胸腺肿瘤组织中EB病毒、细胞增殖和凋亡的检测
作者：买世娟 熊敏 宗永生 李智 饶慧兰
单位：510089 中山医科大学病理学教研室(买世娟、熊敏、宗永生、李智)，附属肿瘤医院病理科(饶慧兰)
关键词：胸腺肿瘤；疱疹病毒4型；人；增殖；凋亡
New Page 1 【摘要】 目的 研究胸腺肿瘤在广州5所医院的发病情况，与EB病毒(EBV)感染是否相关以及肿瘤细胞增殖和凋亡的等级。方法 以43例胸腺肿瘤和7例胸腺增生组织为研究对象。采用原位分子杂交检测EB病毒编码的EBERs，免疫组化LSAB法检测EBNA-1、LMP-1、PCNA、bcl-2、和p53，原位细胞凋亡(TUNEL)方法检测细胞凋亡。结果 (1)胸腺疾病在广州5所医院活检中仅占0.057%，其中肿瘤占74.7%，增生18.6%。胸腺淋巴上皮瘤样癌(LELC)占胸腺肿瘤的2.7%。(2)在50例胸腺标本中均未检测到EBV编码的EBERs，EBNA-1和LMP-1。(3)胸腺癌中呈高度增殖等级的病例(10/20例)明显多于胸腺瘤(0/18例)，而呈高级数凋亡等级的病例(13/20例)则低于胸腺瘤(15/18例)。(4)胸腺癌中p53蛋白积聚率(8/20例)显著高于胸腺瘤(1/18例)。胸腺上皮性肿瘤中p53蛋白积聚与凋亡等级密切相关。(5)Bcl-2在胸腺癌和胸腺瘤中均有不同程度的过表达。结论 (1)胸腺疾病在广州地区极为少见，与EBV感染无密切的关系；(2)胸腺癌与胸腺瘤相比其生长速度较快；(3)p53基因突变在胸腺癌的发生中可能起着重要作用，bcl-2的过表达在胸腺上皮性肿瘤的发生中可能也起一定作用；(4)野生型p53蛋白在胸腺上皮性肿瘤中可能诱导肿瘤细胞的凋亡。
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Detection of Epstein-Barr virus, cell proliferation and apoptosis in thymic tumors MAI Shijuan, XIONG Min, ZONG Yongsheng, LI Zhi, RAO Huilan. Department of Pathology, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou, 510089
【Abstract】 Objective To investigate the incidence of thymic tumors in Guangzhou, its association with EBV infection and the cell proliferation and apoptosis characteristics of these tumors. Methods EBV encoded small RNAs (EBERs) were detected in 43 thymic tumors and 7 thymic hyperplasia samples by use of in situ hybridization, EBNA-1, LMP-1, PCNA, bcl-2 and p53 were examined using immunohistochemical methods, cell apoptosis was evaluated by TUNEL (TdT-mediated dUTP-X nick end labelling) in situ cell death detection kit. Results 1. Thymic diseases only accounted for 0.057% of biopsies in the Guangzhou area. Thymic tumor and hyperplasia accounted for 74.7% and 18.6% in thymic diseases respectively. Thymic lymphoepithelimoa-like carcinoma (LELC) occurred in 2.7% of thymic tumors. 2. EBV encoded products (EBERs, EBNA-1 and LMP-1) were not detected in 50 thymic disease specimens. 3. Marked proliferation (3+-4+) grade thymomas (0/18 cases) was much lower than that of thymic carcinomas (10/20 cases), and the marked apoptic (2+-4+) grade was higher in thymomas (15/18) than the thymic carcinomas (13/20). 4. The p53 protein accumulation rate in thymic carcinomas (8/20) was significantly higher than that of thymomas (1/18). The apoptotic grade is significantly related to p53 accumulation in thymic epithelial tumors. 5. The bcl-2 over expression could be detected both in thymomas and thymic carcinomas. Conclusions 1. Thymic diseases, including thymic LELC, is very rare in Guangzhou and is not closely associated with EBV infection. 2. Thymic carcinomas have a relatively rapid growth rate compared to thymomas. 3. p53 gene mutation may play an important role in the carcinogenesis of thymic carcinoma, and bcl-2 over-expression may also be involved in the evolution of thymic epithelial tumors. 4. Wild type p53 protein may exert an apoptosis-inducing function in thymic epithelial tumors, including thymomas and carcinomas, and a proliferation inhibiting function only in thymomas.
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【Key words】 Thymus neoplasms Herpesvirus 4, Human Proliferation Apoptosis
广州地区是鼻咽癌的高发区。鼻咽癌发生于“淋巴上皮性器官”，且与EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)感染有密切的联系。胸腺也是一个“淋巴上皮性器官”，也可发生淋巴上皮瘤样癌。我们统计胸腺肿瘤在广州地区5个医院活检中的发现率，并进行了EB病毒基因组的检测，同时也研究了胸腺肿瘤细胞增殖和凋亡指数及其相关基因p53和bcl-2的表达特征。
材料与方法
1.材料：收集中山医科大学病理教研室、中山医科大学附属孙逸仙纪念医院、中山医科大学附属肿瘤医院、广州市第一人民医院和广州医学院第一附属医院1982～1997年608 032例活检中查出的胸腺疾病345例，对其进行了临床病理分析，并随机选出43例胸腺肿瘤和7例胸腺增生进行了组织病理学研究。
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2.方法：免疫组化染色检测细胞角蛋白，白细胞共同抗原，UCHL-1，L-26，EBNA-1，LMP-1，p53，bcl-2和增殖细胞核抗原(PCNA)，使用DAKO公司的LSAB试剂盒(K 0681)和第一抗体。原位杂交检测EBV编码的小分子RNA1和RNA2(EBERs)，采用DAKO公司的试剂盒(K 0046)和探针(Y 0017)。原位细胞凋亡检测采用原位缺如末端标记法(TdT-mediated dUTP-X nick end labeling, TUNEL)，使用Boehringer Mannheim公司的末端标记检测试剂盒(目录号：1 684 809)。实验步骤按试剂盒说明书进行。EBNA-1，LMP-1，bcl-2，PCNA及EBERs检测结果均按下列标准分级：-：未见阳性细胞；+：阳性细胞占1%～25%；++：26%～50%；+++：51%～75%；++++：>76%。因正常组织中应无bcl-2表达，故bcl-2检测如阴性为不表达；bcl-2检测若阳性(不论+，++，+++，++++)均为过表达。PCNA检测+～++为低度增殖，+++～++++为高度增殖。p53的分级标准为：-：未见阳性细胞；+：阳性细胞占1%～10%；++：11%～50%；+++：51%～75%；++++：76%～100%。因野生型p53蛋白半衰期短，一般在细胞中检测不出，但有时也可有少量细胞显示核阳性。根据经验，我们认为p53-～+为无p53蛋白积聚，++～++++为p53蛋白积聚。
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凋亡等级的标准为：-：未见阳性细胞；+：每个低倍视野中阳性细胞平均为1～5个；++：6～15个；+++：16～25个；++++：>26个。凋亡等级-～+为低级数凋亡，++～++++为高级数凋亡。上述免疫组化，原位杂交和原位细胞凋亡检测中均设有阳性和阴性对照。
3.统计学处理：样本率的比较用R×C表资料的χ2检验，样本数<40时用SPSS统计软件计算确切概率。
结果
1.胸腺疾病的临床特点：在广州市5所医院过去15年608 032例活检中，有345例(0.06%)是胸腺疾病，其中胸腺肿瘤最常见有258例(74.7%)，胸腺增生64例(18.6%)，胸腺囊肿较少见，只有23例(6.7%)。胸腺增生多见于青少年，平均21.2岁，女性多于男性，合并重症肌无力较常见(85.9%)。胸腺肿瘤多见于中年人，平均44.6岁，男性多于女性。其中，良性非侵袭性胸腺瘤最多见，占70.9%(183/258例)；恶性侵袭性胸腺瘤和胸腺癌分别占12.4%(32/258例)和12.8%(33/258例)；胸腺非上皮性肿瘤较少见，只占3.9%(10/258例)，且未见合并重症肌无力，胸腺癌的重症肌无力合并率(16.7%)略少于良性(26.9%)和恶性胸腺瘤(34.6%)，但差异无统计学意义。33例胸腺癌中有7例为淋巴上皮瘤样癌，仅占胸腺肿瘤的2.7%(7/258例)；非淋巴上皮瘤样癌26例，包括鳞癌(高、中、低分化)，腺癌，腺鳞癌，小细胞鳞癌，未分化癌，梭形细胞癌，混合性癌。胸腺淋巴上皮瘤样癌与非淋巴上皮瘤样癌在发病年龄，男女比例，重症肌无力的合并率等方面均无明显差异。前者的转移率(57.1%)似较后者(15.4%)为高，但无统计学差异。胸腺淋巴上皮瘤样癌在年龄范围，平均发病年龄，男女比例方面均与鼻咽癌相似[1]。
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2.43例胸腺肿瘤和7例胸腺增生中EBV基因组的检测：在43例胸腺肿瘤和7例胸腺增生中，均未检测到EBV编码的RNA(EBERs)及蛋白(EBNA-1和LMP-1)的表达。所设的阴性和阳性对照均显示出正确的结果，部分病例还进行了重复检测。
3.38例胸腺上皮性肿瘤中增殖和凋亡等级的检测：18例良、恶性胸腺瘤的PCNA等级均在-～+之间，其中15例(83.3%，15/18例)呈高级数凋亡(+++～++++，图1)；而20例胸腺癌中有10例PCNA染色(+++～++++，图2)呈高级数凋亡者有13例(65.0%，13/20例)。
图1 恶性侵袭性胸腺瘤示大量凋亡细胞 LSAB法×50
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图2 胸腺梭形细胞癌示癌巢中大量PCNA核阳性的肿瘤细胞 LSAB法×50
4.38例胸腺上皮性肿瘤中p53和bcl-2的表达及其与增殖和凋亡的关系：38例胸腺上皮性肿瘤的p53蛋白表达率(+～++++)达86.8%(33/38例，图3)。其中，良性，恶性胸腺瘤和胸腺癌的p53蛋白表达率分别为87.5%(7/8例)，80.0%(8/10例)和90.0%(18/20例)。20例胸腺癌中p53蛋白积聚率为40%(8/20例)，高于18例胸腺瘤的5.6%(1/18例)，经统计学分析差异有显著性(χ2=6.218 5，Fisher′s P=0.014 9)。bcl-2在良性、恶性胸腺瘤及胸腺癌中均有过表达(图4)，其比例分别为12.5%(1/8例)，20.0%(2/10例)，35.0%(7/20例)。p53蛋白积聚与凋亡等级之间的关系见表1。
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图3 胸腺低分化鳞癌示癌巢中大量p53核阳性的肿瘤细胞 LSAB法×50
图4 胸腺低分化鳞癌示肿瘤细胞表达bcl-2胞浆胞膜阳性 LSAB法×50
表1 38例胸腺上皮性肿瘤中p53蛋白积聚与
凋亡等级之间的关系(例数)
p53
凋亡等级
-～+
++～++++
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-～+
4
25
++～++++
6
3
合计
10
28
χ2=9.902 5，Fisher′s，P=0.004 51
经统计学分析发现，在38例胸腺上皮性肿瘤中p53蛋白积聚与凋亡等级有密切的相关性(P=0.004 5)。
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在18例胸腺瘤中，17例无p53蛋白积聚者均呈低度增殖。20例胸腺癌中，p53蛋白积聚与增殖等级之间无相关性。
5.胸腺增生的临床病理特征：在64例胸腺增生中有25例发病于青春期以前(0～14岁)，男女之比为15∶10；39例发病于青春期后者，男女之比为9∶30，差异有显著性(χ2=8.861 5，P<0.005)。我们又分析了资料较完整的35例胸腺增生，发现真性增生30例，滤泡性增生仅5例；真性增生中63.3%(19/30例)发生于青春期前，而5例滤泡性增生均发生于青春期后；真性增生中男女比例相近，滤泡性增生中女性较多见。
讨论
1.据不全统计，文献中进行了EB病毒基因组检测的胸腺淋巴上皮瘤样癌共19例，其中仅4例显示瘤细胞核内EBERs阳性[2～5]。加上我们的7例阴性结果，胸腺淋巴上皮瘤样癌的EBERs阳性率为15.4%(4/26例)。另有5例采用Southern blot杂交方法为阳性，但不能确切定位于瘤细胞核内。因此，EB病毒感染与胸腺淋巴上皮瘤样癌的关系并不十分密切。虽然胸腺与鼻咽相似，也是一个淋巴上皮性器官，但胸腺位于纵隔内，与外界环境不相通；而鼻咽位于上呼吸道，与外界直接接触。EB病毒可直接感染鼻咽，从而在鼻咽癌的发生、发展中起作用；胸腺淋巴上皮瘤样癌中感染的EB病毒可能来源于外周血B淋巴细胞。一般人体外周血内没有携带EB病毒的B淋巴细胞，即使有，其含量也十分稀少，因此胸腺淋巴上皮瘤样癌感染EB病毒的机会就较少。此外，鼻咽和胸腺的上皮细胞对EB病毒的易感性方面也可能有所不同。
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2.胸腺癌与胸腺瘤相比增殖等级较高，而凋亡等级较低，因此，胸腺癌比胸腺瘤生长较快。Tateyama等[6]研究29例胸腺上皮性肿瘤后也得出了与我们同样的结论。因此我们认为，Rosai[7]把胸腺肿瘤分为胸腺瘤(包括良性非侵袭性胸腺瘤和恶性侵袭性胸腺瘤)和胸腺癌是有其临床病理学意义和实用价值的。良性和恶性胸腺瘤均无明显的细胞异型性，生长缓慢，前者无浸润和转移，显然是一种良性肿瘤，而后者呈浸润性生长，并可发生转移，可被认为是一种交界性肿瘤；胸腺癌具有明显的细胞异型性，生长较快，有侵袭性，可发生转移，确实是一种恶性肿瘤。
3.胸腺癌中p53蛋白积聚率显著高于胸腺瘤，因此p53基因突变在胸腺癌的发生中可能起重要的作用。文献报道胸腺上皮性肿瘤中p53的改变，总的结果是p53蛋白的表达率较高(60.5%，69/114例)[8～10]，而p53基因的突变率却较低。本文38例胸腺上皮性肿瘤中p53蛋白的表达率也达86.8%(33/38例)。但是，大多数学者认为p53蛋白积聚(++～++++)才能代表突变型p53蛋白。本文胸腺上皮性肿瘤中p53蛋白的积聚率为23.7%(9/38例)，与Weirich[10]所报道的22.2%接近。Bcl-2在3种胸腺上皮性肿瘤中均有过表达，且过表达率从良性、恶性胸腺瘤到胸腺癌呈逐渐升高的趋势。这说明bcl-2的过表达在胸腺上皮性肿瘤的发生中可能也有一定的作用。曾有报道，有关检测胸腺上皮性肿瘤中bcl-2的表达，其表达率也随肿瘤的恶性度升高而升高[11]。
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4.38例胸腺上皮性肿瘤中p53蛋白积聚和凋亡等级密切相关。因此，在无p53蛋白积聚的胸腺上皮性肿瘤组织中所存在的野生型p53蛋白，可能具有诱导细胞凋亡的功能，而使瘤细胞出现高级数凋亡；而在有p53蛋白积聚的组织中，p53基因发生突变，失去其诱导细胞凋亡的功能，故凋亡等级降低。因此，胸腺上皮性肿瘤组织中p53基因突变与凋亡等级有密切的联系。野生型p53蛋白在大多数良性和恶性胸腺瘤中可能发挥了抑制细胞增殖的作用；但在胸腺癌中二者无相关性。我们知道，野生型p53蛋白必须通过一系列细胞周期相关蛋白，例如WAF1/p21/Cip1，pRb，Cdk等才能发挥其抑制细胞增殖的作用，在胸腺癌中这些p53的靶基因可能也有改变。因此，研究胸腺癌中p53蛋白对增殖的作用必须考虑上述各种蛋白有无改变。
本课题受国家自然科学基金资助(基金编号39730200-Ⅱ)
参考文献
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10 Weirich G, Schneider P, Fellbaum C, et al. p53 alterations in thymic epithelial tumours. Virchows Arch, 1997, 431:17～23.
11 Chen FF, Yan JJ, Jin YT, et al. Detection of bcl-2 and p53 in thymoma: expression of bcl-2 as a reliable maker of tumor aggressiveness. Hum Pathol, 1996, 27:1089-1092.
(收稿：1998-06-30 修回：1999-01-11), 百拇医药
单位：510089 中山医科大学病理学教研室(买世娟、熊敏、宗永生、李智)，附属肿瘤医院病理科(饶慧兰)
关键词：胸腺肿瘤；疱疹病毒4型；人；增殖；凋亡
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【Abstract】 Objective To investigate the incidence of thymic tumors in Guangzhou, its association with EBV infection and the cell proliferation and apoptosis characteristics of these tumors. Methods EBV encoded small RNAs (EBERs) were detected in 43 thymic tumors and 7 thymic hyperplasia samples by use of in situ hybridization, EBNA-1, LMP-1, PCNA, bcl-2 and p53 were examined using immunohistochemical methods, cell apoptosis was evaluated by TUNEL (TdT-mediated dUTP-X nick end labelling) in situ cell death detection kit. Results 1. Thymic diseases only accounted for 0.057% of biopsies in the Guangzhou area. Thymic tumor and hyperplasia accounted for 74.7% and 18.6% in thymic diseases respectively. Thymic lymphoepithelimoa-like carcinoma (LELC) occurred in 2.7% of thymic tumors. 2. EBV encoded products (EBERs, EBNA-1 and LMP-1) were not detected in 50 thymic disease specimens. 3. Marked proliferation (3+-4+) grade thymomas (0/18 cases) was much lower than that of thymic carcinomas (10/20 cases), and the marked apoptic (2+-4+) grade was higher in thymomas (15/18) than the thymic carcinomas (13/20). 4. The p53 protein accumulation rate in thymic carcinomas (8/20) was significantly higher than that of thymomas (1/18). The apoptotic grade is significantly related to p53 accumulation in thymic epithelial tumors. 5. The bcl-2 over expression could be detected both in thymomas and thymic carcinomas. Conclusions 1. Thymic diseases, including thymic LELC, is very rare in Guangzhou and is not closely associated with EBV infection. 2. Thymic carcinomas have a relatively rapid growth rate compared to thymomas. 3. p53 gene mutation may play an important role in the carcinogenesis of thymic carcinoma, and bcl-2 over-expression may also be involved in the evolution of thymic epithelial tumors. 4. Wild type p53 protein may exert an apoptosis-inducing function in thymic epithelial tumors, including thymomas and carcinomas, and a proliferation inhibiting function only in thymomas.
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广州地区是鼻咽癌的高发区。鼻咽癌发生于“淋巴上皮性器官”，且与EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)感染有密切的联系。胸腺也是一个“淋巴上皮性器官”，也可发生淋巴上皮瘤样癌。我们统计胸腺肿瘤在广州地区5个医院活检中的发现率，并进行了EB病毒基因组的检测，同时也研究了胸腺肿瘤细胞增殖和凋亡指数及其相关基因p53和bcl-2的表达特征。
材料与方法
1.材料：收集中山医科大学病理教研室、中山医科大学附属孙逸仙纪念医院、中山医科大学附属肿瘤医院、广州市第一人民医院和广州医学院第一附属医院1982～1997年608 032例活检中查出的胸腺疾病345例，对其进行了临床病理分析，并随机选出43例胸腺肿瘤和7例胸腺增生进行了组织病理学研究。
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2.方法：免疫组化染色检测细胞角蛋白，白细胞共同抗原，UCHL-1，L-26，EBNA-1，LMP-1，p53，bcl-2和增殖细胞核抗原(PCNA)，使用DAKO公司的LSAB试剂盒(K 0681)和第一抗体。原位杂交检测EBV编码的小分子RNA1和RNA2(EBERs)，采用DAKO公司的试剂盒(K 0046)和探针(Y 0017)。原位细胞凋亡检测采用原位缺如末端标记法(TdT-mediated dUTP-X nick end labeling, TUNEL)，使用Boehringer Mannheim公司的末端标记检测试剂盒(目录号：1 684 809)。实验步骤按试剂盒说明书进行。EBNA-1，LMP-1，bcl-2，PCNA及EBERs检测结果均按下列标准分级：-：未见阳性细胞；+：阳性细胞占1%～25%；++：26%～50%；+++：51%～75%；++++：>76%。因正常组织中应无bcl-2表达，故bcl-2检测如阴性为不表达；bcl-2检测若阳性(不论+，++，+++，++++)均为过表达。PCNA检测+～++为低度增殖，+++～++++为高度增殖。p53的分级标准为：-：未见阳性细胞；+：阳性细胞占1%～10%；++：11%～50%；+++：51%～75%；++++：76%～100%。因野生型p53蛋白半衰期短，一般在细胞中检测不出，但有时也可有少量细胞显示核阳性。根据经验，我们认为p53-～+为无p53蛋白积聚，++～++++为p53蛋白积聚。
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凋亡等级的标准为：-：未见阳性细胞；+：每个低倍视野中阳性细胞平均为1～5个；++：6～15个；+++：16～25个；++++：>26个。凋亡等级-～+为低级数凋亡，++～++++为高级数凋亡。上述免疫组化，原位杂交和原位细胞凋亡检测中均设有阳性和阴性对照。
3.统计学处理：样本率的比较用R×C表资料的χ2检验，样本数<40时用SPSS统计软件计算确切概率。
结果
1.胸腺疾病的临床特点：在广州市5所医院过去15年608 032例活检中，有345例(0.06%)是胸腺疾病，其中胸腺肿瘤最常见有258例(74.7%)，胸腺增生64例(18.6%)，胸腺囊肿较少见，只有23例(6.7%)。胸腺增生多见于青少年，平均21.2岁，女性多于男性，合并重症肌无力较常见(85.9%)。胸腺肿瘤多见于中年人，平均44.6岁，男性多于女性。其中，良性非侵袭性胸腺瘤最多见，占70.9%(183/258例)；恶性侵袭性胸腺瘤和胸腺癌分别占12.4%(32/258例)和12.8%(33/258例)；胸腺非上皮性肿瘤较少见，只占3.9%(10/258例)，且未见合并重症肌无力，胸腺癌的重症肌无力合并率(16.7%)略少于良性(26.9%)和恶性胸腺瘤(34.6%)，但差异无统计学意义。33例胸腺癌中有7例为淋巴上皮瘤样癌，仅占胸腺肿瘤的2.7%(7/258例)；非淋巴上皮瘤样癌26例，包括鳞癌(高、中、低分化)，腺癌，腺鳞癌，小细胞鳞癌，未分化癌，梭形细胞癌，混合性癌。胸腺淋巴上皮瘤样癌与非淋巴上皮瘤样癌在发病年龄，男女比例，重症肌无力的合并率等方面均无明显差异。前者的转移率(57.1%)似较后者(15.4%)为高，但无统计学差异。胸腺淋巴上皮瘤样癌在年龄范围，平均发病年龄，男女比例方面均与鼻咽癌相似[1]。
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2.43例胸腺肿瘤和7例胸腺增生中EBV基因组的检测：在43例胸腺肿瘤和7例胸腺增生中，均未检测到EBV编码的RNA(EBERs)及蛋白(EBNA-1和LMP-1)的表达。所设的阴性和阳性对照均显示出正确的结果，部分病例还进行了重复检测。
3.38例胸腺上皮性肿瘤中增殖和凋亡等级的检测：18例良、恶性胸腺瘤的PCNA等级均在-～+之间，其中15例(83.3%，15/18例)呈高级数凋亡(+++～++++，图1)；而20例胸腺癌中有10例PCNA染色(+++～++++，图2)呈高级数凋亡者有13例(65.0%，13/20例)。
图1 恶性侵袭性胸腺瘤示大量凋亡细胞 LSAB法×50
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图2 胸腺梭形细胞癌示癌巢中大量PCNA核阳性的肿瘤细胞 LSAB法×50
4.38例胸腺上皮性肿瘤中p53和bcl-2的表达及其与增殖和凋亡的关系：38例胸腺上皮性肿瘤的p53蛋白表达率(+～++++)达86.8%(33/38例，图3)。其中，良性，恶性胸腺瘤和胸腺癌的p53蛋白表达率分别为87.5%(7/8例)，80.0%(8/10例)和90.0%(18/20例)。20例胸腺癌中p53蛋白积聚率为40%(8/20例)，高于18例胸腺瘤的5.6%(1/18例)，经统计学分析差异有显著性(χ2=6.218 5，Fisher′s P=0.014 9)。bcl-2在良性、恶性胸腺瘤及胸腺癌中均有过表达(图4)，其比例分别为12.5%(1/8例)，20.0%(2/10例)，35.0%(7/20例)。p53蛋白积聚与凋亡等级之间的关系见表1。
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图3 胸腺低分化鳞癌示癌巢中大量p53核阳性的肿瘤细胞 LSAB法×50
图4 胸腺低分化鳞癌示肿瘤细胞表达bcl-2胞浆胞膜阳性 LSAB法×50
表1 38例胸腺上皮性肿瘤中p53蛋白积聚与
凋亡等级之间的关系(例数)
p53
凋亡等级
-～+
++～++++
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-～+
4
25
++～++++
6
3
合计
10
28
χ2=9.902 5，Fisher′s，P=0.004 51
经统计学分析发现，在38例胸腺上皮性肿瘤中p53蛋白积聚与凋亡等级有密切的相关性(P=0.004 5)。
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在18例胸腺瘤中，17例无p53蛋白积聚者均呈低度增殖。20例胸腺癌中，p53蛋白积聚与增殖等级之间无相关性。
5.胸腺增生的临床病理特征：在64例胸腺增生中有25例发病于青春期以前(0～14岁)，男女之比为15∶10；39例发病于青春期后者，男女之比为9∶30，差异有显著性(χ2=8.861 5，P<0.005)。我们又分析了资料较完整的35例胸腺增生，发现真性增生30例，滤泡性增生仅5例；真性增生中63.3%(19/30例)发生于青春期前，而5例滤泡性增生均发生于青春期后；真性增生中男女比例相近，滤泡性增生中女性较多见。
讨论
1.据不全统计，文献中进行了EB病毒基因组检测的胸腺淋巴上皮瘤样癌共19例，其中仅4例显示瘤细胞核内EBERs阳性[2～5]。加上我们的7例阴性结果，胸腺淋巴上皮瘤样癌的EBERs阳性率为15.4%(4/26例)。另有5例采用Southern blot杂交方法为阳性，但不能确切定位于瘤细胞核内。因此，EB病毒感染与胸腺淋巴上皮瘤样癌的关系并不十分密切。虽然胸腺与鼻咽相似，也是一个淋巴上皮性器官，但胸腺位于纵隔内，与外界环境不相通；而鼻咽位于上呼吸道，与外界直接接触。EB病毒可直接感染鼻咽，从而在鼻咽癌的发生、发展中起作用；胸腺淋巴上皮瘤样癌中感染的EB病毒可能来源于外周血B淋巴细胞。一般人体外周血内没有携带EB病毒的B淋巴细胞，即使有，其含量也十分稀少，因此胸腺淋巴上皮瘤样癌感染EB病毒的机会就较少。此外，鼻咽和胸腺的上皮细胞对EB病毒的易感性方面也可能有所不同。
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2.胸腺癌与胸腺瘤相比增殖等级较高，而凋亡等级较低，因此，胸腺癌比胸腺瘤生长较快。Tateyama等[6]研究29例胸腺上皮性肿瘤后也得出了与我们同样的结论。因此我们认为，Rosai[7]把胸腺肿瘤分为胸腺瘤(包括良性非侵袭性胸腺瘤和恶性侵袭性胸腺瘤)和胸腺癌是有其临床病理学意义和实用价值的。良性和恶性胸腺瘤均无明显的细胞异型性，生长缓慢，前者无浸润和转移，显然是一种良性肿瘤，而后者呈浸润性生长，并可发生转移，可被认为是一种交界性肿瘤；胸腺癌具有明显的细胞异型性，生长较快，有侵袭性，可发生转移，确实是一种恶性肿瘤。
3.胸腺癌中p53蛋白积聚率显著高于胸腺瘤，因此p53基因突变在胸腺癌的发生中可能起重要的作用。文献报道胸腺上皮性肿瘤中p53的改变，总的结果是p53蛋白的表达率较高(60.5%，69/114例)[8～10]，而p53基因的突变率却较低。本文38例胸腺上皮性肿瘤中p53蛋白的表达率也达86.8%(33/38例)。但是，大多数学者认为p53蛋白积聚(++～++++)才能代表突变型p53蛋白。本文胸腺上皮性肿瘤中p53蛋白的积聚率为23.7%(9/38例)，与Weirich[10]所报道的22.2%接近。Bcl-2在3种胸腺上皮性肿瘤中均有过表达，且过表达率从良性、恶性胸腺瘤到胸腺癌呈逐渐升高的趋势。这说明bcl-2的过表达在胸腺上皮性肿瘤的发生中可能也有一定的作用。曾有报道，有关检测胸腺上皮性肿瘤中bcl-2的表达，其表达率也随肿瘤的恶性度升高而升高[11]。
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4.38例胸腺上皮性肿瘤中p53蛋白积聚和凋亡等级密切相关。因此，在无p53蛋白积聚的胸腺上皮性肿瘤组织中所存在的野生型p53蛋白，可能具有诱导细胞凋亡的功能，而使瘤细胞出现高级数凋亡；而在有p53蛋白积聚的组织中，p53基因发生突变，失去其诱导细胞凋亡的功能，故凋亡等级降低。因此，胸腺上皮性肿瘤组织中p53基因突变与凋亡等级有密切的联系。野生型p53蛋白在大多数良性和恶性胸腺瘤中可能发挥了抑制细胞增殖的作用；但在胸腺癌中二者无相关性。我们知道，野生型p53蛋白必须通过一系列细胞周期相关蛋白，例如WAF1/p21/Cip1，pRb，Cdk等才能发挥其抑制细胞增殖的作用，在胸腺癌中这些p53的靶基因可能也有改变。因此，研究胸腺癌中p53蛋白对增殖的作用必须考虑上述各种蛋白有无改变。
本课题受国家自然科学基金资助(基金编号39730200-Ⅱ)
参考文献
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10 Weirich G, Schneider P, Fellbaum C, et al. p53 alterations in thymic epithelial tumours. Virchows Arch, 1997, 431:17～23.
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(收稿：1998-06-30 修回：1999-01-11), 百拇医药