previously reported cases. Am J Obstet Gynecol, 1959, 78：1101-1119.
2Cruikshank SH, Van Drie DM. Supernumerary ovaries: update and review. Obstet Gynecol, 1982, 60：126-129.
3Printz JL, Choate JW, Townes PL, et al. The embryology of supernumerary ovaries. Obstet Gynecol, 1973, 41：246-252.
(收稿：1997-10-16 修回：1998-04-07)), 百拇医药