辐射诱发细胞DNA聚合酶变化
作者：杨素霞 樊飞跃 李煜 曹珍山 刘国廉
单位：(100850 北京放射医学研究所)
关键词：
中华放射医学与防护杂志000315 DNA的复制是通过核苷酸聚合成核苷酸链实现的，而DNA聚合酶(p olymerase,DNA-P)是DNA合成中的关键酶，它与DNA的复制、修复、重组密切相关，其基本 功 能是催化4种脱氧核苷酸合成DNA，因此DNA-P与细胞的生长、繁殖密切相关。我们在辐射诱 发Wistar大鼠肺细胞转化过程中，检测了DNA-P的变化，以探讨细胞转化与DNA-P的关系。
一、材料和方法
1.125I标记检测DNA-P药盒(上海海军医学研究所提供)。
, http://www.100md.com 2.实验分组①对照组：正常Wistar大鼠肺细胞；②照射组：Wistar大鼠肺细胞经 60Co γ射线照射，吸收剂量为4.0 Gy；③肿瘤细胞组：Wistar大鼠肝癌细胞(HTC)。
3.方法①本实验选用原代细胞Wistar大鼠肺细胞，60Co-γ射线一次照 射4 G y，细胞常规培养至10、20、30代时，按药盒检测程序分别制备DNA-P粗酶(DNA-P的混合物 ) ，FT-625125I放免测量仪测定沉淀物放射性(检测条件的控制按药盒说明)。②各组 细 胞DNA-P活性以沉淀物中125I放射测量计数(cpm)表示。DNA-P相对活性等于各 组 沉淀物中125I放射测量结果(cpm)除以0.1 μl工作液中125I放射测 量结果(cpm)。
二、结果和讨论
, http://www.100md.com 从表1的结果可以看到，照射后第10代，照射组细胞DNA-P活性与对照组比较没有明显的增 加； 而肿瘤细胞阳性对照组DNA-P活性明显高于对照组，经t检验差异具有非常显著性(P <0. 01)；照射后第20代，照射组细胞DNA-P活性增高，与对照组比较差异具有非常显著性(P <0.01)；照射后第30代，照射组细胞DNA-P活性进一步增高(P<0.01)。
表1 照射后不同时间各组细胞DNA-P 活性(
±s) 分组
DNA-P活性(*min-1)
10代
20代
30代
, http://www.100md.com 对照组
289.00±31.76
218.80±32.86
147.20±27.78
4Gy
293.20±35.00
393.00±59.72*
598.00±68.33*
HTC
1850.80±195.72*
1291.20±267.06*
, 百拇医药
922.40±97.54*
注：* 与对照组比较，P<0.01，n=5，本底值为92.8±9.04
分析照射后不同时间各组细胞DNA-P的相对活性计算结果可以看到，照射后的第 10、20和30 代的Wistar大鼠对照组细胞和肿瘤细胞组DNA-P相对活性没有明显改变，而照射组细 胞DNA-P相对活性则随着照射后时间的延长呈现逐渐增加的变化趋势(图1)。
DNA-P是DNA合成的关键酶，主要参与DNA的复制、修复和链置换合成。DNA-P酶反映细胞增 殖 活性，其活性随着细胞生长速度的增加而升高。本实验观察到，接受4 Gy γ射线照射的Wis tar大鼠肺细胞，随着照射后时间的延长，DNA-P活性不断增加，表 明细胞的增殖能力不断 增 加，而HTC肿瘤细胞DNA-P活性明显高于正常Wistar大鼠肺细胞，且经过一定时间传代处置 后 ，HTC细胞DNA-P相对活性基本保持不变，说明DNA-P活性测定可以用于良、恶性细胞的对 比分析，且本实验方法稳定性较好。
, 百拇医药
图1 照后不同时间各组细胞DNA-P相对活性
在另一项实验中我们观察了受4 Gy γ射线照射后的Wistar大鼠肺细胞形态学转化和非锚着 依 赖性生长能力的获得结果表明，DNA-P活性在细胞发生形态学转化和获得非锚着依赖性生长 能力之前的第20代即已出现升高。这一特点提示：DNA-P活性的测定可被用于细胞转化的早 期观察指标。
参考文献
1 李汉西.以DNA多聚酶为靶点筛选抗癌药的新方法的初步探讨.癌症，1993，12 ：473-475.
2 李雅莉.DNA聚合酶测定在肺癌诊断中的应用价值.陕西医学杂志，1997，26：223-2 25.
3 高毅.DNA聚合酶与肿瘤.肿瘤，1992，12：90-92.
(收稿日期:1999-07-14), 百拇医药
单位：(100850 北京放射医学研究所)
关键词：
中华放射医学与防护杂志000315 DNA的复制是通过核苷酸聚合成核苷酸链实现的，而DNA聚合酶(p olymerase,DNA-P)是DNA合成中的关键酶，它与DNA的复制、修复、重组密切相关，其基本 功 能是催化4种脱氧核苷酸合成DNA，因此DNA-P与细胞的生长、繁殖密切相关。我们在辐射诱 发Wistar大鼠肺细胞转化过程中，检测了DNA-P的变化，以探讨细胞转化与DNA-P的关系。
一、材料和方法
1.125I标记检测DNA-P药盒(上海海军医学研究所提供)。
, http://www.100md.com 2.实验分组①对照组：正常Wistar大鼠肺细胞；②照射组：Wistar大鼠肺细胞经 60Co γ射线照射，吸收剂量为4.0 Gy；③肿瘤细胞组：Wistar大鼠肝癌细胞(HTC)。
3.方法①本实验选用原代细胞Wistar大鼠肺细胞，60Co-γ射线一次照 射4 G y，细胞常规培养至10、20、30代时，按药盒检测程序分别制备DNA-P粗酶(DNA-P的混合物 ) ，FT-625125I放免测量仪测定沉淀物放射性(检测条件的控制按药盒说明)。②各组 细 胞DNA-P活性以沉淀物中125I放射测量计数(cpm)表示。DNA-P相对活性等于各 组 沉淀物中125I放射测量结果(cpm)除以0.1 μl工作液中125I放射测 量结果(cpm)。
二、结果和讨论
, http://www.100md.com 从表1的结果可以看到，照射后第10代，照射组细胞DNA-P活性与对照组比较没有明显的增 加； 而肿瘤细胞阳性对照组DNA-P活性明显高于对照组，经t检验差异具有非常显著性(P <0. 01)；照射后第20代，照射组细胞DNA-P活性增高，与对照组比较差异具有非常显著性(P <0.01)；照射后第30代，照射组细胞DNA-P活性进一步增高(P<0.01)。
表1 照射后不同时间各组细胞DNA-P 活性(
±s) 分组DNA-P活性(*min-1)
10代
20代
30代
, http://www.100md.com 对照组
289.00±31.76
218.80±32.86
147.20±27.78
4Gy
293.20±35.00
393.00±59.72*
598.00±68.33*
HTC
1850.80±195.72*
1291.20±267.06*
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922.40±97.54*
注：* 与对照组比较，P<0.01，n=5，本底值为92.8±9.04
分析照射后不同时间各组细胞DNA-P的相对活性计算结果可以看到，照射后的第 10、20和30 代的Wistar大鼠对照组细胞和肿瘤细胞组DNA-P相对活性没有明显改变，而照射组细 胞DNA-P相对活性则随着照射后时间的延长呈现逐渐增加的变化趋势(图1)。
DNA-P是DNA合成的关键酶，主要参与DNA的复制、修复和链置换合成。DNA-P酶反映细胞增 殖 活性，其活性随着细胞生长速度的增加而升高。本实验观察到，接受4 Gy γ射线照射的Wis tar大鼠肺细胞，随着照射后时间的延长，DNA-P活性不断增加，表 明细胞的增殖能力不断 增 加，而HTC肿瘤细胞DNA-P活性明显高于正常Wistar大鼠肺细胞，且经过一定时间传代处置 后 ，HTC细胞DNA-P相对活性基本保持不变，说明DNA-P活性测定可以用于良、恶性细胞的对 比分析，且本实验方法稳定性较好。
, 百拇医药
图1 照后不同时间各组细胞DNA-P相对活性
在另一项实验中我们观察了受4 Gy γ射线照射后的Wistar大鼠肺细胞形态学转化和非锚着 依 赖性生长能力的获得结果表明，DNA-P活性在细胞发生形态学转化和获得非锚着依赖性生长 能力之前的第20代即已出现升高。这一特点提示：DNA-P活性的测定可被用于细胞转化的早 期观察指标。
参考文献
1 李汉西.以DNA多聚酶为靶点筛选抗癌药的新方法的初步探讨.癌症，1993，12 ：473-475.
2 李雅莉.DNA聚合酶测定在肺癌诊断中的应用价值.陕西医学杂志，1997，26：223-2 25.
3 高毅.DNA聚合酶与肿瘤.肿瘤，1992，12：90-92.
(收稿日期:1999-07-14), 百拇医药