养阴抗毒散对X射线照射小鼠抗氧化能力的影响
作者：侯军峰 张盈华 史恒军 张利朝 郝晓柯
单位：侯军峰(710038 西安，第四军医大学第二附属医院临床实验科)；张盈华(710038 西安，第四军医大学第二附属医院临床实验科)；史恒军(第四军医大学第二附属医院中医科)；张利朝(710038 西安，第四军医大学第二附属医院临床实验科)；郝晓柯(710038 西安，第四军医大学第二附属医院临床实验科)
关键词：
中华放射医学与防护杂志000420 养阴抗毒散是一种纯中药制剂，临床应用于放疗副反应的治疗具有一定效果，我们的实验已证实养阴抗毒散对半致死剂量X射线照射小鼠的白细胞数和红细胞免疫粘附功能有提高作用。进一步研究发现，养阴抗毒散对于X射线照射后小鼠的总抗氧化能力、抗氧化酶类也有一定积极作用，现将实验结果报道如下。
一、材料和方法
, 百拇医药
1.中药：养阴抗毒散由西洋参、羚羊角粉、沙参、石斛、紫草等10余味中药组成(本院制剂中心制备)。灌胃悬液按蒸馏水30 ml：10 g生药比例混合而成。
2.动物及分组：昆明种雄性小鼠，鼠龄8周，体重(20±2)g(购自本校动物中心)。小鼠随机分为3组：正常对照组(A)，15只，不予任何处理；照射对照组(B)，15只，给予X射线照射，从照射前3天开始给予生理盐水灌胃，0.3 ml，2次/d；照射中药组(C)，15只，给予与B组相同的X射线照射，从照射前3天开始给予中药溶液灌胃，0.3 ml，2次/d。B、C两组均连续灌胃1周。
3.照射条件：Siemens X射线治疗机，照射源距小鼠100cm，射野为30 cm×30 cm，吸收剂量率为2 Gy/min，吸收剂量为6 Gy，行一次性全身照射。
表1 正常及6 Gy X射线照射后小鼠抗氧化能力和酶类的情况(
±s) 组别
, 百拇医药
n
观测指标
T-AOC(U/ml)
Cat(U/g Hb)
SOD(Nu/ml)
MDA(nmol/ml)
A
15
17.22±3.75
73.98±10.77
94.88±26.61
15.76±0.67
, http://www.100md.com
B
15
12.98±2.69**
46.40±9.08**
76.33±18.63*
19.32±2.36**
C
15
14.68±3.13
54.57±6.96**△
87.33±17.26
, http://www.100md.com
17.21±1.52**△△
注：B、C组与A组比，*P<0.05，**P<0.01；B组与C组比，△P<0.05，△△P<0.01 4.测定方法：总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(Cat)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)均采用南京聚力生物医学工程研究所试剂盒，所用方法均为化学比色法。其中过氧化氢酶采用紫外分光光度计，标本为红细胞溶血液，余均采用721分光光度计，标本为血清。小鼠于照射后第4天取血，制成溶血液、提取血清，严格按试剂说明步骤操作。
5.统计学处理：采用SPSS软件进行方差分析及t检验。
二、结果
T-AOC、Cat、SOD及MDA结果见表1。
, http://www.100md.com
1.T-AOC：A组与B组组间差异有统计学意义(P<0.01)，A组与C组及C组与B组之间差异均无显著性。虽然如此，但3组间存在一种趋势，B组、C组、A组的抗氧化能力是顺序递增的。
2.Cat水平：3组两两比较，A组高于C组和B组(P<0.01)，C组高于B组(P<0.05)，说明处理因素的作用显著不同。
3.SOD水平：3组相比较，A组显著高于B组(P<0.05)，其余组间差异无显著性，但像总抗氧化能力一样，B组、C组、A组的超氧化物歧化酶有顺序递增的趋势。
4.MDA水平：A组显著低于B组和C组(P<0.01)，C组低于B组(P<0.01)，说明处理因素不同，自由基攻击生物膜发生脂质过氧化作用导致的细胞损伤也各不相同。
三、讨论
电离辐射对于生物大分子的损伤既有能量传递的直接作用，又有通过水的辐解反应大量产生自由基的间接作用。水分子的主要辐解产物有.OH、.H、eaq- 3种自由基。对于DNA，自由基可使其碱基、核糖氧化，从而引起DNA结构改变。对于各种生物膜，自由基可引发其中磷脂发生脂质过氧化反应，从而造成生物膜中饱和与不饱和脂肪酸比例失衡，改变膜结构的刚柔特性、增加膜的通透性、甚至发生崩解。对于蛋白质，自由基可造成其一级结构与空间构象发生损伤，在一级结构上表现出肽链断裂、氨基酸组成变化、出现异常氨基酸，空间构象上表现为紧密的结构趋于松散、β折叠含量减少、无规则卷曲明显增加等[1-3]。
, 百拇医药
生物体本身有一系列清除自由基的酶类，统称为抗氧化酶。过氧化氢酶可以①在红细胞中清除H2O2，减少.OH，防止血红蛋白氧化为高铁血红蛋白；②在微粒体中清除多种酶促反应产生的H2O2；③清除线粒体中由超氧化物歧化酶催化
自由基的歧化反应所产生、并进入微粒体的H2O2。超氧化物歧化酶催化歧化反应所产生的H2O2，要由过氧化氢酶或过氧化物酶进一步分解为H2O，超氧化物歧化酶的抗氧化作用才能体现。但可经Haber Weiss反应生成对机体毒性更强的.OH，故SOD清除，可有效的降低.OH[4]。总抗氧化能力包括各种抗氧化酶的作用，同时还包括VC、VE、β-胡罗卜素等非酶类分解自由基和活性氧的作用。丙二醛是生物膜中的多不饱和脂肪酸受自由基攻击后发生脂质过氧化作用的产物，它反映了机体内脂质过氧化的程度，间接反映了细胞损伤的程度。
, 百拇医药
从实验结果看，X射线照射后小鼠的总抗氧化能力和抗氧化酶的水平显著下降，从而各种自由基对DNA、蛋白质和生物膜的损伤就会增多、加重，MDA的升高也证实了这一点。C组小鼠的Cat虽然也显著下降，但仍显著高于B组；MDA虽高于A组，但低于B组；T-AOC、SOD与A组及B组差异无显著性，可见养阴抗毒散对于提高Cat水平、减少细胞损伤有一定作用，这可能是养阴抗毒散辐射防护作用的一条重要机理。由于养阴抗毒散是中药复方，成分复杂，其辐射防护作用机理也可能是多方面的，在细胞因子的诱生和调控方面是否也有作用，有待进一步研究证实。
参考文献
1，Li PF,Fang YZ,Lu X.Oxidative modification of bovine erythrocyte superoxide dismutase by hydrogen peroxide and ascorbate-Fe(III).Biochem Mol Biol Int,1994,29:929-937.
, http://www.100md.com
2，李培峰，方允中，涂光忠.用1H NMR研究活性氧对CuSn-SOD结构的影响.科学通报，1994，39：1614-1617.
3，Li PF,Fang YZ,Li YZ.Effects of ascorbate-Fe(III) and hydrogen peroxide on the immunological property of cuprozinc-superoxide dismutase.Med Sci Res,1993,21:521-523.
4，夏寿萱.放射生物学.北京：军事医学科学出版社.1998.37-42.
(收稿日期:1999-09-02), http://www.100md.com
单位：侯军峰(710038 西安，第四军医大学第二附属医院临床实验科)；张盈华(710038 西安，第四军医大学第二附属医院临床实验科)；史恒军(第四军医大学第二附属医院中医科)；张利朝(710038 西安，第四军医大学第二附属医院临床实验科)；郝晓柯(710038 西安，第四军医大学第二附属医院临床实验科)
关键词：
中华放射医学与防护杂志000420 养阴抗毒散是一种纯中药制剂，临床应用于放疗副反应的治疗具有一定效果，我们的实验已证实养阴抗毒散对半致死剂量X射线照射小鼠的白细胞数和红细胞免疫粘附功能有提高作用。进一步研究发现，养阴抗毒散对于X射线照射后小鼠的总抗氧化能力、抗氧化酶类也有一定积极作用，现将实验结果报道如下。
一、材料和方法
, 百拇医药
1.中药：养阴抗毒散由西洋参、羚羊角粉、沙参、石斛、紫草等10余味中药组成(本院制剂中心制备)。灌胃悬液按蒸馏水30 ml：10 g生药比例混合而成。
2.动物及分组：昆明种雄性小鼠，鼠龄8周，体重(20±2)g(购自本校动物中心)。小鼠随机分为3组：正常对照组(A)，15只，不予任何处理；照射对照组(B)，15只，给予X射线照射，从照射前3天开始给予生理盐水灌胃，0.3 ml，2次/d；照射中药组(C)，15只，给予与B组相同的X射线照射，从照射前3天开始给予中药溶液灌胃，0.3 ml，2次/d。B、C两组均连续灌胃1周。
3.照射条件：Siemens X射线治疗机，照射源距小鼠100cm，射野为30 cm×30 cm，吸收剂量率为2 Gy/min，吸收剂量为6 Gy，行一次性全身照射。
表1 正常及6 Gy X射线照射后小鼠抗氧化能力和酶类的情况(
±s) 组别, 百拇医药
n
观测指标
T-AOC(U/ml)
Cat(U/g Hb)
SOD(Nu/ml)
MDA(nmol/ml)
A
15
17.22±3.75
73.98±10.77
94.88±26.61
15.76±0.67
, http://www.100md.com
B
15
12.98±2.69**
46.40±9.08**
76.33±18.63*
19.32±2.36**
C
15
14.68±3.13
54.57±6.96**△
87.33±17.26
, http://www.100md.com
17.21±1.52**△△
注：B、C组与A组比，*P<0.05，**P<0.01；B组与C组比，△P<0.05，△△P<0.01 4.测定方法：总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(Cat)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)均采用南京聚力生物医学工程研究所试剂盒，所用方法均为化学比色法。其中过氧化氢酶采用紫外分光光度计，标本为红细胞溶血液，余均采用721分光光度计，标本为血清。小鼠于照射后第4天取血，制成溶血液、提取血清，严格按试剂说明步骤操作。
5.统计学处理：采用SPSS软件进行方差分析及t检验。
二、结果
T-AOC、Cat、SOD及MDA结果见表1。
, http://www.100md.com
1.T-AOC：A组与B组组间差异有统计学意义(P<0.01)，A组与C组及C组与B组之间差异均无显著性。虽然如此，但3组间存在一种趋势，B组、C组、A组的抗氧化能力是顺序递增的。
2.Cat水平：3组两两比较，A组高于C组和B组(P<0.01)，C组高于B组(P<0.05)，说明处理因素的作用显著不同。
3.SOD水平：3组相比较，A组显著高于B组(P<0.05)，其余组间差异无显著性，但像总抗氧化能力一样，B组、C组、A组的超氧化物歧化酶有顺序递增的趋势。
4.MDA水平：A组显著低于B组和C组(P<0.01)，C组低于B组(P<0.01)，说明处理因素不同，自由基攻击生物膜发生脂质过氧化作用导致的细胞损伤也各不相同。
三、讨论
电离辐射对于生物大分子的损伤既有能量传递的直接作用，又有通过水的辐解反应大量产生自由基的间接作用。水分子的主要辐解产物有.OH、.H、eaq- 3种自由基。对于DNA，自由基可使其碱基、核糖氧化，从而引起DNA结构改变。对于各种生物膜，自由基可引发其中磷脂发生脂质过氧化反应，从而造成生物膜中饱和与不饱和脂肪酸比例失衡，改变膜结构的刚柔特性、增加膜的通透性、甚至发生崩解。对于蛋白质，自由基可造成其一级结构与空间构象发生损伤，在一级结构上表现出肽链断裂、氨基酸组成变化、出现异常氨基酸，空间构象上表现为紧密的结构趋于松散、β折叠含量减少、无规则卷曲明显增加等[1-3]。
, 百拇医药
生物体本身有一系列清除自由基的酶类，统称为抗氧化酶。过氧化氢酶可以①在红细胞中清除H2O2，减少.OH，防止血红蛋白氧化为高铁血红蛋白；②在微粒体中清除多种酶促反应产生的H2O2；③清除线粒体中由超氧化物歧化酶催化
自由基的歧化反应所产生、并进入微粒体的H2O2。超氧化物歧化酶催化歧化反应所产生的H2O2，要由过氧化氢酶或过氧化物酶进一步分解为H2O，超氧化物歧化酶的抗氧化作用才能体现。但可经Haber Weiss反应生成对机体毒性更强的.OH，故SOD清除，可有效的降低.OH[4]。总抗氧化能力包括各种抗氧化酶的作用，同时还包括VC、VE、β-胡罗卜素等非酶类分解自由基和活性氧的作用。丙二醛是生物膜中的多不饱和脂肪酸受自由基攻击后发生脂质过氧化作用的产物，它反映了机体内脂质过氧化的程度，间接反映了细胞损伤的程度。, 百拇医药
从实验结果看，X射线照射后小鼠的总抗氧化能力和抗氧化酶的水平显著下降，从而各种自由基对DNA、蛋白质和生物膜的损伤就会增多、加重，MDA的升高也证实了这一点。C组小鼠的Cat虽然也显著下降，但仍显著高于B组；MDA虽高于A组，但低于B组；T-AOC、SOD与A组及B组差异无显著性，可见养阴抗毒散对于提高Cat水平、减少细胞损伤有一定作用，这可能是养阴抗毒散辐射防护作用的一条重要机理。由于养阴抗毒散是中药复方，成分复杂，其辐射防护作用机理也可能是多方面的，在细胞因子的诱生和调控方面是否也有作用，有待进一步研究证实。
参考文献
1，Li PF,Fang YZ,Lu X.Oxidative modification of bovine erythrocyte superoxide dismutase by hydrogen peroxide and ascorbate-Fe(III).Biochem Mol Biol Int,1994,29:929-937.
, http://www.100md.com
2，李培峰，方允中，涂光忠.用1H NMR研究活性氧对CuSn-SOD结构的影响.科学通报，1994，39：1614-1617.
3，Li PF,Fang YZ,Li YZ.Effects of ascorbate-Fe(III) and hydrogen peroxide on the immunological property of cuprozinc-superoxide dismutase.Med Sci Res,1993,21:521-523.
4，夏寿萱.放射生物学.北京：军事医学科学出版社.1998.37-42.
(收稿日期:1999-09-02), http://www.100md.com