三七皂甙对辐射所致小鼠骨髓抑制的对抗作用
作者：邹丹 乔海灵 全宏勋 胡群员 马新峰
单位：邹丹 全宏勋 胡群员 马新峰(450003 郑州，河南职工医学院)；乔海灵(河南医科大学)
关键词：
三七皂甙对辐射所致小鼠骨髓抑制的对抗作用 三七为五加科人参属植物，现代医学研究证明[1,2]，三七可提高外周血红细胞和白细胞数量，并能改善组织血液供应。我们采用造血祖细胞体外培养和脾落形成技术观察了三七的有效成分——三七皂甙对小鼠骨髓造血功能的影响，现将结果报道于下。
一、材料和方法
1.药物：三七皂甙，由四川省中药研究所提供，用药前配成相应浓度。
2.动物：C57小鼠，雌、雄各半，鼠龄8～10周，体重(20±2)g，由河南医科大学动物中心提供。
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3.照射条件：60Coγ射线8 Gy致死量照射，吸收剂量率0.78 Gy/min，用于造血干细胞集落测定；6 Gy亚致死量照射用于检测外周血各类细胞及粒—单系造血祖细胞和骨髓有核细胞总数的实验。
4.粒-单系集落刺激因子(GM-CSF)的制备：小鼠脱臼处死，取骶棘肌，将肌肉、马血清和RPMI 1640培养液按1∶2∶7置37℃，体积分数为5%的CO2培养箱内培养，第7天取上清液，-20℃保存备用。
5.实验分组及用药方法：小鼠随机分为4组：正常对照组、正常用药组、辐射对照组、辐射用药组。用药组ip三七皂甙1 mg/10 g，对照组同时给等容量生理盐水。以上注射每天1次，连续6 d，首次注射时间为照射后0.5 h内。
6.观察指标
(1)外周血血细胞；于照射后第9天断尾取血，测血红蛋白(Hb)，计数白细胞(WBC)和血小板(PLT)。
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(2)骨髓有核细胞(BMC)总数及分裂相：按文献方法测定[3]。
(3)粒-单系造血祖细胞(CFU-GM)集落：参照刘秀珍的方法[4]，以50个以上细胞组成的细胞群计1个CFU-GM集落。
(4)造血干细胞(CFU-S)集落：采用外源性脾集落法[5]。先制备正常小鼠和用药小鼠骨髓细胞悬液，再将该细胞悬液分别从尾静脉输入经8 Gy60Coγ射线照射的3组受体小鼠。①对照组：供体鼠和受体鼠均给生理盐水。②供体给药组：供体鼠给三七皂甙，受体鼠给生理盐水。③受体给药组：供体鼠给生理盐水，受体鼠给三七皂甙。以上给药方式均为ip，给药剂量为1 mg/10 g，每天1次，连续6 d。
7.统计学分析：数据以
±s表示，组间差异用t检验。
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二、结果
1.三七皂甙对外周血血细胞及骨髓的影响：结果(表1)显示：照射后小鼠外周血Hb、WBC、PLT及BMC均较正常对照组明显降低(P<0.01)，辐射用药组小鼠Hb、WBC、BMC均明显高于辐射对照组(P<0.01)，但PLT数则无明显改变(P>0.05)。而正常用药组小鼠各项指标与正常组相比差异无显著性(P>0.05)。
表1 三七皂甙对小鼠外周血细胞及骨髓的影响(±s，n=12)
组别
Hb
(g/L)
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WBC
(×109/L)
PLT
(×109/L)
BMC
(×104/1根股骨)
分裂指数
(‰)
正常对照组
147.6±8.9
8.3±1.2
250.1±42.3
, 百拇医药
10.0±1.9
8.6±3.0
正常用药组
143.2±14.2△
7.9±1.3△
243.9±48.5
10.4±2.7△
8.1±1.2△
辐射对照组
90.3±14.3△△
1.9±1.0△△
, 百拇医药
17.1±13.1△△
3.0±1.3△△
4.9±1.1△△
辐射用药组
128.2±14.0
3.9±1.8**
17.1±12.0*
4.6±1.8**
6.3±1.0**
注：与正常对照组比较，△P>0.05，△△P<0.01；与辐射对照组比较*P>0.05，**P<0.01 2.三七皂甙对脾长、脾重及CFU-GM的影响：结果(表2)显示；照射后小鼠脾长、脾重与正常对照组相比无明显改变(P>0.05)，而CFU-GM则明显降低(P<0.01)，辐射用药组小鼠可明显提高CFU-GM集落数，增加脾长和脾重(P>0.05)。
, 百拇医药
表2 三七皂甙对小鼠脾长、脾重及
CFU-GM的影响(±s,n=12)
组别
脾长(cm)
脾重(g)
CFU-GM (个/4×105BMC)
正常对照组
0.66±0.13
0.85±0.16
, 百拇医药
41.94±12.42
正常用药组
0.71±0.17△
0.82±0.26△
45.19±13.32△
辐射对照组
1.05±0.16△△
1.16±0.37△△
12.07±5.02△△
辐射用药组
, 百拇医药
1.27±0.15**
1.70±0.37**
19.47±6.87**
注：与正常对照组比较△P>0.05，△△P<0.01；与辐射对照组比较**P<0.01
3.三七皂甙对CFU-S的影响：对照组(11只)、供体给药组(12只)和受体给药组(12只)的CFU-S数分别为：8.3±3.6、14.2±5.8和15.0±6.6。给药组(包括供体和受体)小鼠的CFU-S集落数均明显高于对照组(P<0.01)。
三、讨论
辐射对机体损伤的重要表现为造血功能障碍所引发的一系列临床症状。本实验的结果证明：三七皂甙可明显对抗60Coγ射线照射所致小鼠的实验性骨髓抑制。主要表现为提高辐射小鼠外周血Hb、WBC、BMC总数以及CFU-S和CFU-GM集落产率。这一结果为三七应用于放射病的防治提供了实验依据。
, 百拇医药
已有实验证明：辐射对骨髓的早期病理生理改变为：血管通透性增加，血浆容量降低，血液浓缩，血流缓慢等。这些改变类似中医血瘀征象，而三七为补血要药，且有人证明它具有改善微循环，抗血栓形成等作用[6]。因此，我们推测三七对抗骨髓抑制作用可能与此有关。除此之外，三七是否还有类似CSF-GM的作用，即直接促进CFU-GM的增殖与分化尚待进一步的实验证实。
与人类相似，骨髓是成年小鼠机体的主要造血场所，但当骨髓受到破坏后(如本实验的致死量及亚致死量60Coγ射线照射)，脾脏可代替骨髓行使造血功能。我们实验结果所显示的三七皂甙对小鼠脾长、脾重均有明显影响，推测应当是促进造血细胞在脾脏增生、分化的结果。
本研究还证明三七皂甙对正常小鼠的造血功能无明显影响，提示该药对造血功能的调节具有双向作用。
需指出，本研究证明的三七皂甙对辐射小鼠外周血血小板数无明显影响，这与最近报道[7]结果较为一致。
, http://www.100md.com
基金项目：河南省科技攻关项目(971200400)
参考文献
[1]马丽焱，王春兰，张琪，等.三七皂甙对脑组织血液供应和能量代谢的影响.中国药理学通报，1998，14：27-28.
[2]黎光南，匡志华，章观德，等.熟三七粉补血成分的研究.中成药研究，1982，12：33.
[3]唐佩弦，杨天楹.造血细胞培养技术.西安：陕西科技出版社，1985.97-98.
[4]刘秀珍.造血干细胞培养技术实验手册.北京：北京出版社，1993.46-49.
[5]Fill JE,Dexter TM.A direct measurement of the radiation sensitivity of normal mouse bone marrow cells.Rad Res,1961,14:213.
[6]刘树民.近年来中医药在防治放射病中的应用.辽宁中医杂志，1987，12：48.
[7]徐皓亮，李勇，饶曼人.三七皂甙Rgl对大鼠实验性血栓形成、血小板聚集率及血小板内游离钙水平的影响.中国药理学与毒理学杂志，1998，12：40-41.
(收稿日期:1999-11-12), 百拇医药
单位：邹丹 全宏勋 胡群员 马新峰(450003 郑州，河南职工医学院)；乔海灵(河南医科大学)
关键词：
三七皂甙对辐射所致小鼠骨髓抑制的对抗作用 三七为五加科人参属植物，现代医学研究证明[1,2]，三七可提高外周血红细胞和白细胞数量，并能改善组织血液供应。我们采用造血祖细胞体外培养和脾落形成技术观察了三七的有效成分——三七皂甙对小鼠骨髓造血功能的影响，现将结果报道于下。
一、材料和方法
1.药物：三七皂甙，由四川省中药研究所提供，用药前配成相应浓度。
2.动物：C57小鼠，雌、雄各半，鼠龄8～10周，体重(20±2)g，由河南医科大学动物中心提供。
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3.照射条件：60Coγ射线8 Gy致死量照射，吸收剂量率0.78 Gy/min，用于造血干细胞集落测定；6 Gy亚致死量照射用于检测外周血各类细胞及粒—单系造血祖细胞和骨髓有核细胞总数的实验。
4.粒-单系集落刺激因子(GM-CSF)的制备：小鼠脱臼处死，取骶棘肌，将肌肉、马血清和RPMI 1640培养液按1∶2∶7置37℃，体积分数为5%的CO2培养箱内培养，第7天取上清液，-20℃保存备用。
5.实验分组及用药方法：小鼠随机分为4组：正常对照组、正常用药组、辐射对照组、辐射用药组。用药组ip三七皂甙1 mg/10 g，对照组同时给等容量生理盐水。以上注射每天1次，连续6 d，首次注射时间为照射后0.5 h内。
6.观察指标
(1)外周血血细胞；于照射后第9天断尾取血，测血红蛋白(Hb)，计数白细胞(WBC)和血小板(PLT)。
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(2)骨髓有核细胞(BMC)总数及分裂相：按文献方法测定[3]。
(3)粒-单系造血祖细胞(CFU-GM)集落：参照刘秀珍的方法[4]，以50个以上细胞组成的细胞群计1个CFU-GM集落。
(4)造血干细胞(CFU-S)集落：采用外源性脾集落法[5]。先制备正常小鼠和用药小鼠骨髓细胞悬液，再将该细胞悬液分别从尾静脉输入经8 Gy60Coγ射线照射的3组受体小鼠。①对照组：供体鼠和受体鼠均给生理盐水。②供体给药组：供体鼠给三七皂甙，受体鼠给生理盐水。③受体给药组：供体鼠给生理盐水，受体鼠给三七皂甙。以上给药方式均为ip，给药剂量为1 mg/10 g，每天1次，连续6 d。
7.统计学分析：数据以
±s表示，组间差异用t检验。, http://www.100md.com
二、结果
1.三七皂甙对外周血血细胞及骨髓的影响：结果(表1)显示：照射后小鼠外周血Hb、WBC、PLT及BMC均较正常对照组明显降低(P<0.01)，辐射用药组小鼠Hb、WBC、BMC均明显高于辐射对照组(P<0.01)，但PLT数则无明显改变(P>0.05)。而正常用药组小鼠各项指标与正常组相比差异无显著性(P>0.05)。
表1 三七皂甙对小鼠外周血细胞及骨髓的影响(
±s，n=12)组别
Hb
(g/L)
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WBC
(×109/L)
PLT
(×109/L)
BMC
(×104/1根股骨)
分裂指数
(‰)
正常对照组
147.6±8.9
8.3±1.2
250.1±42.3
, 百拇医药
10.0±1.9
8.6±3.0
正常用药组
143.2±14.2△
7.9±1.3△
243.9±48.5
10.4±2.7△
8.1±1.2△
辐射对照组
90.3±14.3△△
1.9±1.0△△
, 百拇医药
17.1±13.1△△
3.0±1.3△△
4.9±1.1△△
辐射用药组
128.2±14.0
3.9±1.8**
17.1±12.0*
4.6±1.8**
6.3±1.0**
注：与正常对照组比较，△P>0.05，△△P<0.01；与辐射对照组比较*P>0.05，**P<0.01 2.三七皂甙对脾长、脾重及CFU-GM的影响：结果(表2)显示；照射后小鼠脾长、脾重与正常对照组相比无明显改变(P>0.05)，而CFU-GM则明显降低(P<0.01)，辐射用药组小鼠可明显提高CFU-GM集落数，增加脾长和脾重(P>0.05)。
, 百拇医药
表2 三七皂甙对小鼠脾长、脾重及
CFU-GM的影响(
±s,n=12)组别
脾长(cm)
脾重(g)
CFU-GM (个/4×105BMC)
正常对照组
0.66±0.13
0.85±0.16
, 百拇医药
41.94±12.42
正常用药组
0.71±0.17△
0.82±0.26△
45.19±13.32△
辐射对照组
1.05±0.16△△
1.16±0.37△△
12.07±5.02△△
辐射用药组
, 百拇医药
1.27±0.15**
1.70±0.37**
19.47±6.87**
注：与正常对照组比较△P>0.05，△△P<0.01；与辐射对照组比较**P<0.01
3.三七皂甙对CFU-S的影响：对照组(11只)、供体给药组(12只)和受体给药组(12只)的CFU-S数分别为：8.3±3.6、14.2±5.8和15.0±6.6。给药组(包括供体和受体)小鼠的CFU-S集落数均明显高于对照组(P<0.01)。
三、讨论
辐射对机体损伤的重要表现为造血功能障碍所引发的一系列临床症状。本实验的结果证明：三七皂甙可明显对抗60Coγ射线照射所致小鼠的实验性骨髓抑制。主要表现为提高辐射小鼠外周血Hb、WBC、BMC总数以及CFU-S和CFU-GM集落产率。这一结果为三七应用于放射病的防治提供了实验依据。
, 百拇医药
已有实验证明：辐射对骨髓的早期病理生理改变为：血管通透性增加，血浆容量降低，血液浓缩，血流缓慢等。这些改变类似中医血瘀征象，而三七为补血要药，且有人证明它具有改善微循环，抗血栓形成等作用[6]。因此，我们推测三七对抗骨髓抑制作用可能与此有关。除此之外，三七是否还有类似CSF-GM的作用，即直接促进CFU-GM的增殖与分化尚待进一步的实验证实。
与人类相似，骨髓是成年小鼠机体的主要造血场所，但当骨髓受到破坏后(如本实验的致死量及亚致死量60Coγ射线照射)，脾脏可代替骨髓行使造血功能。我们实验结果所显示的三七皂甙对小鼠脾长、脾重均有明显影响，推测应当是促进造血细胞在脾脏增生、分化的结果。
本研究还证明三七皂甙对正常小鼠的造血功能无明显影响，提示该药对造血功能的调节具有双向作用。
需指出，本研究证明的三七皂甙对辐射小鼠外周血血小板数无明显影响，这与最近报道[7]结果较为一致。
, http://www.100md.com
基金项目：河南省科技攻关项目(971200400)
参考文献
[1]马丽焱，王春兰，张琪，等.三七皂甙对脑组织血液供应和能量代谢的影响.中国药理学通报，1998，14：27-28.
[2]黎光南，匡志华，章观德，等.熟三七粉补血成分的研究.中成药研究，1982，12：33.
[3]唐佩弦，杨天楹.造血细胞培养技术.西安：陕西科技出版社，1985.97-98.
[4]刘秀珍.造血干细胞培养技术实验手册.北京：北京出版社，1993.46-49.
[5]Fill JE,Dexter TM.A direct measurement of the radiation sensitivity of normal mouse bone marrow cells.Rad Res,1961,14:213.
[6]刘树民.近年来中医药在防治放射病中的应用.辽宁中医杂志，1987，12：48.
[7]徐皓亮，李勇，饶曼人.三七皂甙Rgl对大鼠实验性血栓形成、血小板聚集率及血小板内游离钙水平的影响.中国药理学与毒理学杂志，1998，12：40-41.
(收稿日期:1999-11-12), 百拇医药