过钒酸钠对照射后NFS-60细胞G-CSF增殖反应性的影响
作者：从玉文 陈家佩 赵卫红
单位：100850 北京放射医学研究所
关键词：过钒酸钠；照射；细胞增殖；NFS-60细胞
中华放射医学与防护杂志000503 【摘要】 目的 为了解酪氨酸磷酸酶在造血细胞辐射损伤中的作用，深化对造血细胞辐射损伤分子机理的认识。方法 应用MTT法观察了酪氨酸磷酸酶抑制剂过钒酸钠对照射和未照射细胞增殖的影响。结果 过钒酸钠对细胞增殖的影响因培养基中G-CSF浓度的不同而表现出相异的作用：当G-CSF浓度偏低时，一定浓度的过钒酸钠的加入可促进细胞增殖，而当G-CSF浓度过高时，过钒酸钠的加入则抑制细胞生长；与未照射细胞相比，过钒酸钠对3 Gy照射细胞的促增殖作用明显加强，生长抑制作用相对减弱。结论 酪氨酸磷酸酶可能参与了细胞增殖的不同调控过程，而照射可能加强了细胞酪氨酸磷酸酶的增殖抑制作用。
, 百拇医药 The effect of pervanadate on G-CSF induced growth responsiveness of irradiated NFS-60 cells.
CONG Yuwen, CHEN Jiapei,ZHAO Weihong
(Institute of Radiation Medicine,AMMS,100850,China)
【Abstract】 Objective To realize the role of tyrosine phosphatase in the radiation injury of hematopoietic cells (HCs) and to deepen the understanding of the mechanism of radiation injury on HCs. Methods The effects of tyrosine phosphatase inhibitor pervanadate on the G-CSF induced growth responsiveness in irradiated and unirradiated NFS-60 cells were observed by MTT method. Results It was showed that the influence of pervanadate on cell growth was dependent on the concentration of G-CSF in the medium:under the condition of lower G-CSF concentrations cell growth could be improved by administration of pervanadate in certain doses;on the contrary,administration of pervanadate could inhibit cell proliferation when the concentration of G-CSF was high enough.Compared with unirradiated cells.pervanadate could more strongly promote cell growth and relatively weakly inhibit cell proliferation in 3Gy-irradiated NFS-60 cells. Conclusion The results suggest that tyrosine phosphatase in the cells might take part in regulation of cell growth and irradiation could enhance the effect of tyrosine phosphatase to inhibit cell growth.
, 百拇医药
【Key words】 Pervanadate; Irradiation; Cell growth; NFS-60 cells
酪氨酸激酶及其磷酸酶是造血因子受体信号传递中一组重要调节分子，其中，激酶使蛋白质磷酸化，增强信号转导，磷酸酶使蛋白质脱磷酸化，下调信号转导，二者的交互作用是维系细胞自稳平衡的关键因素之一[1]。我们研究发现蛋白质磷酸酶特异抑制剂可减轻造血细胞辐射损伤，促进细胞增殖，而激酶抑制剂则可加重造血细胞辐射损伤，提示造血细胞辐射损伤时可能伴有造血因子受体信号转导的下调及酪氨酸磷酸酶负调控作用的增强。为进一步了解酪氨酸磷酸酶在造血细胞辐射损伤中的作用，本文作者以WTFT以G-CSF依赖细胞株NFS-60细胞为靶细胞，观察了酪氨酸磷酸酶特异抑制剂过钒酸钠对照射及未照射NFS-60细胞G-CSF增殖反应性的影响。
材料和方法
1.细胞培养：NFS-60细胞为小鼠源性G-CSF依赖细胞株，本实验室保存。常规培养，加入G-CSF(1×107 U/mg)至终浓度为10 ng/ml，隔d换液一次，取指数生长期细胞用于实验。
, 百拇医药
2.酪氨酸磷酸酶抑制剂过钒酸钠的制备[2]：分别配制200 μmol/L的矾酸钠和H2O2溶液，过滤除菌，4℃保存。无菌条件下各吸取40 μl，加入320 μl RPMI 1640,22℃作用15 min，反应结束后加入4 μl过氧化氢酶溶液(20 mg/ml,Boehringer Mannheim公司)灭活剩余的H2O2，现配现用。
3.照射条件：60Co γ射线一次均匀照射，照射剂量3 Gy，剂量率1.15～1.23 Gy/min。
4.MTT方法：将待测细胞用RPMI 1640培养液洗涤3次，台盼蓝染色计数活细胞，用含10%新生牛血清RPMI 1640培养基调整活细胞浓度为1.25×105/ml，每孔80 μl加入96孔板中；抑制剂两倍递减稀释后，每孔加入10 μl，每组做4个复孔，37℃孵育30 min，抑制剂与细胞充分作用后，每孔加入10 μL G-CSF溶液(终浓度0.5 ng/ml，为半数有效剂量)，37℃培养48 h，加MTT(5 mg/ml)20 μl,继续培养4 h，吸弃上清80 μl，加入200 μl DMSO,振荡助溶，在MODEL 450酶联仪(BIO-RAD)上测492 nm波长的A值，以抑制剂浓度为横坐标，以加入抑制剂细胞的A值与未加抑制剂细胞的A值的比值(即增殖指数)为纵坐标绘图。
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5.细胞生长曲线的测定[3]：用含有不同浓度过钒酸钠的培养基3倍递减稀释rhG-CSF(200 ng/ml)，每孔50 μl依次加入96孔板中，随后均匀加入活细胞悬液50 μl(照射细胞终浓度为1×105/ml，未照射细胞为0.5×105/ml)，每组做3～4复孔，37℃培养48 h，常规检测细胞增殖A值，绘制细胞增殖反应曲线。
结 果
1.过钒酸钠对照射与未照射NFS-60细胞增殖的影响：为了解过钒酸钠的最佳作用剂量，本文作者观察了NFS-60细胞与不同浓度过钒酸钠作用后细胞增殖状况。对于未照射的NFS-60细胞，当过钒酸钠浓度小于10 μmol/L时，细胞增殖指数没有明显变化，10～20 μmol/L时，增殖指数稍有增加，大于20 μmol/L，增殖指数则显著降低，细胞增殖受抑制。NFS-60细胞3 Gy照射后，当过钒酸钠浓度大于0.2 μmol/L时，增殖指数即开始升高，1～20 μmol/L时，出现一个明显的增殖峰，其峰值可达对照组的1.6倍以上，当浓度大于20 μmol/L时，增殖指数下降。这些结果说明较低浓度的的过钒酸钠即可促进照射细胞增殖，并可获得较高的促增殖效果。
, 百拇医药
2.过钒酸钠对未照射NFS-60的G-CSF增殖反应性的影响：根据以上实验结果，本文选用的过钒酸钠的浓度为2、6、18 μmol/L。图2表示在不同浓度过钒酸钠作用下NFS-60细胞G-CSF增殖反应性曲线的变化。当培养体系中无G-CSF或G-CSF浓度极低时，2 μmol/L和6 μmol/L的过钒酸钠可提高细胞增殖的A值。6 μmol/L的效果略优于2 μmol/L；随着G-CSF浓度的增加，A值升高，过钒酸钠处理组增殖反应曲线向对照组趋近，当G-CSF的浓度大于1 ng/ml时，2 μmol/L组的A值与对照组接近，6 μmol/L组已明显低于对照组。说明过钒酸钠对NFS-60细胞增殖的作用与培养基中G-CSF浓度明显相关。而当过钒酸钠的浓度为18 μmol/L时，NFS-60细胞的增殖明显受抑，其增殖反应曲线不随G-CSF浓度的增加而升高。
图1 过钒酸钠对照射及未照射
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NFS-60细胞增殖的影响
图2 过钒酸钠对NFS-60细胞
G-CSF增殖反应性的影响
3.过钒酸钠对3 Gy照射NFS-60细胞G-CSF增殖反应性的影响：图3示在同一条件下3 Gy照射NFS-60细胞G-CSF的增殖反应曲线的变化。对于2 μmol/L和6 μmol/L处理组，当G-CSF浓度小于0.01 ng/ml时，2 μmol/L及6 μmol/L的过钒酸钠能明显提高照射细胞增殖的A值，剂量越大，效果越佳；随着G-CSF浓度的增加，处理组曲线逐渐向对照组趋近；当G-CSF浓度大于1 ng/ml时，2 μmol/L组的A值与对照组接近，6 μmol/L组仍高于对照组。图中也看出18 μmol/L处理组增殖反应曲线明显低于对照组，但可随G-CSF浓度的增加而升高。说明过钒酸钠对3 Gy照射NFS-60细胞增殖的作用仍与G-CSF浓度相关，所不同的是其在低浓度G-CSF作用下的促增殖作用明显加强，而在高浓度G-CSF作用下的增殖抑制作用明显减弱。
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图3 过钒酸钠对3 Gy照射NFS-60细胞
G-CSF增殖反应性的影响
讨 论
蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTP)是维系细胞信号转导不可缺少的元件，其作用是使蛋白质脱磷酸化，下调信号转导。现已发现的酪氨酸磷酸酶基因已达几十种，分布在不同来源的细胞中，参与细胞增殖、分化、凋亡及细胞周期等事件的调控[4]。过钒酸钠是作用较强的PTP特异性抑制剂，是研究PTP作用的重要手段之一[2]。本文通过比较观察过钒酸钠对照射及未照射NFS-60细胞增殖作用的差异，获得了一些有关PTP在照射及未照射NFS-60细胞中作用的原始资料，为探讨PTP在一些病理生理事件中的作用的分子机理提供了基础。
研究发现过钒酸钠对NFS-60细胞增殖的作用与培养基中G-CSF浓度明显相关：当G-CSF浓度较低时，过钒酸钠可促进NFS-60细胞的增殖，随着G-CSF浓度的增加，过钒酸钠促增殖作用明显降低，当G-CSF达到饱和浓度时，反而抑制细胞增殖。McIntyre等在EGF依赖细胞株上也发现过钒酸钠有类似的作用，其机理还不甚清楚[5]。推测不同PTP在信号转导中作用的差异与过钒酸钠作用的多样性有关，如过钒酸钠抑制SH-PTP1增强受体信号转导，可能促进细胞增殖，而抑制cdc2,引起细胞G2/M期阻滞，则可能抑制细胞生长。我们分析，当培养基中G-CSF浓度较低时，受体信号转导降低是细胞增殖水平下降的主要因素，过钒酸钠通过对SH-PTP等PTP酶活性的抑制，上调信号转导，有利于细胞增殖；而当培养体系中G-CSF浓度过高时，受体信号转导处于饱和状态，过钒酸钠通过上调信号传递促进细胞增殖的空间已很小，相反cdc2等酶活性的降低可引起细胞G2/M期阻滞，进而抑制细胞增殖。其确切机制正在研究中。
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研究发现过钒酸钠对照射及未照射细胞的作用具有明显的差异，主要表现在以下几个方面：①当培养基中G-CSF浓度偏低或缺少时，一定浓度的过钒酸钠对照射细胞的促增殖作用更显著。②当G-CSF浓度处于饱和状态时，过钒酸钠对照射细胞的抑制作用则相对减轻。通过系统观察过钒酸钠对NFS-60细胞作用的照射剂量效应和照后给药时间效应，发现辐射细胞增殖抑制越明显，过钒酸钠促增殖作用越显著。已知G-CSF受体信号转导是G-CSF促细胞增殖作用的分子基础，G-CSF浓度的高低决定了细胞内受体信号转导的强弱，多方面的资料显示过钒酸钠促增殖作用的增强与细胞内G-CSF受体信号转导的下调可能相关，过钒酸钠对照射和未照射细胞作用的差异提示NFS-60细胞辐射后可能伴有G-CSF受体信号转导的障碍。过钒酸钠对照射细胞较强的促增殖作用可能为骨髓型急性放射病的治疗开拓新思路。
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39800032)
参考文献
, 百拇医药
1，Moutoussamy S,Kelly PA，Finidori J.Growth-hormone-receptor and cytokine-receptor-family signaling.Eur J Biochem,1998,255:1-11.
2，从玉文，陈家佩，邵源.辐射后造血细胞对造血因子的增殖反应性变化的研究.军事医学科学院院刊，1999，23：119-123.
3，Secrist JP,Burns LA,Karnitz L,et al.Stimulatory effects of the protein tyrosine phosphatase inhibitors,pervanadate,on T-cell activation events.J Biol Chem,1993,268:5886-5893.
4，Byon JC,Kenner KA,Kusari AB,et al.Regulation of growth factor-induced signaling by protein-tyrosine-phosphatase.Pro Soc Exp Biol Med,1997,216:1-20.
5，McIntyre BS,Briski KP,Hosick HL， et al.Effect of protein tyrosine phosphatase inhibitors on EGF-and insulin-dependent mammary epithelial cell growth.Proc Soc Exp Biol Med,1998,217:180-187.
(收稿日期:1999-09-11), http://www.100md.com
单位：100850 北京放射医学研究所
关键词：过钒酸钠；照射；细胞增殖；NFS-60细胞
中华放射医学与防护杂志000503 【摘要】 目的 为了解酪氨酸磷酸酶在造血细胞辐射损伤中的作用，深化对造血细胞辐射损伤分子机理的认识。方法 应用MTT法观察了酪氨酸磷酸酶抑制剂过钒酸钠对照射和未照射细胞增殖的影响。结果 过钒酸钠对细胞增殖的影响因培养基中G-CSF浓度的不同而表现出相异的作用：当G-CSF浓度偏低时，一定浓度的过钒酸钠的加入可促进细胞增殖，而当G-CSF浓度过高时，过钒酸钠的加入则抑制细胞生长；与未照射细胞相比，过钒酸钠对3 Gy照射细胞的促增殖作用明显加强，生长抑制作用相对减弱。结论 酪氨酸磷酸酶可能参与了细胞增殖的不同调控过程，而照射可能加强了细胞酪氨酸磷酸酶的增殖抑制作用。
, 百拇医药 The effect of pervanadate on G-CSF induced growth responsiveness of irradiated NFS-60 cells.
CONG Yuwen, CHEN Jiapei,ZHAO Weihong
(Institute of Radiation Medicine,AMMS,100850,China)
【Abstract】 Objective To realize the role of tyrosine phosphatase in the radiation injury of hematopoietic cells (HCs) and to deepen the understanding of the mechanism of radiation injury on HCs. Methods The effects of tyrosine phosphatase inhibitor pervanadate on the G-CSF induced growth responsiveness in irradiated and unirradiated NFS-60 cells were observed by MTT method. Results It was showed that the influence of pervanadate on cell growth was dependent on the concentration of G-CSF in the medium:under the condition of lower G-CSF concentrations cell growth could be improved by administration of pervanadate in certain doses;on the contrary,administration of pervanadate could inhibit cell proliferation when the concentration of G-CSF was high enough.Compared with unirradiated cells.pervanadate could more strongly promote cell growth and relatively weakly inhibit cell proliferation in 3Gy-irradiated NFS-60 cells. Conclusion The results suggest that tyrosine phosphatase in the cells might take part in regulation of cell growth and irradiation could enhance the effect of tyrosine phosphatase to inhibit cell growth.
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【Key words】 Pervanadate; Irradiation; Cell growth; NFS-60 cells
酪氨酸激酶及其磷酸酶是造血因子受体信号传递中一组重要调节分子，其中，激酶使蛋白质磷酸化，增强信号转导，磷酸酶使蛋白质脱磷酸化，下调信号转导，二者的交互作用是维系细胞自稳平衡的关键因素之一[1]。我们研究发现蛋白质磷酸酶特异抑制剂可减轻造血细胞辐射损伤，促进细胞增殖，而激酶抑制剂则可加重造血细胞辐射损伤，提示造血细胞辐射损伤时可能伴有造血因子受体信号转导的下调及酪氨酸磷酸酶负调控作用的增强。为进一步了解酪氨酸磷酸酶在造血细胞辐射损伤中的作用，本文作者以WTFT以G-CSF依赖细胞株NFS-60细胞为靶细胞，观察了酪氨酸磷酸酶特异抑制剂过钒酸钠对照射及未照射NFS-60细胞G-CSF增殖反应性的影响。
材料和方法
1.细胞培养：NFS-60细胞为小鼠源性G-CSF依赖细胞株，本实验室保存。常规培养，加入G-CSF(1×107 U/mg)至终浓度为10 ng/ml，隔d换液一次，取指数生长期细胞用于实验。
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2.酪氨酸磷酸酶抑制剂过钒酸钠的制备[2]：分别配制200 μmol/L的矾酸钠和H2O2溶液，过滤除菌，4℃保存。无菌条件下各吸取40 μl，加入320 μl RPMI 1640,22℃作用15 min，反应结束后加入4 μl过氧化氢酶溶液(20 mg/ml,Boehringer Mannheim公司)灭活剩余的H2O2，现配现用。
3.照射条件：60Co γ射线一次均匀照射，照射剂量3 Gy，剂量率1.15～1.23 Gy/min。
4.MTT方法：将待测细胞用RPMI 1640培养液洗涤3次，台盼蓝染色计数活细胞，用含10%新生牛血清RPMI 1640培养基调整活细胞浓度为1.25×105/ml，每孔80 μl加入96孔板中；抑制剂两倍递减稀释后，每孔加入10 μl，每组做4个复孔，37℃孵育30 min，抑制剂与细胞充分作用后，每孔加入10 μL G-CSF溶液(终浓度0.5 ng/ml，为半数有效剂量)，37℃培养48 h，加MTT(5 mg/ml)20 μl,继续培养4 h，吸弃上清80 μl，加入200 μl DMSO,振荡助溶，在MODEL 450酶联仪(BIO-RAD)上测492 nm波长的A值，以抑制剂浓度为横坐标，以加入抑制剂细胞的A值与未加抑制剂细胞的A值的比值(即增殖指数)为纵坐标绘图。
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5.细胞生长曲线的测定[3]：用含有不同浓度过钒酸钠的培养基3倍递减稀释rhG-CSF(200 ng/ml)，每孔50 μl依次加入96孔板中，随后均匀加入活细胞悬液50 μl(照射细胞终浓度为1×105/ml，未照射细胞为0.5×105/ml)，每组做3～4复孔，37℃培养48 h，常规检测细胞增殖A值，绘制细胞增殖反应曲线。
结 果
1.过钒酸钠对照射与未照射NFS-60细胞增殖的影响：为了解过钒酸钠的最佳作用剂量，本文作者观察了NFS-60细胞与不同浓度过钒酸钠作用后细胞增殖状况。对于未照射的NFS-60细胞，当过钒酸钠浓度小于10 μmol/L时，细胞增殖指数没有明显变化，10～20 μmol/L时，增殖指数稍有增加，大于20 μmol/L，增殖指数则显著降低，细胞增殖受抑制。NFS-60细胞3 Gy照射后，当过钒酸钠浓度大于0.2 μmol/L时，增殖指数即开始升高，1～20 μmol/L时，出现一个明显的增殖峰，其峰值可达对照组的1.6倍以上，当浓度大于20 μmol/L时，增殖指数下降。这些结果说明较低浓度的的过钒酸钠即可促进照射细胞增殖，并可获得较高的促增殖效果。
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2.过钒酸钠对未照射NFS-60的G-CSF增殖反应性的影响：根据以上实验结果，本文选用的过钒酸钠的浓度为2、6、18 μmol/L。图2表示在不同浓度过钒酸钠作用下NFS-60细胞G-CSF增殖反应性曲线的变化。当培养体系中无G-CSF或G-CSF浓度极低时，2 μmol/L和6 μmol/L的过钒酸钠可提高细胞增殖的A值。6 μmol/L的效果略优于2 μmol/L；随着G-CSF浓度的增加，A值升高，过钒酸钠处理组增殖反应曲线向对照组趋近，当G-CSF的浓度大于1 ng/ml时，2 μmol/L组的A值与对照组接近，6 μmol/L组已明显低于对照组。说明过钒酸钠对NFS-60细胞增殖的作用与培养基中G-CSF浓度明显相关。而当过钒酸钠的浓度为18 μmol/L时，NFS-60细胞的增殖明显受抑，其增殖反应曲线不随G-CSF浓度的增加而升高。
图1 过钒酸钠对照射及未照射
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NFS-60细胞增殖的影响
图2 过钒酸钠对NFS-60细胞
G-CSF增殖反应性的影响
3.过钒酸钠对3 Gy照射NFS-60细胞G-CSF增殖反应性的影响：图3示在同一条件下3 Gy照射NFS-60细胞G-CSF的增殖反应曲线的变化。对于2 μmol/L和6 μmol/L处理组，当G-CSF浓度小于0.01 ng/ml时，2 μmol/L及6 μmol/L的过钒酸钠能明显提高照射细胞增殖的A值，剂量越大，效果越佳；随着G-CSF浓度的增加，处理组曲线逐渐向对照组趋近；当G-CSF浓度大于1 ng/ml时，2 μmol/L组的A值与对照组接近，6 μmol/L组仍高于对照组。图中也看出18 μmol/L处理组增殖反应曲线明显低于对照组，但可随G-CSF浓度的增加而升高。说明过钒酸钠对3 Gy照射NFS-60细胞增殖的作用仍与G-CSF浓度相关，所不同的是其在低浓度G-CSF作用下的促增殖作用明显加强，而在高浓度G-CSF作用下的增殖抑制作用明显减弱。
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图3 过钒酸钠对3 Gy照射NFS-60细胞
G-CSF增殖反应性的影响
讨 论
蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTP)是维系细胞信号转导不可缺少的元件，其作用是使蛋白质脱磷酸化，下调信号转导。现已发现的酪氨酸磷酸酶基因已达几十种，分布在不同来源的细胞中，参与细胞增殖、分化、凋亡及细胞周期等事件的调控[4]。过钒酸钠是作用较强的PTP特异性抑制剂，是研究PTP作用的重要手段之一[2]。本文通过比较观察过钒酸钠对照射及未照射NFS-60细胞增殖作用的差异，获得了一些有关PTP在照射及未照射NFS-60细胞中作用的原始资料，为探讨PTP在一些病理生理事件中的作用的分子机理提供了基础。
研究发现过钒酸钠对NFS-60细胞增殖的作用与培养基中G-CSF浓度明显相关：当G-CSF浓度较低时，过钒酸钠可促进NFS-60细胞的增殖，随着G-CSF浓度的增加，过钒酸钠促增殖作用明显降低，当G-CSF达到饱和浓度时，反而抑制细胞增殖。McIntyre等在EGF依赖细胞株上也发现过钒酸钠有类似的作用，其机理还不甚清楚[5]。推测不同PTP在信号转导中作用的差异与过钒酸钠作用的多样性有关，如过钒酸钠抑制SH-PTP1增强受体信号转导，可能促进细胞增殖，而抑制cdc2,引起细胞G2/M期阻滞，则可能抑制细胞生长。我们分析，当培养基中G-CSF浓度较低时，受体信号转导降低是细胞增殖水平下降的主要因素，过钒酸钠通过对SH-PTP等PTP酶活性的抑制，上调信号转导，有利于细胞增殖；而当培养体系中G-CSF浓度过高时，受体信号转导处于饱和状态，过钒酸钠通过上调信号传递促进细胞增殖的空间已很小，相反cdc2等酶活性的降低可引起细胞G2/M期阻滞，进而抑制细胞增殖。其确切机制正在研究中。
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研究发现过钒酸钠对照射及未照射细胞的作用具有明显的差异，主要表现在以下几个方面：①当培养基中G-CSF浓度偏低或缺少时，一定浓度的过钒酸钠对照射细胞的促增殖作用更显著。②当G-CSF浓度处于饱和状态时，过钒酸钠对照射细胞的抑制作用则相对减轻。通过系统观察过钒酸钠对NFS-60细胞作用的照射剂量效应和照后给药时间效应，发现辐射细胞增殖抑制越明显，过钒酸钠促增殖作用越显著。已知G-CSF受体信号转导是G-CSF促细胞增殖作用的分子基础，G-CSF浓度的高低决定了细胞内受体信号转导的强弱，多方面的资料显示过钒酸钠促增殖作用的增强与细胞内G-CSF受体信号转导的下调可能相关，过钒酸钠对照射和未照射细胞作用的差异提示NFS-60细胞辐射后可能伴有G-CSF受体信号转导的障碍。过钒酸钠对照射细胞较强的促增殖作用可能为骨髓型急性放射病的治疗开拓新思路。
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39800032)
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2，从玉文，陈家佩，邵源.辐射后造血细胞对造血因子的增殖反应性变化的研究.军事医学科学院院刊，1999，23：119-123.
3，Secrist JP,Burns LA,Karnitz L,et al.Stimulatory effects of the protein tyrosine phosphatase inhibitors,pervanadate,on T-cell activation events.J Biol Chem,1993,268:5886-5893.
4，Byon JC,Kenner KA,Kusari AB,et al.Regulation of growth factor-induced signaling by protein-tyrosine-phosphatase.Pro Soc Exp Biol Med,1997,216:1-20.
5，McIntyre BS,Briski KP,Hosick HL， et al.Effect of protein tyrosine phosphatase inhibitors on EGF-and insulin-dependent mammary epithelial cell growth.Proc Soc Exp Biol Med,1998,217:180-187.
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