正常妊娠及妊高征患者静脉血及新生儿脐血一氧化氮含量的测定及意义
作者：沈文洁 杨梦庚 罗亚宁 李东红
单位：710038 西安，第四军医大学唐都医院妇产科
关键词：妊娠并发症；心血管；高血压；一氧化氮
中华妇产科杂志980401 【摘要】 目的 探讨一氧化氮(NO)含量与妊娠及妊高征的关系。方法 采用硝酸根还原酶与Griess反应相结合的方法，对40例妊高征患者(妊高征组)、40例正常晚期妊娠妇女(晚孕组)、20例非孕妇女(非孕组)静脉血及妊高征组和晚孕组各28例新生儿脐血中的NO代谢产物亚硝酸基/硝酸基(NO2-/NO3-)进行测定。结果 非孕组母血NO2-/NO3-含量为23.30±5.60 μmol/L，晚孕组母血为26.42±4.54 μmol/L，脐血为12.26±4.91 μmol/L，妊高征组母血为32.58±5.06 μmol/L，脐血为14.64±3.90 μmol/L。非孕组母血NO2-/NO3-含量低于晚孕组(P<0.05)和妊高征组(P<0.01)。与晚孕组比较，妊高征组母血NO2-/NO3-含量显著升高(P<0.01)，新生儿脐血NO2-/NO3-含量也升高(P<0.05)。妊高征组母血及脐血NO2-/NO3-含量与血压、新生儿体重无相关性。妊高征组与晚孕组脐血中NO2-/NO3-含量均显著低于母血(P<0.01)。结论 妊高征患者血中及其新生儿脐血中NO2-/NO3-含量升高，可能是妊高征的一种继发性代偿反应，有改善血流、抑制血小板粘附、聚集的作用。
, http://www.100md.com
The Changes of Maternal and Umbilical Serum Nitric Oxide in Patients with Pregnancy Induced Hypertension Shen Wenjie, Yang Menggeng, Luo Yaning, et al. Tangdu Hospital of The Fourth Military Medical University, Xian 710038
【Abstract】 Objective To determine whether levels of maternal and umbilical serum nitric oxide (NO) were changed in patients with pregnancy induced hypertension (PIH). Methods 40 women with PIH, 40 normal late trimester pregnant women and 20 nonpregnant women were studied. Maternal venous blood were collected from all the cases and umbilical venous blood were collected from 28 of the first two groups respectively. Serum NO2-/NO3-, the endproducts of NO, were measured with the Griess reaction after reduction with nitrate reductase. Results The mean NO2-/NO3- in maternal venous serum were 23.30±5.60 μmol/L in nonpregnant group, 26.42±4.54 μmol/L in normal pregnant group and 32.58±5.06 μmol/L in PIH group. Umbilical serum NO2-/NO3- were 12.26±4.91 μmol/L in normotensive groups and 14.64±3.90 μmol/L in PIH group. Maternal serum NO2-/NO3- in nonpregnant group were lower than that both in normal pregnant group (P<0.05) and in PIH group (P<0.01). Compared with the normotensive group, maternal serum NO2-/NO3- in PIH group was significantly higher (P<0.01), while significantly higher serum NO2-/NO3- were also found in umbilical venous blood in PIH group (P<0.05). There were no correlations between serum NO2-/NO3- level and blood pressure or birth weight. The total nitrite levels in fetal circulation was lower than that in maternal circulation in both pregnant groups (P<0.01). Conclusion Total nitrites are increased both in maternal and fetal circulation in PIH. The result indicates that the increase of NO may be secondary compensative reaction in PIH.
, 百拇医药
【Key words】 Pregnancy complications, cardiovascular Hypertension Nitric oxide
妊高征是严重危害母婴健康的妊娠并发症，病因未明。近年来研究发现，内皮衍生的舒张因子，即一氧化氮(NO)与妊高征关系密切，但是研究结果各家报道不尽一致。本研究利用硝酸根还原酶体系，将NO3-还原成/NO2-，再结合Griess反应，测定妊高征、正常晚孕妇女母血及新生儿脐血中NO代谢产物NO2-/NO3-的变化，并以非孕妇女为对照，以探讨NO 与妊娠及妊高征的关系。
资料与方法
一、研究对象
, http://www.100md.com 均为1996年11月～1997年2月在第四军医大学唐都医院产科住院者，其中妊高征组40例，其诊断标准按《妇产科学》第4版，分为轻度妊高征10例、中度10例、重度20例；晚孕组40例，为同期住院健康孕妇。非孕组20例，为本院血库女性献血员。各组既往均无高血压、心脏病、糖尿病及肝肾病史。各组年龄、采血时孕周、血浆肌酐及尿素氮等，均无显著性差异。晚孕组分娩孕周为39.55±1.01周，妊高征组为38.76±1.74周。为保证脐血中NO含量测定不受孕周影响，选择分娩孕周无显著性差异的28例正常晚期妊娠妇女和28例妊高征患者的新生儿采取脐血。
二、实验方法
1.标本采集及处理：均于入院后抽取肘静脉血3 ml，新生儿出生后立即取脐静脉血3 ml，室温下凝固后，2 000 r/min离心15分钟，取血清置-40℃冻存待测。妊高征组于药物治疗前采血。
2.测定方法：参照文献[1]的方法略加改进。因内源性NO极不稳定，可迅速氧化形成终产物NO2-/NO3-，并以NO3-为主，因而通过测定其代谢产物以反映NO水平简便易行。首先将NO3-还原为NO2-，再利用Griess试剂测定NO2-的含量。本研究利用硝酸根还原酶，以还原型辅酶Ⅱ(NADPH)、黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为递氢体，将NO3-还原成NO2-。
, 百拇医药
将待测血清标本5 000 r/min离心15分钟，取150 μl上清液配成终体积600 μl的反应体系，包括：56 mmol/L磷酸钾缓冲液，(pH 7.5，240 μl), 2.5 μmol/L FAD (15 μl), 94 μmol/L NADPH (9μl), 156 μl去离子三蒸水，0.12 U硝酸根还原酶(30 μl)。混匀后25℃反应30分钟。再加入3.5 μg乳酸脱氢酶(LDH，7 μl), 0.2 mmol/L丙酮酸盐(75 μl)，去离子水68 μl，混匀后反应30分钟，以消耗过量的NADPH。严格按亚硝酸根测试盒说明书进行Griess反应，利用分光光度计测定546 nm处吸光度(A)，计算NO2-含量。亚硝酸根测试盒购自中国军事医学科学院，硝酸根还原酶购自德国宝灵曼公司，FAD、NADPH、LDH、丙酮酸盐购自Sigma公司，721型分光光度计为上海第三分析仪器厂生产。
三、统计学处理
, http://www.100md.com 各组数据以(
±s)表示，采用t检验进行统计分析。
结果
一、各组NO2-/NO3-测定结果
非孕组母血中NO2-/NO3-含量低于晚孕组(P<0.05)和妊高征组(P<0.01)，晚孕组母血NO2-/NO3-含量低于妊高征组，差异有显著性(P<0.01)。见表1。轻、中、重度妊高征患者比较，母血NO2-/NO3-含量渐次增高，但差异无显著性(P>0.05)。见表2。妊高征组母血NO2-/NO3-含量与血压、新生儿体重无相关性(P>0.05)。
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表1 各组血清NO2-/NO3-检测结果(μmol/L,±s) 组别
例数
NO2-/NO3-
非孕组
20
23.30±5.60
晚孕组
40
26.42±4.54
, 百拇医药
妊高征组
40
32.58±5.06
表2 不同程度妊高征患者血清NO2-/NO3-
检测结果(μmol/L,±s) 类别
例数
NO2-/NO3-
轻度妊高征
10
, 百拇医药
30.32±4.24
中度妊高征
10
32.64±5.25
重度妊高征
20
33.67±5.59
二、妊高征组及晚孕组新生儿脐血NO2-/NO3-测定结果
妊高征组与晚孕组比较，新生儿脐血NO2-/NO3-含量升高(P<0.05)，但轻、中、重度妊高征者之间差异无显著性。与母血比较，两组新生儿脐血NO2-/NO3-含量均显著降低(P<0.01)。见表3。新生儿脐血NO2-/NO3-含量与血压、新生儿体重也无相关性(P>0.05)。表3 妊高征组及晚孕组母血、脐血NO2-/NO3-
, 百拇医药
检测结果(μmol/L,±s) 组别
例数
脐血
母血
晚孕组
28
12.26±4.91
26.42±4.54
妊高征组
28
14.64±3.90
, 百拇医药
32.58±5.06
讨论
一、NO与妊娠的关系
妊娠期由于胎儿生长发育的需要，母体将发生一系列适应性变化：血容量增加，血压下降，血液重新分布；胃肠道平滑肌蠕动减弱。许多动物和人体实验发现，妊娠期多种组织中NO合成酶(NOS)催化活性增加，NO代谢产物水平升高。我们的研究也发现，妊娠妇女外周血NO终产物显著高于非孕妇女，而NO具有扩张血管、舒张平滑肌、抑制血小板粘附聚集的作用，从而认为NO是母体适应妊娠的一种生理性变化。
二、NO与妊高征的关系
有关NO与妊高征的关系，研究资料有限而且相互矛盾，有人认为妊高征患者体内NO水平降低，是妊高征的病因，而另一些学者却持相反的观点，认为NO水平升高是妊高征的继发性代偿反应。两种观点孰是孰非，尚无定论。
, 百拇医药
1.NO病因学说：Seligman等[2～4]发现，妊高征患者血清NO2-/NO3-含量低于正常晚孕妇女，并且与血压呈负相关。大量动物实验表明，连续给予NO合成抑制剂可产生妊高征动物模型，出现高血压、蛋白尿、血小板减少及胎儿宫内发育迟缓等症状。而妊高征患者母血NO代谢产物是否降低仍存在争议，因此得出NO合成减少是妊高征发病环节之一的证据尚不充足。
2.NO代偿学说：近年来，越来越多的研究资料提出相反的观点。Silver等[5]利用NO3-与O3反应生成NO2-时发出的微弱光源，即化学发光法测定NO2-/NO3-含量，发现妊高征患者血浆中NO2-/NO3-含量与正常晚孕妇女比较差异无显著性。Lyall等[6]利用硝酸根还原酶方法进行测定，发现与正常妊娠比较，妊高征患者母血NO2-/NO3-含量不变，而脐血则显著升高，并且与血压无相关性。我们的研究再次证实，妊高征组母血及脐血中NO2-/NO3-含量高于正常晚孕组，并与血压、新生儿体重无相关性。此外，在体外培养的人或牛血管内皮细胞培养液中，加入妊高征患者或正常晚孕妇女血浆，前者NOS基因表达和转录非但没有降低反而升高，NOS催化活力升高，NO代谢产物增加[5，7]。Orpana等[8]将妊高征患者和正常晚孕妇女的脐血管内皮细胞进行原代培养，妊高征者培养液中NO代谢产物增加，测定单个细胞合成NO能力两组没有差别。Boccardo等[9]的体内研究再次证明，妊高征与正常孕妇的脐静脉内皮细胞和胎盘中NOS基因表达相似。因此认为，NO含量的变化并非是妊高征的发病原因，而是妊高征的继发性代偿反应。
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3.分歧的原因：两种分歧存在的确切原因尚不清楚，但干扰NO代谢产物测定结果的因素很多，如：(1)测定方法不同：研究表明NO2-在体外迅速氧化为NO3-，仅以Griess反应测定NO2-含量不能代表体内NO合成情况[10]，必须首先用镉过柱[3]、硝酸根还原酶[6]、化学发光法[5]等将NO3-还原为NO2-。与镉过柱方法比较，硝酸根还原酶法更接近于体内的氧化还原体系，因而结果更为准确可靠。(2)用药情况不同：Seligman等[2]对26例妊高征患者中的21例，在应用硫酸镁后取血，而硫酸镁能够降低循环钙离子水平，从而下调钙依赖性NOS活性，导致结果在人为因素干扰下降低，并由此得出错误结论。(3)肾脏对NO2-/NO3-的清除率不同：目前对妊高征患者尿中NO2-/NO3-水平的测定也有降低、不变、升高三种结果，但这些研究均为随机收集而非24小时留取尿样本，因而结果也有一定偏差。(4)地域及对妊高征定义不同：血压升高是妊高征的一个症状，但妊高征不仅仅是血压升高。有人报道，妊高征血浆NO2-/NO3-水平显著高于正常晚孕组，而原发性高血压孕妇则显著降低，若定义混淆，会导致错误结论[11]。本研究严格按第4版《妇产科学》标准选择妊高征病例，并于用药前抽取母血，排除了药物对结果的干扰，与正常孕妇相比，妊高征患者血浆肌酐浓度无显著性差异，并采用先进的硝酸根还原酶方法进行测定，结果是可靠的。
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三、母血与脐血NO分泌的差异
我们的研究发现，无论妊高征还是正常孕妇脐血中NO代谢产物均低于母血，而且两组比较，脐血间差异小于母血间差异。许多研究证实，NO分泌于孕早期开始升高，孕中期达高峰，持续至孕晚期，临产、分娩后迅速下降。本实验母血均于临产前采血，而脐血则采于分娩后；同时母血均于用药前采血，而脐血则为用药后采血。另一种可能是妊高征患者母血中的有毒物质仅有少部分通过胎盘屏障，损害脐血管内皮细胞，导致脐血中的NO2-/NO3-改变不大，而且两组脐血间差异小于母血间差异。其原因及意义仍需进一步探讨。
综上所述，不难看出NO与妊高征的关系尚未明确。我们的实验发现妊高征患者母血及脐血中NO代谢产物高于正常晚孕妇女，说明NO改变可能是妊高征的继发性代偿反应，借以改善血流，抑制血小板粘附、聚集，维持内环境的稳定，而不是妊高征的病因。
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参考文献
1 Gilliam MB, sherman MP, Griscavage JM, et al. A spectrophotometric assay for nitrate using NADPH oxidation by aspergillus nitrate reductase. Anal Biochem, 1993, 212:359-365.
2 Seligman SP, Buyon JP, Clancy RM, et al. The role of nitric oxide in the pathogenesis of preeclampsia. Am J Obstet Gynecol, 1994, 171:944-948.
3 李力，陈竹钦，徐有奇.妊高征患者血浆一氧化氮变化的研究.中华妇产科杂志，1996，31：454-457.
, 百拇医药
4 马成斌，庄依亮，李爱禄.晚期正常妊娠及妊高征患者血清一氧化氮水平及其意义.中国实用妇科与产科杂志，1996，12：217-218.
5 Silver RK, Kupferminc MJ, Russell TL, et al. Evaluation of nitric oxide as a mediator of severe preeclampsia. Am J Obstet Gynecol, 1996, 175:1013-1017.
6 Lyall F, Young A, Greer IA, et al. Nitric oxide concentritions are increased in the fetaplacental circulation in preeclampsia. Am J Obstet Gynecol, 1995, 173:714-718.
7 Davidage ST, Baker PN, Roberts JM. NOS expression is increased in endothelial cells exposed to plasma from women with preeclampsia. Am J Physiol, 1995, 269:1106-1112.
, 百拇医药
8 Orpana AK, Avela K, Ranta V, et al. The calcium-dependent nitric oxide production of human vascular endothelial cells in preeclampsia. Am J Obstet Gynecol, 1996, 174:1056-1060.
9 Boccardo P, Soregaroli M, Aiello S, et al. Systemic and fetal maternal nitric oxide synthesis in normal pregnancy and preeclampsia. Br J Obstet Gynecol, 1996, 103:879-886.
10 Benjamin N, Vallace P. Plasma nitrite as a marker of nitric oxide production. Lancet, 1994, 344:960.
11 Nobunaga T, Tokugawa Y, Hashimoto K, et al. Plasma nitric oxide levels in pregnant patients with preeclampsia and essential hypertension. Gynecol Obstet Invest, 1996, 41:189-193.
(收稿：1997-07-03 修回：1997-12-29), http://www.100md.com
单位：710038 西安，第四军医大学唐都医院妇产科
关键词：妊娠并发症；心血管；高血压；一氧化氮
中华妇产科杂志980401 【摘要】 目的 探讨一氧化氮(NO)含量与妊娠及妊高征的关系。方法 采用硝酸根还原酶与Griess反应相结合的方法，对40例妊高征患者(妊高征组)、40例正常晚期妊娠妇女(晚孕组)、20例非孕妇女(非孕组)静脉血及妊高征组和晚孕组各28例新生儿脐血中的NO代谢产物亚硝酸基/硝酸基(NO2-/NO3-)进行测定。结果 非孕组母血NO2-/NO3-含量为23.30±5.60 μmol/L，晚孕组母血为26.42±4.54 μmol/L，脐血为12.26±4.91 μmol/L，妊高征组母血为32.58±5.06 μmol/L，脐血为14.64±3.90 μmol/L。非孕组母血NO2-/NO3-含量低于晚孕组(P<0.05)和妊高征组(P<0.01)。与晚孕组比较，妊高征组母血NO2-/NO3-含量显著升高(P<0.01)，新生儿脐血NO2-/NO3-含量也升高(P<0.05)。妊高征组母血及脐血NO2-/NO3-含量与血压、新生儿体重无相关性。妊高征组与晚孕组脐血中NO2-/NO3-含量均显著低于母血(P<0.01)。结论 妊高征患者血中及其新生儿脐血中NO2-/NO3-含量升高，可能是妊高征的一种继发性代偿反应，有改善血流、抑制血小板粘附、聚集的作用。
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The Changes of Maternal and Umbilical Serum Nitric Oxide in Patients with Pregnancy Induced Hypertension Shen Wenjie, Yang Menggeng, Luo Yaning, et al. Tangdu Hospital of The Fourth Military Medical University, Xian 710038
【Abstract】 Objective To determine whether levels of maternal and umbilical serum nitric oxide (NO) were changed in patients with pregnancy induced hypertension (PIH). Methods 40 women with PIH, 40 normal late trimester pregnant women and 20 nonpregnant women were studied. Maternal venous blood were collected from all the cases and umbilical venous blood were collected from 28 of the first two groups respectively. Serum NO2-/NO3-, the endproducts of NO, were measured with the Griess reaction after reduction with nitrate reductase. Results The mean NO2-/NO3- in maternal venous serum were 23.30±5.60 μmol/L in nonpregnant group, 26.42±4.54 μmol/L in normal pregnant group and 32.58±5.06 μmol/L in PIH group. Umbilical serum NO2-/NO3- were 12.26±4.91 μmol/L in normotensive groups and 14.64±3.90 μmol/L in PIH group. Maternal serum NO2-/NO3- in nonpregnant group were lower than that both in normal pregnant group (P<0.05) and in PIH group (P<0.01). Compared with the normotensive group, maternal serum NO2-/NO3- in PIH group was significantly higher (P<0.01), while significantly higher serum NO2-/NO3- were also found in umbilical venous blood in PIH group (P<0.05). There were no correlations between serum NO2-/NO3- level and blood pressure or birth weight. The total nitrite levels in fetal circulation was lower than that in maternal circulation in both pregnant groups (P<0.01). Conclusion Total nitrites are increased both in maternal and fetal circulation in PIH. The result indicates that the increase of NO may be secondary compensative reaction in PIH.
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【Key words】 Pregnancy complications, cardiovascular Hypertension Nitric oxide
妊高征是严重危害母婴健康的妊娠并发症，病因未明。近年来研究发现，内皮衍生的舒张因子，即一氧化氮(NO)与妊高征关系密切，但是研究结果各家报道不尽一致。本研究利用硝酸根还原酶体系，将NO3-还原成/NO2-，再结合Griess反应，测定妊高征、正常晚孕妇女母血及新生儿脐血中NO代谢产物NO2-/NO3-的变化，并以非孕妇女为对照，以探讨NO 与妊娠及妊高征的关系。
资料与方法
一、研究对象
, http://www.100md.com 均为1996年11月～1997年2月在第四军医大学唐都医院产科住院者，其中妊高征组40例，其诊断标准按《妇产科学》第4版，分为轻度妊高征10例、中度10例、重度20例；晚孕组40例，为同期住院健康孕妇。非孕组20例，为本院血库女性献血员。各组既往均无高血压、心脏病、糖尿病及肝肾病史。各组年龄、采血时孕周、血浆肌酐及尿素氮等，均无显著性差异。晚孕组分娩孕周为39.55±1.01周，妊高征组为38.76±1.74周。为保证脐血中NO含量测定不受孕周影响，选择分娩孕周无显著性差异的28例正常晚期妊娠妇女和28例妊高征患者的新生儿采取脐血。
二、实验方法
1.标本采集及处理：均于入院后抽取肘静脉血3 ml，新生儿出生后立即取脐静脉血3 ml，室温下凝固后，2 000 r/min离心15分钟，取血清置-40℃冻存待测。妊高征组于药物治疗前采血。
2.测定方法：参照文献[1]的方法略加改进。因内源性NO极不稳定，可迅速氧化形成终产物NO2-/NO3-，并以NO3-为主，因而通过测定其代谢产物以反映NO水平简便易行。首先将NO3-还原为NO2-，再利用Griess试剂测定NO2-的含量。本研究利用硝酸根还原酶，以还原型辅酶Ⅱ(NADPH)、黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为递氢体，将NO3-还原成NO2-。
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将待测血清标本5 000 r/min离心15分钟，取150 μl上清液配成终体积600 μl的反应体系，包括：56 mmol/L磷酸钾缓冲液，(pH 7.5，240 μl), 2.5 μmol/L FAD (15 μl), 94 μmol/L NADPH (9μl), 156 μl去离子三蒸水，0.12 U硝酸根还原酶(30 μl)。混匀后25℃反应30分钟。再加入3.5 μg乳酸脱氢酶(LDH，7 μl), 0.2 mmol/L丙酮酸盐(75 μl)，去离子水68 μl，混匀后反应30分钟，以消耗过量的NADPH。严格按亚硝酸根测试盒说明书进行Griess反应，利用分光光度计测定546 nm处吸光度(A)，计算NO2-含量。亚硝酸根测试盒购自中国军事医学科学院，硝酸根还原酶购自德国宝灵曼公司，FAD、NADPH、LDH、丙酮酸盐购自Sigma公司，721型分光光度计为上海第三分析仪器厂生产。
三、统计学处理
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±s)表示，采用t检验进行统计分析。结果
一、各组NO2-/NO3-测定结果
非孕组母血中NO2-/NO3-含量低于晚孕组(P<0.05)和妊高征组(P<0.01)，晚孕组母血NO2-/NO3-含量低于妊高征组，差异有显著性(P<0.01)。见表1。轻、中、重度妊高征患者比较，母血NO2-/NO3-含量渐次增高，但差异无显著性(P>0.05)。见表2。妊高征组母血NO2-/NO3-含量与血压、新生儿体重无相关性(P>0.05)。
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表1 各组血清NO2-/NO3-检测结果(μmol/L,
±s) 组别例数
NO2-/NO3-
非孕组
20
23.30±5.60
晚孕组
40
26.42±4.54
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妊高征组
40
32.58±5.06
表2 不同程度妊高征患者血清NO2-/NO3-
检测结果(μmol/L,
±s) 类别例数
NO2-/NO3-
轻度妊高征
10
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30.32±4.24
中度妊高征
10
32.64±5.25
重度妊高征
20
33.67±5.59
二、妊高征组及晚孕组新生儿脐血NO2-/NO3-测定结果
妊高征组与晚孕组比较，新生儿脐血NO2-/NO3-含量升高(P<0.05)，但轻、中、重度妊高征者之间差异无显著性。与母血比较，两组新生儿脐血NO2-/NO3-含量均显著降低(P<0.01)。见表3。新生儿脐血NO2-/NO3-含量与血压、新生儿体重也无相关性(P>0.05)。表3 妊高征组及晚孕组母血、脐血NO2-/NO3-
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检测结果(μmol/L,
±s) 组别例数
脐血
母血
晚孕组
28
12.26±4.91
26.42±4.54
妊高征组
28
14.64±3.90
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32.58±5.06
讨论
一、NO与妊娠的关系
妊娠期由于胎儿生长发育的需要，母体将发生一系列适应性变化：血容量增加，血压下降，血液重新分布；胃肠道平滑肌蠕动减弱。许多动物和人体实验发现，妊娠期多种组织中NO合成酶(NOS)催化活性增加，NO代谢产物水平升高。我们的研究也发现，妊娠妇女外周血NO终产物显著高于非孕妇女，而NO具有扩张血管、舒张平滑肌、抑制血小板粘附聚集的作用，从而认为NO是母体适应妊娠的一种生理性变化。
二、NO与妊高征的关系
有关NO与妊高征的关系，研究资料有限而且相互矛盾，有人认为妊高征患者体内NO水平降低，是妊高征的病因，而另一些学者却持相反的观点，认为NO水平升高是妊高征的继发性代偿反应。两种观点孰是孰非，尚无定论。
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1.NO病因学说：Seligman等[2～4]发现，妊高征患者血清NO2-/NO3-含量低于正常晚孕妇女，并且与血压呈负相关。大量动物实验表明，连续给予NO合成抑制剂可产生妊高征动物模型，出现高血压、蛋白尿、血小板减少及胎儿宫内发育迟缓等症状。而妊高征患者母血NO代谢产物是否降低仍存在争议，因此得出NO合成减少是妊高征发病环节之一的证据尚不充足。
2.NO代偿学说：近年来，越来越多的研究资料提出相反的观点。Silver等[5]利用NO3-与O3反应生成NO2-时发出的微弱光源，即化学发光法测定NO2-/NO3-含量，发现妊高征患者血浆中NO2-/NO3-含量与正常晚孕妇女比较差异无显著性。Lyall等[6]利用硝酸根还原酶方法进行测定，发现与正常妊娠比较，妊高征患者母血NO2-/NO3-含量不变，而脐血则显著升高，并且与血压无相关性。我们的研究再次证实，妊高征组母血及脐血中NO2-/NO3-含量高于正常晚孕组，并与血压、新生儿体重无相关性。此外，在体外培养的人或牛血管内皮细胞培养液中，加入妊高征患者或正常晚孕妇女血浆，前者NOS基因表达和转录非但没有降低反而升高，NOS催化活力升高，NO代谢产物增加[5，7]。Orpana等[8]将妊高征患者和正常晚孕妇女的脐血管内皮细胞进行原代培养，妊高征者培养液中NO代谢产物增加，测定单个细胞合成NO能力两组没有差别。Boccardo等[9]的体内研究再次证明，妊高征与正常孕妇的脐静脉内皮细胞和胎盘中NOS基因表达相似。因此认为，NO含量的变化并非是妊高征的发病原因，而是妊高征的继发性代偿反应。
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3.分歧的原因：两种分歧存在的确切原因尚不清楚，但干扰NO代谢产物测定结果的因素很多，如：(1)测定方法不同：研究表明NO2-在体外迅速氧化为NO3-，仅以Griess反应测定NO2-含量不能代表体内NO合成情况[10]，必须首先用镉过柱[3]、硝酸根还原酶[6]、化学发光法[5]等将NO3-还原为NO2-。与镉过柱方法比较，硝酸根还原酶法更接近于体内的氧化还原体系，因而结果更为准确可靠。(2)用药情况不同：Seligman等[2]对26例妊高征患者中的21例，在应用硫酸镁后取血，而硫酸镁能够降低循环钙离子水平，从而下调钙依赖性NOS活性，导致结果在人为因素干扰下降低，并由此得出错误结论。(3)肾脏对NO2-/NO3-的清除率不同：目前对妊高征患者尿中NO2-/NO3-水平的测定也有降低、不变、升高三种结果，但这些研究均为随机收集而非24小时留取尿样本，因而结果也有一定偏差。(4)地域及对妊高征定义不同：血压升高是妊高征的一个症状，但妊高征不仅仅是血压升高。有人报道，妊高征血浆NO2-/NO3-水平显著高于正常晚孕组，而原发性高血压孕妇则显著降低，若定义混淆，会导致错误结论[11]。本研究严格按第4版《妇产科学》标准选择妊高征病例，并于用药前抽取母血，排除了药物对结果的干扰，与正常孕妇相比，妊高征患者血浆肌酐浓度无显著性差异，并采用先进的硝酸根还原酶方法进行测定，结果是可靠的。
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三、母血与脐血NO分泌的差异
我们的研究发现，无论妊高征还是正常孕妇脐血中NO代谢产物均低于母血，而且两组比较，脐血间差异小于母血间差异。许多研究证实，NO分泌于孕早期开始升高，孕中期达高峰，持续至孕晚期，临产、分娩后迅速下降。本实验母血均于临产前采血，而脐血则采于分娩后；同时母血均于用药前采血，而脐血则为用药后采血。另一种可能是妊高征患者母血中的有毒物质仅有少部分通过胎盘屏障，损害脐血管内皮细胞，导致脐血中的NO2-/NO3-改变不大，而且两组脐血间差异小于母血间差异。其原因及意义仍需进一步探讨。
综上所述，不难看出NO与妊高征的关系尚未明确。我们的实验发现妊高征患者母血及脐血中NO代谢产物高于正常晚孕妇女，说明NO改变可能是妊高征的继发性代偿反应，借以改善血流，抑制血小板粘附、聚集，维持内环境的稳定，而不是妊高征的病因。
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参考文献
1 Gilliam MB, sherman MP, Griscavage JM, et al. A spectrophotometric assay for nitrate using NADPH oxidation by aspergillus nitrate reductase. Anal Biochem, 1993, 212:359-365.
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4 马成斌，庄依亮，李爱禄.晚期正常妊娠及妊高征患者血清一氧化氮水平及其意义.中国实用妇科与产科杂志，1996，12：217-218.
5 Silver RK, Kupferminc MJ, Russell TL, et al. Evaluation of nitric oxide as a mediator of severe preeclampsia. Am J Obstet Gynecol, 1996, 175:1013-1017.
6 Lyall F, Young A, Greer IA, et al. Nitric oxide concentritions are increased in the fetaplacental circulation in preeclampsia. Am J Obstet Gynecol, 1995, 173:714-718.
7 Davidage ST, Baker PN, Roberts JM. NOS expression is increased in endothelial cells exposed to plasma from women with preeclampsia. Am J Physiol, 1995, 269:1106-1112.
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8 Orpana AK, Avela K, Ranta V, et al. The calcium-dependent nitric oxide production of human vascular endothelial cells in preeclampsia. Am J Obstet Gynecol, 1996, 174:1056-1060.
9 Boccardo P, Soregaroli M, Aiello S, et al. Systemic and fetal maternal nitric oxide synthesis in normal pregnancy and preeclampsia. Br J Obstet Gynecol, 1996, 103:879-886.
10 Benjamin N, Vallace P. Plasma nitrite as a marker of nitric oxide production. Lancet, 1994, 344:960.
11 Nobunaga T, Tokugawa Y, Hashimoto K, et al. Plasma nitric oxide levels in pregnant patients with preeclampsia and essential hypertension. Gynecol Obstet Invest, 1996, 41:189-193.
(收稿：1997-07-03 修回：1997-12-29), http://www.100md.com