细胞毒颗粒相关蛋白TIA-1在鼻NK/T细胞淋巴瘤及淋巴增生组织中的表达
作者：刘卫平 Alexander C. L. Chan Faith C. S. Ho 李甘地 刘永惠 Alan K. S.Chiang Gopesh Srivastava
单位：
610041 成都，华西医科大学附属第一医院病理科(刘卫平、李甘地)，耳鼻喉科(刘永惠)，香港大学病理学系(Alexan-der C.L.Chan、Fauth C.S.Ho、Alan K.S.Chiang、Gropesh Srivastava)
关键词：鼻肿瘤；淋巴瘤；T细胞；外周；细胞毒颗粒相关蛋白；NK/T细胞淋巴瘤
New Page 1 【摘要】 目的 观察27例鼻NK/T细胞淋巴瘤之瘤细胞表达细胞毒颗粒相关蛋白TIA-1的情况及其与该肿瘤的免疫表型，基因型及EB病毒感染的关系。方法 采用SP法免疫组织化学染色，选用的抗体有：TIA-1，CD56，CD3ε， CD45RO, CD8和CD20等；聚合酶链反应，作TCRγ链及免疫球蛋白JH链基因重排，EBER1/2原位杂交及与TIA-1和CD8等的双标记染色，还与10例鼻咽淋巴增生病例进行了比较。结果 (1)27例鼻NK/T细胞淋巴瘤中的多数瘤细胞都表达TIA-1, CD3ε, CD45RO及EBER1/2，27例中有26例的几乎所有瘤细胞都表达CD56，但未观察到瘤细胞表达CD8和CD20抗原。27例中仅1例检出TCRγ链基因重排，均未检出JH链基因重排；双标记染色显示，瘤细胞同时表达TIA-1和EBER1/2。(2)10例淋巴增生病例中有8例见少数TIA-1阳性小淋巴细胞散布，其分布与CD8阳性细胞的相似，而其中4例见少数EBER1/2阳性细胞存在；双标记染色显示，EBER1/2阳性细胞不表达TIA-1。结论 在鼻NK/T细胞淋巴瘤有高比例的瘤细胞表达TIA-1，并与EBER1/2, CD56,CD3ε等的表达相一致，提示其与瘤细胞的来源和其特殊的生物学行为有关。
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Expression of cytotoxic-granule-associated protein TIA-1 in nasal NK/T cell lymphomas and lymphoid hyperplasia Liu Weiping, Alexander C. L. Chan， Faith C. S. Ho, et al. Department of Pathology, West China University of Medical Sciences, Chengdu 610041
【Abstract】 Objective 27 cases of nasal NK/T cell lymphomas were studied for the expression of the cytotoxic-granule-associated protein TIA-1, its immunophenotype, genotype and Epstein-Barr virus infection status. Methods Immunohistochemical staining for TIA-1, CD3, CD56, CD45RO, CD8, CD20; polymerase chain reaction (PCR) for TCRγ chain gene and immunoglobulin JH chain gene rearrangement analysis; in situ hybridization for EBER 1/2 and double staining for TIA-1, CD8 with EBER 1/2. 10 cases of lymphoid hyperplasia were used for comparison. Results (1) In the 27 cases of nasal NK/T cell lymphomas, most tumor cells expressed TIA-1, CD3, CD45RO and EBER 1/2; expression of CD56 was found in 26 cases; no CD8 or CD20 were detected in tumors cells of this series of cases. Double labelled staining showed that the TIA-1 positive tumor cells coexpress EBER 1/2. TCRγ chain gene rearrangement was detected in only 1 of the 27 cases. (2) In the 10 cases of lymphoid hyperplasia of nasal pharynx, a small amount of TIA-1 positive cells were present in 8 cases and their distribution similar to that of CD8+ cells, in 4 of these cases a few EBER 1/2+ cells were detected, the number of CD45RO+ cells and CD20+ cells were similar in all 10 cases. Double labelled staining showed that the EBER 1/2+ cells did not coexpress TIA-1. Conclusion A high percentage of these tumor cells express TIA-1 and correlate with that of CD56, CD3ε, CD45RO and EBER1/2 in nasal NK/T cell lymphomas. It is suggested that expression of TIA-1 in this tumor may be related to the tumor origin and may also be responsible for its special biologic behavior.
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【Key words】 Nose neoplasms Lymphoma, T-cell, peripheral Cytotoxic granule associated protein NK/T-cell lymphoma
因鼻NK/T细胞淋巴瘤，即中线恶性网织细胞增生症(MMR)的瘤细胞常表达T细胞分化抗原及自然杀伤(NK)细胞相关抗原，而其确切的细胞属性又不清楚，故得此名[1]。 研究证实，该肿瘤属EB病毒相关淋巴瘤之列。TIA即是T细胞内抗原(T-cell intracellular antigen), TIA-1是分子量15 000的胞浆型RNA附着蛋白，其编码基因，即TIA-1基因位于人类第二号染色体p13上[2]。TIA-1是一种细胞毒颗粒相关蛋白(cytotoxic-granule associated protein), 是细胞溶解颗粒的主要成分。在正常情况下，人外周血中的多数CD8阳性细胞、部分CD4阳性细胞以及活化的NK细胞克隆表达该抗原。为了观察鼻NK/T细胞淋巴瘤的瘤细胞TIA-1抗原的表达，及其与该肿瘤的免疫表型，基因型及EB病毒感染的关系，我们对27例该肿瘤进行了研究，并与10例鼻咽淋巴增生病例相比较。
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材料与方法
本研究病例均来自华西医科大学附属第一医院病理科1995年1月至1996年6月的外检档案。经重新切片及形态学复习，27例符合鼻NK/T细胞淋巴瘤的形态学诊断标准且组织够大者，以及10例鼻咽淋巴增生病例作为本研究对象。
1.免疫组织化学(IH)：石蜡包埋组织切片4 μm，作三步SP法免疫组化染色，DAB为底物。选用抗体名称、来源、工作浓度度及其特异性见附表。作CD56、CD3ε和CD8染色前，进行了抗原修复处理，前两者用高压煮沸处理；后者用微波炉处理，将切片浸于TUF液(target unmasking fluid, PharMingen公司)内，95 ℃，5分钟，两次。
附表 第一抗体的名称、来源、工作浓度及其特异性
抗体
来源
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工作浓度
特异性
TIA-1
Coulter
1:1 000
细胞毒颗粒相关蛋白抗原
CD3ε
DAKO
1:150
T淋巴细胞
CD56
Monosan
1: 50
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NK相关抗原
CD45RO
DAKO
1:200
T淋巴细胞
CD8
DAKO
1:25
细胞毒性T细胞
CD20
DAKO
1:100
B淋巴细胞
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2.原位杂交：选用FITC标记的针对EB病毒编码的小分子RNA的寡核苷酸探针EBER1/2(DAKO公司，Y017)，在石蜡切片上作原位杂交，再桥连碱性磷酸酶(AP)标记的抗FITC抗体(1:100, DAKO公司)，最后以NBT/BCIP为底物进行显色，光镜观察。
3.免疫组化和原位杂交双标记染色：先作免疫组化染色，并恰当掌握显色时间，再作原位杂交。在原位杂交过程中，须适当延长杂交时间、桥连抗体的孵育时间及显色时间等。
4.聚合酶链式反应(PCR)：(1) DNA提取：16 μm石蜡切片10～20张(依组织大小而异)，脱蜡后以酚-氯仿法提取DNA。为检测所提DNA的质量，选用260 bp和110 bp的β-株蛋白引物用PCR方法扩增。(2) PCR：选用两组(McCarthy等[3]和Benhattar等[4])供三对TCRγ链基因引物和一组免疫球蛋白重链基因引物(McCarthy等, 1990)，反应体系总体积均为50 μl，按香港大学病理系分子生物学实验室常规进行DNA扩增，均为39个循环。(3) 电泳：PCR扩增产物在8%聚丙酰胺凝胶电泳(100伏/70分钟)。0.05%的溴乙啶染色，紫外灯下观察、照相。
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结果
27例鼻NK/T细胞淋巴瘤患者的男、女性别之比为4.4∶1，年龄从13到67岁不等 ，中位年龄为40岁。病程短者1个月，长者24个月，中位病程为8.5个月。19例(70.0%)患者的首发部位是鼻腔，余发生在鄂部、口咽及鼻咽等处。病变局部溃疡形成是最常见的临床表现(19例，70.0%)，2例有骨质破坏。
组织病理学检查：27例鼻NK/T淋巴瘤活检组织中均有不同程度的凝固性坏死，其中22例(81.5%)之浸润的瘤细胞以中到大型的为主；27例中有20例(74.1%)的瘤细胞呈弥漫性浸润(图1)；2例见有血管中心性浸润现象。10例鼻咽淋巴增生病例见粘膜上皮下淋巴组织增生，有或无淋巴滤泡形成(图2)。
免疫组化及EBER 1/2原位杂交：鼻NK/T细胞淋巴瘤病例的有关结果为，所有27例淋巴瘤之瘤细胞均表达TIA-1及全T细胞标记CD3ε(图3)和CD45RO(100%)，26例之瘤细胞表达CD56抗原(96.3%，图4)，病变组织中的一些小淋巴细胞呈CD8阳性反应，而肿瘤细胞未见表达CD8和CD20抗原。全部病例之瘤细胞均有EBER1/2阳性信号出现(100%)。双标记染色可见肿瘤细胞呈TIA-1阳性与EBER1/2阳性(图5)、CD8阴性与EBER1/2阳性反应。 在10例鼻咽淋巴增生病例中有不等量T、B标记阳性细胞存在，其中8例见少数TIA-1阳性小淋巴细胞散布，其分布与CD8阳性细胞的相似，而其中4例见少数EBER 1/2阳性细胞存在；双标记染色显示，EBER 1/2阳性细胞不表达TIA-1(图6)。
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基因重排：β-珠蛋白引物扩增结果显示，27例淋巴瘤中有8例(29.6%)呈β-珠蛋白260bp阳性，26例(96.3%)呈β-珠蛋白110bp阳性。27例中仅1例检出有TCR-γ链基因重排，且两组引物的扩增结果相同；均未检出免疫球蛋白JH基因重排。
讨论
1.鼻NK/T细胞淋巴瘤及鼻咽淋巴增生组织
图1 鼻NK/T细胞淋巴瘤的组织形态 HE×500 图2 鼻咽淋巴组织增生，淋巴滤泡形成 HE×200 图3 肿瘤细胞表达CD3ε抗原 SP法×500 图4 肿瘤细胞表达CD56抗原 SP法×400 图5 肿瘤细胞同时表达EBER和TIA-1 原位杂交+SP法双重染色 ×1 000 图6 鼻咽淋巴增生组织中的EBER阳性(粗箭头)及TIA-1阳性(细箭头)细胞 原位杂交+SP法双重染色×1 000
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TIA-1抗原的表达：从本组病例来看，在27例鼻NK/T细胞淋巴瘤中大多数瘤细胞都表达TIA-1抗原，其阳性细胞的分布亦与肿瘤细胞的相同。从TIA-1与EBER 1/2和CD8与EBER1/2双标记染色结果来看，EBER 1/2阳性的肿瘤细胞同时表达TIA-1，而不表达CD8抗原；另一方面，在病变组织中还见有一些EBER1/2阴性、TIA-1阳性细胞存在，结合这些细胞的形态及免疫表型，我们知道，这些是存在于病变组织中的反应性细胞成分，即是CD8阳性的细胞毒性T淋巴细胞。本组10例鼻咽淋巴增生病例中有8例可见一些TIA-1阳性细胞存在，与前者不同之处有三：(1) TIA-1阳性细胞的数量明显少于前者；(2) 这些TIA-1阳性细胞都是存在于滤泡间区或是散布的小淋巴细胞，而且其分布与CD8阳性细胞的分布相似；(3) 所有的这些TIA-1阳性细胞均不表达EBER1/2。说明在鼻咽淋巴增生病变组织中表达TIA-1抗原的是一些CD8阳性的细胞毒性T淋巴细胞。有关肿瘤细胞表达TIA-1的研究报道较少。Matutes等[5]及Emile等[6]的研究表明，在大颗粒淋巴细胞白血病及NK细胞淋巴瘤, 分别有77%和88%的病例之瘤细胞表达TIA-1抗原；外周T细胞性淋巴瘤及T细胞性急性淋巴母细胞性白血病病例TIA-1阳性率为50%。本组27例鼻NK/T细胞淋巴瘤之多数瘤细胞均表达TIA-1, 提示其可能与瘤细胞的来源和其特殊的生物学行为有关。TIA-1可能在Fas介导细胞凋亡信号的传递过程中起到某种作用。但其具体的作用机制还不清楚[5]。
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2.TIA-1抗原的表达与肿瘤的免疫表型和基因型的关系：从27例鼻NK/T细胞淋巴瘤的免疫表型来看，全部病例的几乎所有肿瘤细胞都表达T细胞分化抗原CD3ε和CD45RO，除1例外亦都表达NK相关抗原CD56，但不表达细胞毒性细胞标记CD8和B细胞分化抗原CD20。基因型分析，27例中仅1例检出TCRγ链基因重排，均未检出免疫球蛋白JH链重排。致本组病例TCRγ重排检出率低的原因与石蜡切片组织DNA的质量有关，从β-珠蛋白的扩增结果可知，DNA降解较明显。如本组唯一的CD56阴性病例，其瘤细胞呈CD3ε阳性、CD20阴性、EBER1/2阳性，约20%的细胞表达CD45RO；PCR检测，β-珠蛋白260bp阴性、β-珠蛋白110bp阳性，TCRγ阴性，这很可能是1例T细胞性淋巴瘤，DNA质量欠佳而未检出TCRγ链重排。本组27例鼻NK/T细胞淋巴瘤，CD56阴性及有TCRγ链基因重排的病例均只有1例。它们与其他大多数CD56阳性、未检出TCRγ阴性链基因重排的病例相比较，其瘤细胞TIA-1抗原的表达未见明显差别，这与进行比较的例数太少有关。另外，本组27例几乎所有瘤细胞都有EBER1/2阳性信号，其TIA-1抗原的表达与前者密切相关，而与鼻咽淋巴增生病例不同，提示TIA-1抗原表达对该类肿瘤的病理诊断有一定的参考价值。
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本课题受国家自然科学基金部分资助(基金编号39100047)、香港大学校长基金、国际病理学会香港分会和美国中华医学基金会基金资助(基金编号9671048、CMB-9315)
参考文献
1Jaffe ES, Chen JKC, Su IJ, et al. Report of the workshop on nasal and related extranodal angiocentric T/NK-cell lymphomas: definitions, differential diagnosis, epidemiology. Am J Surg Pathol, 1996, 20：103-111.
2Kawakami A, Tian Q, Streuli M, et al. Intron-exon organization and chromosomal location of the human TIA-1 gene. J Immunol, 1994, 152：4937-4945.
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3McCarthy KP, Sloane JP, Kabarowski JHS, et al. A simplified method of detection of clonal rearrangement of the T-cell receptor-γ chain gene. Diagn Mol Pathol, 1992, 1：173-179.
4Benhattar J, Delacretaz F, Martin P, et al. Improved polymerase chain reaction detection of clonal T-cell lymphoid neoplasms. Diagn Mol Pathol, 1995, 4：108-112.
5Matutes E, Aguado MJ, Morilla R, et al. Expression of TIA-1 and TIA-2 in T-cell malignancies and T-cell lymphocytosis. J Clin Pathol, 1996, 49：154-158.
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6Emile JF, Boulland ML, Haioun C, et al. Natural killer cell lympphomas: clinical, histological phenotypic and genotypic characteristics. Ann Oncol, 1996, 7：345.
(收稿：1997-09-03 修回：1998-03-26)
(本文编辑：霍临明)
*病例报告*
胎儿口腔上腭未成熟畸胎瘤一例
李凤芝 胡光春 徐华林
胎儿女，31周，无任何诱因于1992年6月22日早产。娩出后婴儿发育不良，口腔上颚有一巨大分叶状肿瘤突出口腔外。婴儿无器声，全身苍白，口唇青紫，四肢软弱无力，反射消失，心音微弱，7分钟后心跳停止死亡。其母28岁，本次妊娠后未服用任何药物，未接受放射线。妊娠29周腹部迅速增大，伴不规则腹痛。入院后查胎心130次/分，B超示羊水过多，胎儿畸形，入院第2天自然分娩。其母曾于1990年第一次妊娠36周早产一无脑女婴。
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病理检查：女性死胎1个，身长35 cm，体重1 500 g。于胎儿口腔上腭向外突出一16 cm×15 cm×10 cm大小分叶状肿物，紫红色间棕褐色及灰黄色，质地中等，包膜完整。肿瘤切面，大部分实性，部分囊性，灰黄灰白及紫红色相间。镜下观察：肿瘤表面被覆复层鳞状上皮，实质内可见大量分化成熟的鳞状上皮巢，中央为角化物质。有的区域由杂乱排列的腺体组成，有的腺体内衬单层立方上皮，有的腺体内衬单层柱状粘液上皮或假复层柱状上皮，腺体之间可见平滑肌组织。有的区域可见由大量小圆细胞组成的，呈小灶状分布的分化不成熟组织。
病理诊断：胎儿口腔上腭未成熟畸胎瘤
讨论：原发于性腺以外，特别是沿人体中线的畸胎瘤较为少见，而原发于胎儿口腔上腭的畸胎瘤极少见。一般认为其组织发生是生殖细胞的异位。畸胎瘤常见部位是沿着身体的中线，即胚胎期原线、脊索的部位。按发生频率依次为卵巢、睾丸、前纵隔、腹膜后、骶前和尾部，偶见于颅底、松果体和甲状腺附近。口腔上腭位于身体的中线部位，在胚胎发生过程中迁移来的多潜能生殖细胞也可以发生畸胎瘤，但十分罕见。
(收稿：1997-08-05 修回：1998-01-13)
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单位：
610041 成都，华西医科大学附属第一医院病理科(刘卫平、李甘地)，耳鼻喉科(刘永惠)，香港大学病理学系(Alexan-der C.L.Chan、Fauth C.S.Ho、Alan K.S.Chiang、Gropesh Srivastava)
关键词：鼻肿瘤；淋巴瘤；T细胞；外周；细胞毒颗粒相关蛋白；NK/T细胞淋巴瘤
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Expression of cytotoxic-granule-associated protein TIA-1 in nasal NK/T cell lymphomas and lymphoid hyperplasia Liu Weiping, Alexander C. L. Chan， Faith C. S. Ho, et al. Department of Pathology, West China University of Medical Sciences, Chengdu 610041
【Abstract】 Objective 27 cases of nasal NK/T cell lymphomas were studied for the expression of the cytotoxic-granule-associated protein TIA-1, its immunophenotype, genotype and Epstein-Barr virus infection status. Methods Immunohistochemical staining for TIA-1, CD3, CD56, CD45RO, CD8, CD20; polymerase chain reaction (PCR) for TCRγ chain gene and immunoglobulin JH chain gene rearrangement analysis; in situ hybridization for EBER 1/2 and double staining for TIA-1, CD8 with EBER 1/2. 10 cases of lymphoid hyperplasia were used for comparison. Results (1) In the 27 cases of nasal NK/T cell lymphomas, most tumor cells expressed TIA-1, CD3, CD45RO and EBER 1/2; expression of CD56 was found in 26 cases; no CD8 or CD20 were detected in tumors cells of this series of cases. Double labelled staining showed that the TIA-1 positive tumor cells coexpress EBER 1/2. TCRγ chain gene rearrangement was detected in only 1 of the 27 cases. (2) In the 10 cases of lymphoid hyperplasia of nasal pharynx, a small amount of TIA-1 positive cells were present in 8 cases and their distribution similar to that of CD8+ cells, in 4 of these cases a few EBER 1/2+ cells were detected, the number of CD45RO+ cells and CD20+ cells were similar in all 10 cases. Double labelled staining showed that the EBER 1/2+ cells did not coexpress TIA-1. Conclusion A high percentage of these tumor cells express TIA-1 and correlate with that of CD56, CD3ε, CD45RO and EBER1/2 in nasal NK/T cell lymphomas. It is suggested that expression of TIA-1 in this tumor may be related to the tumor origin and may also be responsible for its special biologic behavior.
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【Key words】 Nose neoplasms Lymphoma, T-cell, peripheral Cytotoxic granule associated protein NK/T-cell lymphoma
因鼻NK/T细胞淋巴瘤，即中线恶性网织细胞增生症(MMR)的瘤细胞常表达T细胞分化抗原及自然杀伤(NK)细胞相关抗原，而其确切的细胞属性又不清楚，故得此名[1]。 研究证实，该肿瘤属EB病毒相关淋巴瘤之列。TIA即是T细胞内抗原(T-cell intracellular antigen), TIA-1是分子量15 000的胞浆型RNA附着蛋白，其编码基因，即TIA-1基因位于人类第二号染色体p13上[2]。TIA-1是一种细胞毒颗粒相关蛋白(cytotoxic-granule associated protein), 是细胞溶解颗粒的主要成分。在正常情况下，人外周血中的多数CD8阳性细胞、部分CD4阳性细胞以及活化的NK细胞克隆表达该抗原。为了观察鼻NK/T细胞淋巴瘤的瘤细胞TIA-1抗原的表达，及其与该肿瘤的免疫表型，基因型及EB病毒感染的关系，我们对27例该肿瘤进行了研究，并与10例鼻咽淋巴增生病例相比较。
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材料与方法
本研究病例均来自华西医科大学附属第一医院病理科1995年1月至1996年6月的外检档案。经重新切片及形态学复习，27例符合鼻NK/T细胞淋巴瘤的形态学诊断标准且组织够大者，以及10例鼻咽淋巴增生病例作为本研究对象。
1.免疫组织化学(IH)：石蜡包埋组织切片4 μm，作三步SP法免疫组化染色，DAB为底物。选用抗体名称、来源、工作浓度度及其特异性见附表。作CD56、CD3ε和CD8染色前，进行了抗原修复处理，前两者用高压煮沸处理；后者用微波炉处理，将切片浸于TUF液(target unmasking fluid, PharMingen公司)内，95 ℃，5分钟，两次。
附表 第一抗体的名称、来源、工作浓度及其特异性
抗体
来源
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工作浓度
特异性
TIA-1
Coulter
1:1 000
细胞毒颗粒相关蛋白抗原
CD3ε
DAKO
1:150
T淋巴细胞
CD56
Monosan
1: 50
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NK相关抗原
CD45RO
DAKO
1:200
T淋巴细胞
CD8
DAKO
1:25
细胞毒性T细胞
CD20
DAKO
1:100
B淋巴细胞
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2.原位杂交：选用FITC标记的针对EB病毒编码的小分子RNA的寡核苷酸探针EBER1/2(DAKO公司，Y017)，在石蜡切片上作原位杂交，再桥连碱性磷酸酶(AP)标记的抗FITC抗体(1:100, DAKO公司)，最后以NBT/BCIP为底物进行显色，光镜观察。
3.免疫组化和原位杂交双标记染色：先作免疫组化染色，并恰当掌握显色时间，再作原位杂交。在原位杂交过程中，须适当延长杂交时间、桥连抗体的孵育时间及显色时间等。
4.聚合酶链式反应(PCR)：(1) DNA提取：16 μm石蜡切片10～20张(依组织大小而异)，脱蜡后以酚-氯仿法提取DNA。为检测所提DNA的质量，选用260 bp和110 bp的β-株蛋白引物用PCR方法扩增。(2) PCR：选用两组(McCarthy等[3]和Benhattar等[4])供三对TCRγ链基因引物和一组免疫球蛋白重链基因引物(McCarthy等, 1990)，反应体系总体积均为50 μl，按香港大学病理系分子生物学实验室常规进行DNA扩增，均为39个循环。(3) 电泳：PCR扩增产物在8%聚丙酰胺凝胶电泳(100伏/70分钟)。0.05%的溴乙啶染色，紫外灯下观察、照相。
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结果
27例鼻NK/T细胞淋巴瘤患者的男、女性别之比为4.4∶1，年龄从13到67岁不等 ，中位年龄为40岁。病程短者1个月，长者24个月，中位病程为8.5个月。19例(70.0%)患者的首发部位是鼻腔，余发生在鄂部、口咽及鼻咽等处。病变局部溃疡形成是最常见的临床表现(19例，70.0%)，2例有骨质破坏。
组织病理学检查：27例鼻NK/T淋巴瘤活检组织中均有不同程度的凝固性坏死，其中22例(81.5%)之浸润的瘤细胞以中到大型的为主；27例中有20例(74.1%)的瘤细胞呈弥漫性浸润(图1)；2例见有血管中心性浸润现象。10例鼻咽淋巴增生病例见粘膜上皮下淋巴组织增生，有或无淋巴滤泡形成(图2)。
免疫组化及EBER 1/2原位杂交：鼻NK/T细胞淋巴瘤病例的有关结果为，所有27例淋巴瘤之瘤细胞均表达TIA-1及全T细胞标记CD3ε(图3)和CD45RO(100%)，26例之瘤细胞表达CD56抗原(96.3%，图4)，病变组织中的一些小淋巴细胞呈CD8阳性反应，而肿瘤细胞未见表达CD8和CD20抗原。全部病例之瘤细胞均有EBER1/2阳性信号出现(100%)。双标记染色可见肿瘤细胞呈TIA-1阳性与EBER1/2阳性(图5)、CD8阴性与EBER1/2阳性反应。 在10例鼻咽淋巴增生病例中有不等量T、B标记阳性细胞存在，其中8例见少数TIA-1阳性小淋巴细胞散布，其分布与CD8阳性细胞的相似，而其中4例见少数EBER 1/2阳性细胞存在；双标记染色显示，EBER 1/2阳性细胞不表达TIA-1(图6)。
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基因重排：β-珠蛋白引物扩增结果显示，27例淋巴瘤中有8例(29.6%)呈β-珠蛋白260bp阳性，26例(96.3%)呈β-珠蛋白110bp阳性。27例中仅1例检出有TCR-γ链基因重排，且两组引物的扩增结果相同；均未检出免疫球蛋白JH基因重排。
讨论
1.鼻NK/T细胞淋巴瘤及鼻咽淋巴增生组织
图1 鼻NK/T细胞淋巴瘤的组织形态 HE×500 图2 鼻咽淋巴组织增生，淋巴滤泡形成 HE×200 图3 肿瘤细胞表达CD3ε抗原 SP法×500 图4 肿瘤细胞表达CD56抗原 SP法×400 图5 肿瘤细胞同时表达EBER和TIA-1 原位杂交+SP法双重染色 ×1 000 图6 鼻咽淋巴增生组织中的EBER阳性(粗箭头)及TIA-1阳性(细箭头)细胞 原位杂交+SP法双重染色×1 000
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TIA-1抗原的表达：从本组病例来看，在27例鼻NK/T细胞淋巴瘤中大多数瘤细胞都表达TIA-1抗原，其阳性细胞的分布亦与肿瘤细胞的相同。从TIA-1与EBER 1/2和CD8与EBER1/2双标记染色结果来看，EBER 1/2阳性的肿瘤细胞同时表达TIA-1，而不表达CD8抗原；另一方面，在病变组织中还见有一些EBER1/2阴性、TIA-1阳性细胞存在，结合这些细胞的形态及免疫表型，我们知道，这些是存在于病变组织中的反应性细胞成分，即是CD8阳性的细胞毒性T淋巴细胞。本组10例鼻咽淋巴增生病例中有8例可见一些TIA-1阳性细胞存在，与前者不同之处有三：(1) TIA-1阳性细胞的数量明显少于前者；(2) 这些TIA-1阳性细胞都是存在于滤泡间区或是散布的小淋巴细胞，而且其分布与CD8阳性细胞的分布相似；(3) 所有的这些TIA-1阳性细胞均不表达EBER1/2。说明在鼻咽淋巴增生病变组织中表达TIA-1抗原的是一些CD8阳性的细胞毒性T淋巴细胞。有关肿瘤细胞表达TIA-1的研究报道较少。Matutes等[5]及Emile等[6]的研究表明，在大颗粒淋巴细胞白血病及NK细胞淋巴瘤, 分别有77%和88%的病例之瘤细胞表达TIA-1抗原；外周T细胞性淋巴瘤及T细胞性急性淋巴母细胞性白血病病例TIA-1阳性率为50%。本组27例鼻NK/T细胞淋巴瘤之多数瘤细胞均表达TIA-1, 提示其可能与瘤细胞的来源和其特殊的生物学行为有关。TIA-1可能在Fas介导细胞凋亡信号的传递过程中起到某种作用。但其具体的作用机制还不清楚[5]。
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2.TIA-1抗原的表达与肿瘤的免疫表型和基因型的关系：从27例鼻NK/T细胞淋巴瘤的免疫表型来看，全部病例的几乎所有肿瘤细胞都表达T细胞分化抗原CD3ε和CD45RO，除1例外亦都表达NK相关抗原CD56，但不表达细胞毒性细胞标记CD8和B细胞分化抗原CD20。基因型分析，27例中仅1例检出TCRγ链基因重排，均未检出免疫球蛋白JH链重排。致本组病例TCRγ重排检出率低的原因与石蜡切片组织DNA的质量有关，从β-珠蛋白的扩增结果可知，DNA降解较明显。如本组唯一的CD56阴性病例，其瘤细胞呈CD3ε阳性、CD20阴性、EBER1/2阳性，约20%的细胞表达CD45RO；PCR检测，β-珠蛋白260bp阴性、β-珠蛋白110bp阳性，TCRγ阴性，这很可能是1例T细胞性淋巴瘤，DNA质量欠佳而未检出TCRγ链重排。本组27例鼻NK/T细胞淋巴瘤，CD56阴性及有TCRγ链基因重排的病例均只有1例。它们与其他大多数CD56阳性、未检出TCRγ阴性链基因重排的病例相比较，其瘤细胞TIA-1抗原的表达未见明显差别，这与进行比较的例数太少有关。另外，本组27例几乎所有瘤细胞都有EBER1/2阳性信号，其TIA-1抗原的表达与前者密切相关，而与鼻咽淋巴增生病例不同，提示TIA-1抗原表达对该类肿瘤的病理诊断有一定的参考价值。
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本课题受国家自然科学基金部分资助(基金编号39100047)、香港大学校长基金、国际病理学会香港分会和美国中华医学基金会基金资助(基金编号9671048、CMB-9315)
参考文献
1Jaffe ES, Chen JKC, Su IJ, et al. Report of the workshop on nasal and related extranodal angiocentric T/NK-cell lymphomas: definitions, differential diagnosis, epidemiology. Am J Surg Pathol, 1996, 20：103-111.
2Kawakami A, Tian Q, Streuli M, et al. Intron-exon organization and chromosomal location of the human TIA-1 gene. J Immunol, 1994, 152：4937-4945.
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3McCarthy KP, Sloane JP, Kabarowski JHS, et al. A simplified method of detection of clonal rearrangement of the T-cell receptor-γ chain gene. Diagn Mol Pathol, 1992, 1：173-179.
4Benhattar J, Delacretaz F, Martin P, et al. Improved polymerase chain reaction detection of clonal T-cell lymphoid neoplasms. Diagn Mol Pathol, 1995, 4：108-112.
5Matutes E, Aguado MJ, Morilla R, et al. Expression of TIA-1 and TIA-2 in T-cell malignancies and T-cell lymphocytosis. J Clin Pathol, 1996, 49：154-158.
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6Emile JF, Boulland ML, Haioun C, et al. Natural killer cell lympphomas: clinical, histological phenotypic and genotypic characteristics. Ann Oncol, 1996, 7：345.
(收稿：1997-09-03 修回：1998-03-26)
(本文编辑：霍临明)
*病例报告*
胎儿口腔上腭未成熟畸胎瘤一例
李凤芝 胡光春 徐华林
胎儿女，31周，无任何诱因于1992年6月22日早产。娩出后婴儿发育不良，口腔上颚有一巨大分叶状肿瘤突出口腔外。婴儿无器声，全身苍白，口唇青紫，四肢软弱无力，反射消失，心音微弱，7分钟后心跳停止死亡。其母28岁，本次妊娠后未服用任何药物，未接受放射线。妊娠29周腹部迅速增大，伴不规则腹痛。入院后查胎心130次/分，B超示羊水过多，胎儿畸形，入院第2天自然分娩。其母曾于1990年第一次妊娠36周早产一无脑女婴。
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病理检查：女性死胎1个，身长35 cm，体重1 500 g。于胎儿口腔上腭向外突出一16 cm×15 cm×10 cm大小分叶状肿物，紫红色间棕褐色及灰黄色，质地中等，包膜完整。肿瘤切面，大部分实性，部分囊性，灰黄灰白及紫红色相间。镜下观察：肿瘤表面被覆复层鳞状上皮，实质内可见大量分化成熟的鳞状上皮巢，中央为角化物质。有的区域由杂乱排列的腺体组成，有的腺体内衬单层立方上皮，有的腺体内衬单层柱状粘液上皮或假复层柱状上皮，腺体之间可见平滑肌组织。有的区域可见由大量小圆细胞组成的，呈小灶状分布的分化不成熟组织。
病理诊断：胎儿口腔上腭未成熟畸胎瘤
讨论：原发于性腺以外，特别是沿人体中线的畸胎瘤较为少见，而原发于胎儿口腔上腭的畸胎瘤极少见。一般认为其组织发生是生殖细胞的异位。畸胎瘤常见部位是沿着身体的中线，即胚胎期原线、脊索的部位。按发生频率依次为卵巢、睾丸、前纵隔、腹膜后、骶前和尾部，偶见于颅底、松果体和甲状腺附近。口腔上腭位于身体的中线部位，在胚胎发生过程中迁移来的多潜能生殖细胞也可以发生畸胎瘤，但十分罕见。
(收稿：1997-08-05 修回：1998-01-13)
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