上皮性卵巢肿瘤maspin基因的表达
作者：乔玉环 郭瑞霞 孙莹璞 苏迎春
单位：450009 郑州，河南医科大学第一附属医院妇产科
关键词：
中华妇产科杂志/981023 maspin基因是1994年发现的一种肿瘤抑制基因，是丝氨酸蛋白酶抑制剂的一种[1]。maspin基因在乳腺癌发生过程中起重要作用。本研究应用免疫组化技术，检测了正常卵巢、腺瘤、交界性肿瘤和卵巢癌等组织maspin蛋白表达，探讨其在上皮性卵巢肿瘤癌变中的意义。
一、材料与方法
1.研究对象：标本选自河南医科大学第一附属医院病理科1990～1995年手术标本的蜡块，均经10%福马林固定，石蜡包埋，连续切片。其中：正常卵巢5例；腺瘤21例；卵巢癌40例(浆液性癌22例、粘液性癌13例、子宫内膜样癌5例；Ⅰ级21例、Ⅱ级12例、Ⅲ级7例)。所有患者术前均未接受放疗或化疗。
, 百拇医药
2.主要试剂：ABC试剂盒和DAB底物试剂盒购自美国Vector公司，兔抗人maspin多克隆抗体为美国国立癌症研究所(National Cancer Institute)产品。
3.方法：(1)染色方法：同Wang等[2]报道的ABC法。(2)对照：采用产生第二抗体的正常羊血清封闭非特异性免疫球蛋白与省略第一抗体作为阴性对照；采用乳腺组织的阳性切片作为阳性对照。(3)结果判定：以细胞浆和(或)细胞核内出现棕黄色细颗粒为阳性细胞。每高倍视野下，阳性细胞≥20%为阳性，<20%为阴性，不考虑染色深浅。
4.统计学分析：χ2检验或四格表确切概率法。
二、结果
1.maspin基因表达与上皮性卵巢肿瘤组织学类型的关系：maspin基因表达与上皮性卵巢肿瘤组织学类型无关。见表1。
, 百拇医药
表1 不同组织学类型的maspin蛋白表达 组织学类型
总例数
阳性例数
阳性率(%)
P值
浆液性瘤+交界性浆液瘤
19
11
57.89
>0.25
粘液性瘤+交界性粘液瘤
12
, http://www.100md.com
9
75.00
浆液性癌
22
8
36.36
>0.50
粘液性癌
13
4
30.77
内膜样癌
5
, 百拇医药
1
1/5
*例数少于10例，不计算百分比(下同) 2.maspin蛋白在不同病变中的表达：正常卵巢上皮、腺瘤及交界性肿瘤中，maspin表达基本一致；但卵巢癌中的表达率显著降低(P<0.05)。见表2。
表2 不同病变中maspin蛋白的表达 病变
总例数
maspin阳性
表达例数
阳性率
(%)
正常卵巢(a)
, 百拇医药
5
3
3/5
腺瘤(b)
21
13
61.90
交界性瘤(c)
10
7
70.00
卵巢癌(d)
40
, http://www.100md.com
14
35.00
注：a,b,c 3者比较，P>0.05；d同其它3者比较，P<0.05
3.不同病变maspin细胞定位的比较：正常卵巢和腺瘤均为胞浆表达，交界性肿瘤中仅出现1例细胞浆和细胞核共同表达，但卵巢癌中细胞核表达率上升至25%。见表3。
表3 不同肿瘤的maspin蛋白表达 病变
总
例数
阳性
例数
细胞浆
, http://www.100md.com
表达例数
细胞核
表达例数
正常卵巢
5
3
3
0
腺瘤
21
13
13
0
交界性瘤
, http://www.100md.com
10
7
7
1*
卵巢癌
40
14
6
10**
*细胞核、细胞浆共同表达1例 **细胞核、细胞浆共同表达2例 4.maspin基因与卵巢癌组织学分级的关系：maspin基因表达率随着卵巢癌组织学级别的升高而下降，I级maspin的表达率(10/21，47.61%)显著高于Ⅱ级(3/12，25.00%)、Ⅲ级(1/7，14.28%)(P<0.05)。
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三、讨论
maspin是一个刚被认识的肿瘤抑制基因[1]，其单链mRNA由3 kb碱基组成，在正常乳腺上皮细胞内有表达，但在大多数乳腺肿瘤细胞系中不表达。提示maspin基因与乳腺癌的发生有关。从正常乳腺上皮中分离出来的maspin cDNA序列中，含2 548个核苷酸，它编码的蛋白是丝氨酸蛋白酶抑制剂的一种，由375个氨基酸组成，其中内部尚有8个半胱氨酸。这些残基形成2个或2个以上的二硫键，对maspin蛋白的特异三维结构具有稳定作用。因而，可通过免疫组化方法检测出来。用maspin基因转染的MDA-Mb-435乳癌细胞，可降低裸鼠肿瘤发生和转移能力[1]。
有关maspin基因与卵巢肿瘤的关系，本研究结果显示，卵巢癌组织中maspin蛋白的表达率显著低于正常卵巢上皮、腺瘤和交界性肿瘤，与卵巢癌的发生有关，与肿瘤的组织学类型无关。但癌组织中maspin表达部位(大多为细胞核)与正常组织和腺瘤(均为细胞浆着色)显著不同。在胃癌的研究中[3]也发现了类似的结果。尽管这种分布的分子机理尚不清楚。我们推测，表达部位的差异可能是maspin基因结构和功能异常的一种表现，或是由肿瘤细胞对maspin的代谢缺陷所致。显然，进一步了解这些变化的分子机理，将有助于进一步阐明maspin基因的生物学特性和作用。maspin基因的表达，随着卵巢癌组织学分化级别的升高而下降，表明maspin基因也参与了卵巢癌的分化过程。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Zou ZQ, Anisowicz A, Mary JC, et al. Maspin, a serpin with tumor suppressing activity in human mammary epithelial cells. Science, 1994, 263:526-529.
2 Wang LD, Hong JY, Qiu SL, et al. Accumulation of p53 protein in human esophageal precancerous lesions: a possible early biomarker for carcinogenesis. Cancer Res, 1993, 53:1783-1787.
3 王立东，韦俊萍，周琦，等.胃窦部腺癌和慢性胃炎组织中maspin的表达.河南医科大学学报，1997，32：40-42.
(收稿：1998-01-21 修回：1998-04-25), 百拇医药
单位：450009 郑州，河南医科大学第一附属医院妇产科
关键词：
中华妇产科杂志/981023 maspin基因是1994年发现的一种肿瘤抑制基因，是丝氨酸蛋白酶抑制剂的一种[1]。maspin基因在乳腺癌发生过程中起重要作用。本研究应用免疫组化技术，检测了正常卵巢、腺瘤、交界性肿瘤和卵巢癌等组织maspin蛋白表达，探讨其在上皮性卵巢肿瘤癌变中的意义。
一、材料与方法
1.研究对象：标本选自河南医科大学第一附属医院病理科1990～1995年手术标本的蜡块，均经10%福马林固定，石蜡包埋，连续切片。其中：正常卵巢5例；腺瘤21例；卵巢癌40例(浆液性癌22例、粘液性癌13例、子宫内膜样癌5例；Ⅰ级21例、Ⅱ级12例、Ⅲ级7例)。所有患者术前均未接受放疗或化疗。
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2.主要试剂：ABC试剂盒和DAB底物试剂盒购自美国Vector公司，兔抗人maspin多克隆抗体为美国国立癌症研究所(National Cancer Institute)产品。
3.方法：(1)染色方法：同Wang等[2]报道的ABC法。(2)对照：采用产生第二抗体的正常羊血清封闭非特异性免疫球蛋白与省略第一抗体作为阴性对照；采用乳腺组织的阳性切片作为阳性对照。(3)结果判定：以细胞浆和(或)细胞核内出现棕黄色细颗粒为阳性细胞。每高倍视野下，阳性细胞≥20%为阳性，<20%为阴性，不考虑染色深浅。
4.统计学分析：χ2检验或四格表确切概率法。
二、结果
1.maspin基因表达与上皮性卵巢肿瘤组织学类型的关系：maspin基因表达与上皮性卵巢肿瘤组织学类型无关。见表1。
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表1 不同组织学类型的maspin蛋白表达 组织学类型
总例数
阳性例数
阳性率(%)
P值
浆液性瘤+交界性浆液瘤
19
11
57.89
>0.25
粘液性瘤+交界性粘液瘤
12
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9
75.00
浆液性癌
22
8
36.36
>0.50
粘液性癌
13
4
30.77
内膜样癌
5
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1
1/5
*例数少于10例，不计算百分比(下同) 2.maspin蛋白在不同病变中的表达：正常卵巢上皮、腺瘤及交界性肿瘤中，maspin表达基本一致；但卵巢癌中的表达率显著降低(P<0.05)。见表2。
表2 不同病变中maspin蛋白的表达 病变
总例数
maspin阳性
表达例数
阳性率
(%)
正常卵巢(a)
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5
3
3/5
腺瘤(b)
21
13
61.90
交界性瘤(c)
10
7
70.00
卵巢癌(d)
40
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14
35.00
注：a,b,c 3者比较，P>0.05；d同其它3者比较，P<0.05
3.不同病变maspin细胞定位的比较：正常卵巢和腺瘤均为胞浆表达，交界性肿瘤中仅出现1例细胞浆和细胞核共同表达，但卵巢癌中细胞核表达率上升至25%。见表3。
表3 不同肿瘤的maspin蛋白表达 病变
总
例数
阳性
例数
细胞浆
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表达例数
细胞核
表达例数
正常卵巢
5
3
3
0
腺瘤
21
13
13
0
交界性瘤
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10
7
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1*
卵巢癌
40
14
6
10**
*细胞核、细胞浆共同表达1例 **细胞核、细胞浆共同表达2例 4.maspin基因与卵巢癌组织学分级的关系：maspin基因表达率随着卵巢癌组织学级别的升高而下降，I级maspin的表达率(10/21，47.61%)显著高于Ⅱ级(3/12，25.00%)、Ⅲ级(1/7，14.28%)(P<0.05)。
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三、讨论
maspin是一个刚被认识的肿瘤抑制基因[1]，其单链mRNA由3 kb碱基组成，在正常乳腺上皮细胞内有表达，但在大多数乳腺肿瘤细胞系中不表达。提示maspin基因与乳腺癌的发生有关。从正常乳腺上皮中分离出来的maspin cDNA序列中，含2 548个核苷酸，它编码的蛋白是丝氨酸蛋白酶抑制剂的一种，由375个氨基酸组成，其中内部尚有8个半胱氨酸。这些残基形成2个或2个以上的二硫键，对maspin蛋白的特异三维结构具有稳定作用。因而，可通过免疫组化方法检测出来。用maspin基因转染的MDA-Mb-435乳癌细胞，可降低裸鼠肿瘤发生和转移能力[1]。
有关maspin基因与卵巢肿瘤的关系，本研究结果显示，卵巢癌组织中maspin蛋白的表达率显著低于正常卵巢上皮、腺瘤和交界性肿瘤，与卵巢癌的发生有关，与肿瘤的组织学类型无关。但癌组织中maspin表达部位(大多为细胞核)与正常组织和腺瘤(均为细胞浆着色)显著不同。在胃癌的研究中[3]也发现了类似的结果。尽管这种分布的分子机理尚不清楚。我们推测，表达部位的差异可能是maspin基因结构和功能异常的一种表现，或是由肿瘤细胞对maspin的代谢缺陷所致。显然，进一步了解这些变化的分子机理，将有助于进一步阐明maspin基因的生物学特性和作用。maspin基因的表达，随着卵巢癌组织学分化级别的升高而下降，表明maspin基因也参与了卵巢癌的分化过程。
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参考文献
1 Zou ZQ, Anisowicz A, Mary JC, et al. Maspin, a serpin with tumor suppressing activity in human mammary epithelial cells. Science, 1994, 263:526-529.
2 Wang LD, Hong JY, Qiu SL, et al. Accumulation of p53 protein in human esophageal precancerous lesions: a possible early biomarker for carcinogenesis. Cancer Res, 1993, 53:1783-1787.
3 王立东，韦俊萍，周琦，等.胃窦部腺癌和慢性胃炎组织中maspin的表达.河南医科大学学报，1997，32：40-42.
(收稿：1998-01-21 修回：1998-04-25), 百拇医药