bcl-2和p16蛋白在胆囊粘膜上皮异型增生和胆囊腺癌中的表达
作者：姚宏 武群英 赵玛丽 平苏萍 王虹 张庆升 路喜安 袁瑞香
单位：030001 太原市人民医院(姚宏、武群英、赵玛丽、平苏萍、王虹、张庆升)；山西医科大学附属第一医院(路喜安),附属第二医院(袁瑞香)
关键词：
中华病理学杂志/990218 一、材料和方法
1.标本：收集我院及山西医科大学附属第一医院病理科1986～1996年胆囊良、恶性病变手术切除标本，HE染色确诊，胆囊腺癌38例(高分化18例，低分化8例，未分化8例，粘液腺癌4
例)，胆囊粘膜上皮异型增生24例(轻度8例，中度6例，重度10例)，另取20例正常胆囊粘膜标本作对照。所有标本均经4%甲醛固定，常规石蜡包埋，4μm切片。38例胆囊癌病例均获随访。随访时间为6个月～10年。
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2.免疫组织化学染色方法：切片常规脱蜡后用微波炉修复抗原，抗bcl-2单克隆抗体和p16多克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品(均购自北京中山生物技术公司)，工作浓度分别为1:100和1:50，染色采用ABC法，DAB显色，光镜观察，以PBS代替一抗作阴性对照，以bcl-2和p16蛋白阳性前列腺癌切片作阳性对照。bcl-2和p16蛋白分别以细胞质和细胞核染成棕黄色作为阳性判定标准，每张切片随机选5个高倍视野，计数1 000个细胞，(-)：阳性细胞数为0%～5%；(+)阳性细胞数为5%～30%；(++)：阳性细胞数30%～50%；(+++)：阳性细胞数>50%，所得数据采用χ2检验进行统计学分析处理。
二、结果
1.免疫组化染色结果：bcl-2蛋白阳性信号定位于细胞质(图1)，p16蛋白阳性信号定位于细胞核(图2)。20例正常胆囊粘膜组织bcl-2和p16表达均为阴性。24例胆囊粘膜上皮异型增生,bcl-2和p16阳性表达分别为19例(79.2%)和18例(58.3%)；轻度异型增生8例，bcl-2和p16蛋白阳性表达分别为4例和3例，中度异型增生6例，bcl-2和p16蛋白阳性表达分别为5例和3例；重度异型增生10例，bcl-2和p16蛋白阳性表达分别为10例和8例。轻度异型增生多为弱阳性，中、重度异型增生多为中阳性和强阳性，随着异型增生级别加重，bcl-2和p16阳性率逐渐增加，活性增强，38例胆囊腺癌组织中bcl-2和p16阳性表达分别为32例(84.2%)和26例(68.4%)，其中高分化腺癌18例，bcl-2和p16阳性表达分别为14例(77.8%)和10例(55.6%)；低分化腺癌8例，bcl-2和p16阳性表达分别为7例和6例；未分化癌8例，bcl-2和p16阳性表达分别为8例和7例。粘液腺癌4例，其bcl-2和p16阳性表达均为3例。上述结果经统计学分析：在胆囊腺癌和胆囊粘膜上皮中，重度异型增生bcl-2和p16阳性率明显高于正常胆囊粘膜组和轻度异型增生组(P<0.01)。
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图1 胆囊低分化腺癌bcl-2蛋白阳性信号为棕黄色颗粒，位于细胞质 ABC法×400
图2 胆囊粘液腺癌p16蛋白阳性信号为棕黄色颗粒，位于细胞核 ABC法×400
2.胆囊腺癌预后与bcl-2、p16蛋白的关系：在本组38例胆囊腺癌随访病例中，5年内存活者为16例，5年内死亡者22例，5年内存活率为41.2%。bcl-2阳性表达与胆囊癌患者预后的关系无显著性差异，生存时间>5年者16例，bcl-2阳性表达14例，阳性率为87.5%，生存时间<5年者22例，阳性表达为18例(81.81%)，两者比较差异无显著性(P>0.05)。而p16蛋白阳性表达与预后有关。生存时间>5年16例，阳性表达4例(25.0%)，生存时间<5年22例，p16阳性表达22例(100%)，二者比较差异有非常显著性(P<0.01)。
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三、讨论
新近研究表明，bcl-2是广义抗凋亡基因，可促进细胞的增殖，导致肿瘤的发生。本组研究结果表明，bcl-2蛋白在正常胆囊粘膜上皮表达均为阴性，表明无细胞凋亡，而胆囊粘膜上皮异型增生和胆囊腺癌的bcl-2阳性表达明显增加，有较高的表达。这提示在胆囊癌发生期即出现bcl-2表达的细胞凋亡异常。因此细胞凋亡可能随着癌发生过程中细胞增殖旺盛而增多。研究表明，在多种肿瘤细胞中均有p16基因的缺失和突变，75%癌细胞株有p16基因缺失和突变。作为一种抑癌基因，纯合性缺失和点突变是其失活的主要机制。本研究结果显示：正常胆囊粘膜上皮未见p16基因蛋白表达，而胆囊粘膜上皮异型增生和胆囊腺癌均有过度表达，且随着组织学分级而增加，这表明p16蛋白参与胆囊腺癌增殖过程，并且p16蛋白缺失可能是胆囊粘膜异型增生向胆囊腺癌过渡的重要环节。另外胆囊腺癌患者的随访结果表明，bcl-2蛋白可能成为判定预后的指标之一。
本课题受太原市科技启明星科研基金资助(编号98020)
(收稿：1998-03-20 修回：1998-08-28), 百拇医药
单位：030001 太原市人民医院(姚宏、武群英、赵玛丽、平苏萍、王虹、张庆升)；山西医科大学附属第一医院(路喜安),附属第二医院(袁瑞香)
关键词：
中华病理学杂志/990218 一、材料和方法
1.标本：收集我院及山西医科大学附属第一医院病理科1986～1996年胆囊良、恶性病变手术切除标本，HE染色确诊，胆囊腺癌38例(高分化18例，低分化8例，未分化8例，粘液腺癌4
例)，胆囊粘膜上皮异型增生24例(轻度8例，中度6例，重度10例)，另取20例正常胆囊粘膜标本作对照。所有标本均经4%甲醛固定，常规石蜡包埋，4μm切片。38例胆囊癌病例均获随访。随访时间为6个月～10年。
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2.免疫组织化学染色方法：切片常规脱蜡后用微波炉修复抗原，抗bcl-2单克隆抗体和p16多克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品(均购自北京中山生物技术公司)，工作浓度分别为1:100和1:50，染色采用ABC法，DAB显色，光镜观察，以PBS代替一抗作阴性对照，以bcl-2和p16蛋白阳性前列腺癌切片作阳性对照。bcl-2和p16蛋白分别以细胞质和细胞核染成棕黄色作为阳性判定标准，每张切片随机选5个高倍视野，计数1 000个细胞，(-)：阳性细胞数为0%～5%；(+)阳性细胞数为5%～30%；(++)：阳性细胞数30%～50%；(+++)：阳性细胞数>50%，所得数据采用χ2检验进行统计学分析处理。
二、结果
1.免疫组化染色结果：bcl-2蛋白阳性信号定位于细胞质(图1)，p16蛋白阳性信号定位于细胞核(图2)。20例正常胆囊粘膜组织bcl-2和p16表达均为阴性。24例胆囊粘膜上皮异型增生,bcl-2和p16阳性表达分别为19例(79.2%)和18例(58.3%)；轻度异型增生8例，bcl-2和p16蛋白阳性表达分别为4例和3例，中度异型增生6例，bcl-2和p16蛋白阳性表达分别为5例和3例；重度异型增生10例，bcl-2和p16蛋白阳性表达分别为10例和8例。轻度异型增生多为弱阳性，中、重度异型增生多为中阳性和强阳性，随着异型增生级别加重，bcl-2和p16阳性率逐渐增加，活性增强，38例胆囊腺癌组织中bcl-2和p16阳性表达分别为32例(84.2%)和26例(68.4%)，其中高分化腺癌18例，bcl-2和p16阳性表达分别为14例(77.8%)和10例(55.6%)；低分化腺癌8例，bcl-2和p16阳性表达分别为7例和6例；未分化癌8例，bcl-2和p16阳性表达分别为8例和7例。粘液腺癌4例，其bcl-2和p16阳性表达均为3例。上述结果经统计学分析：在胆囊腺癌和胆囊粘膜上皮中，重度异型增生bcl-2和p16阳性率明显高于正常胆囊粘膜组和轻度异型增生组(P<0.01)。
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图1 胆囊低分化腺癌bcl-2蛋白阳性信号为棕黄色颗粒，位于细胞质 ABC法×400
图2 胆囊粘液腺癌p16蛋白阳性信号为棕黄色颗粒，位于细胞核 ABC法×400
2.胆囊腺癌预后与bcl-2、p16蛋白的关系：在本组38例胆囊腺癌随访病例中，5年内存活者为16例，5年内死亡者22例，5年内存活率为41.2%。bcl-2阳性表达与胆囊癌患者预后的关系无显著性差异，生存时间>5年者16例，bcl-2阳性表达14例，阳性率为87.5%，生存时间<5年者22例，阳性表达为18例(81.81%)，两者比较差异无显著性(P>0.05)。而p16蛋白阳性表达与预后有关。生存时间>5年16例，阳性表达4例(25.0%)，生存时间<5年22例，p16阳性表达22例(100%)，二者比较差异有非常显著性(P<0.01)。
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三、讨论
新近研究表明，bcl-2是广义抗凋亡基因，可促进细胞的增殖，导致肿瘤的发生。本组研究结果表明，bcl-2蛋白在正常胆囊粘膜上皮表达均为阴性，表明无细胞凋亡，而胆囊粘膜上皮异型增生和胆囊腺癌的bcl-2阳性表达明显增加，有较高的表达。这提示在胆囊癌发生期即出现bcl-2表达的细胞凋亡异常。因此细胞凋亡可能随着癌发生过程中细胞增殖旺盛而增多。研究表明，在多种肿瘤细胞中均有p16基因的缺失和突变，75%癌细胞株有p16基因缺失和突变。作为一种抑癌基因，纯合性缺失和点突变是其失活的主要机制。本研究结果显示：正常胆囊粘膜上皮未见p16基因蛋白表达，而胆囊粘膜上皮异型增生和胆囊腺癌均有过度表达，且随着组织学分级而增加，这表明p16蛋白参与胆囊腺癌增殖过程，并且p16蛋白缺失可能是胆囊粘膜异型增生向胆囊腺癌过渡的重要环节。另外胆囊腺癌患者的随访结果表明，bcl-2蛋白可能成为判定预后的指标之一。
本课题受太原市科技启明星科研基金资助(编号98020)
(收稿：1998-03-20 修回：1998-08-28), 百拇医药