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编号:10268215
解脲支原体与胎儿宫内发育迟缓关系的探讨
http://www.100md.com 《中华妇产科杂志》 1999年第5期
     作者:周怀君 李明发 程云英 单祥年

    单位:210009 南京铁道医学院妇产科教研室(周怀君,程云英),生物教研室(李明发, 单祥年)

    关键词:尿素支原体;尿素分解;胎盘;胎儿生长迟缓;聚合酶链反应

    中华妇产科杂志990508 【摘要】 目的 探讨孕妇感染解脲支原体对胎儿宫内发育的影响。方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术,分别对新生儿出生体重小于2 500 g的50例孕妇的宫颈分泌物、新生儿脐血及胎盘(试验组)和正常新生儿出生体重的50例孕妇的宫颈分泌物、新生儿脐血及胎盘进行解脲支原体检测(对照组),并对两例胎盘进行常规病理检查。结果 试验组新生儿脐血、胎盘解脲支原体的感染例数(33例)明显高于对照组(7例),两者比较,差异有显著性(P<0.05)。两组宫颈分泌物感染例数比较(37例∶30例),差异无显著性(P>0.05)。试验组有12例发生胎盘绒毛膜羊膜炎,而对照组仅有4例,两者相比,差异有显著性(P<0.05)。试验组胎盘病理检查显示,解脲支原体感染的胎盘有绒毛膜羊膜炎10例;无解脲支原体感染的胎盘有绒毛膜羊膜炎3例,两者比较,差异有显著性(P<0.05)。结论 解脲支原体可感染胎盘、脐血,影响胎儿宫内发育,是造成胎儿宫内发育迟缓的原因之一。
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    Study of Relation between Ureaplasma Urealyticum and Fetal Intrauterine

    Growth Retardation

    ZHOU Huaijun, LI Mingfa, CHENG Yunying

    Nanjing Railway Medical College, Nanjing 210009

    【Abstract】 Objective To study the influences of Ureaplasma Urealyticum (UU) infection to fetal intrauterine growth. Methods Polymerase Chain Reaction was used to detect UU in samples of cervical secretions, umbilical blood and placenta. The study group included 50 women with neonatal birth weight below 2 500 g, 50 women with newborns birth weight above 2 500 g served as control group.Results Positive rate of UU in samples of cord blood and placenta and placental chorioamnionitis in study group were higher than that in the control group (P<0.005 and P<0.05). There was no significant difference of UU positive rate in cervical samples between two groups. The positive rate of UU in cases with chorioamnionitis was higher than that of cases with negative UU infection (P<0.05). Conclusion UU may interfere fetal intrauterine growth through infecting umbilical blood and placenta.
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    【Key words】Ureaplasma urealyticum Placenta Fetal growth retardatin Polymerase chain reaction

    解脲支原体(ureaplasma urealyticum,UU)是一类介于细菌与病毒之间的最小原核生物。最近研究表明,它可寄生于人体泌尿生殖道,引起人体许多疾病,并可通过生殖道及血液传播给胎儿及新生儿[1],胎儿感染UU是否影响胎儿宫内的发育,这个问题一直引起国内外学者的关注。本研究通过对50例足月小样儿的脐血、胎盘及孕妇生殖道分泌物的UU检测,来探讨UU感染与胎儿宫内发育迟缓关系。

    材料与方法

    一、材料

    (一)临床标本与取材

    1.标本来源:于1993年2月至1995年7月,于我院妇产科,按王淑贞诊断标准[2],取产前确诊为胎儿宫内发育迟缓的50例出生体重<2 500 g的新生儿脐血、胎盘及孕妇的宫颈分泌物作为试验组;再随机取50例出生体重>2 500 g的新生儿脐血、胎盘及孕妇的宫颈分泌物作为对照组。两组孕妇均无妊娠合并症和并发症,乙型肝炎五项检查阴性;弓形体检测阴性;两组孕妇年龄在22~35岁之间;两组孕妇年龄及家庭状况比较,差异无显著性;两组新生儿平均体重分别为,试验组2 250 g和对照组3 560 g;两组孕妇的平均孕周分别为,试验组39周和对照组39周,两组比较,差异无显著性(P>0.05)。
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    2.取材:(1)宫颈分泌物:分娩前将棉签插入宫颈管内2 cm, 旋转1周后取出,放入生理盐水中冲洗,待聚合酶链反应(PCR)检测。(2)胎盘:在胎盘胎儿面行局部消毒,然后剪开羊膜及绒毛膜,取2 cm×2 cm×2 cm大小的胎盘组织置离心管内,待PCR检测,其余胎盘组织送病理检查。(3)脐血:分娩时用注射器抽出5 ml脐血放入加防凝剂的离心管内,待PCR检测。

    (二)引物及PCR扩增试剂

    采用程云英等[3]报道的引物序列及试剂。

    1.引物:引物合成、纯化由南京铁道医学院分子生物学和医学遗传学研究室完成。引物序列:5'-CAATGTAAATTCGTTTATC-3'和5'-ACTAAATTTATT-GTTGTTAA-3'。

    2.试剂来源:Taq耐热DNA聚合酶(美国GIBcoBRI公司产品)10×反应缓冲液,50 mmol/L MgCl2,NTPs(上海复华实业股份有限公司产品)。
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    二、方法

    (一)标本处理

    1.从宫颈分泌物中提取DNA:采用程云英等[3]的方法操作。

    2.从胎盘组织中提取UU DNA:将胎盘组织剪碎后加100 μl裂解液(A液、B液各50 μl),置50℃水浴3小时,煮沸10分钟,冰浴,可直接用于PCR扩增。A液: 10mmol/L盐酸盐缓冲液(pH 8.3),100 mmol/L KCl,2.5 mmol/L MgCl2。 B液:10 mmol/L Tris-HCl (pH8.3),2.5 mmol/L MgCl2, 1% TWeen(吐温),1% TritonX-100。

    3.脐血提取UU DNA:取300 μl全血于离心管内加等体积的6 mol/L NaI混匀,加等体积氯仿、异戊醇,混匀。然后1 500 r/min离心10分钟,将水相层移至另一管内,加0.6体积异丙醇混匀,1 500 r/min离心10分钟,用37%异丙醇洗脱DNA,离心后将沉淀DNA悬浮于50 μl TE缓冲液中,取10 μl用作PCR扩增。
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    (二)PCR及产物鉴定

    采用程云英等[3]报道的方法操作。

    结果

    一、两组孕妇的宫颈分泌物、胎盘及新生儿脐血UU检测结果

    在试验组中,宫颈分泌物UU阳性37例,阴性13例;新生儿脐血UU阳性15例,阴性35例;胎盘UU阳性18例,阴性32例。在脐血阳性的15例中,其宫颈分泌物及胎盘UU皆为阳性。在胎盘UU阳性的18例中,宫颈分泌物皆为阳性。在对照组中,宫颈分泌物UU阳性30例,阴性20例;新生儿脐血UU阳性4例,阴性46例;胎盘UU阳性3例,阴性47例。在胎盘UU阳性的3例中,其新生儿脐血及宫颈分泌物皆为阳性。两组宫颈分泌物UU感染率比较,差异无显著性(P>0.05);两组新生儿脐血UU阳性率比较,差异有极显著性(P<0.01);两组胎盘UU阳性率比较,差异有极显著性(P<0.005)。
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    二、胎盘病理检查结果

    试验组18例UU阳性的胎盘组织病理检查有10例慢性绒毛膜羊膜炎, 32例阴性者有2例慢性绒毛膜羊膜炎,UU阳性的慢性绒毛膜羊膜炎与UU阴性的胎盘绒毛膜羊膜炎比较,差异有显著性(P<0.05)。对照组UU阳性的3例中,胎盘有1例慢性绒毛膜羊膜炎, UU阴性的47例中有3例慢性绒毛膜羊膜炎, UU阴性与阳性者的胎盘绒毛膜羊膜炎发生率比较,差异无显著性(P>0.05)。试验组共有12例胎盘绒毛膜羊膜炎,对照组共有4例胎盘绒毛膜羊膜炎,两组比较,差异有显著性(P<0.05)。

    讨论

    一、UU与孕妇宫内感染

    近年来, UU对人体的致病性越来越受到重视,它可寄生于人泌尿生殖道,而在孕妇的下生殖道寄生率更高,可达80%[4]。本研究结果也证实了这一点。在试验组50例宫颈分泌物标本中检出UU 37例;而在对照组50例标本中检出UU 30例。从脐血和胎盘中检出UU,并且在试验组中15例脐血UU阳性者其胎盘和宫颈分泌物皆为阳性,提示UU可通过孕妇的下生殖道感染胎盘及脐血,导致胎儿宫内感染。国外学者也有类似报道,Waites等[5]从大量低体重儿的血液或脐血中培养出UU,并从患有先天性肺炎的死婴的胎盘、脐血及多种脏器中培养出UU。并推测UU可感染胎盘并通过脐血导致新生儿全身血源性播散。
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    二、 UU感染对胎儿宫内发育的影响

    本研究表明,试验组的宫颈分泌物UU感染与对照组相比较,差异无显著性(P>0.05),而脐血、胎盘的UU感染率明显增高。提示寄生于下生殖道的UU并不影响胎儿宫内发育,而只有感染胎盘、脐血时才影响胎儿发育。国外也有类似报道,Kundsin等[6]在47%低体重儿的胎盘中可检出UU。Poblo报道[7],从68例出生体重<2 500 g的早产儿的脐血中检出UU15例,而从135例足月分娩并且出生体重≥2 500 g新生儿脐血中仅检出UU阳性18例。国外学者研究表明,羊水、脐血、胎盘感染UU与新生儿低体重关系密切。胎儿气管粘膜组织与UU一起培养证明, UU可引起上皮细胞的坏死和纤毛脱落[8]。推测UU影响胎儿发育的原因可能是: (1)UU产生的氨离子引起胎儿各脏器损伤,妨碍胎儿发育;(2)UU可通过产生磷脂酶A、C而起作用,该酶催化膜磷脂储存的花生四烯酸释放,并促使其代谢物——具有生物活性的脂质介质,通过吸引中性粒细胞聚集和提高血管通透性而加重各脏器损伤,导致宫内发育迟缓[9]
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    三、 UU与胎盘绒毛膜羊膜炎的关系

    本研究结果表明,足月小样儿的胎盘绒毛膜羊膜炎发生率较高,且胎盘绒毛膜羊膜炎与脐血、胎盘感染UU有关。在21例患有绒毛膜羊膜炎的胎盘中检出UU阳性11例,而79例无绒毛膜羊膜炎的胎盘中检出UU阳性5例。国外也有类似报道,Quinn等[10]研究表明,患有绒毛膜羊膜炎的胎盘中,38%~60%可检出UU,而无绒毛膜羊膜炎的胎盘中只有13%~17%检出UU,并推测UU可引起绒毛膜羊膜炎。国外许多学者报道,60% UU感染的胎盘组织中有绒毛膜羊膜炎的组织病理学改变,并认为UU是与绒毛膜羊膜炎有关的常见微生物[5,8,11]。绒毛膜羊膜炎可使胎盘供给胎儿的氧及营养物质输送障碍,影响胎儿发育,引起胎儿宫内发育迟缓。

    参考文献

    1 Bragan MJ,Acciai J,Gallia G,et al.Development of a DNA probe for ureaplasma urealyticum. Mol Cell Probes, 1992,6:411-416.
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    2 王淑贞主编.妇产理论与实践.上海: 上海科学技术出版社,1991.734-735.

    3 程云英,李明发,周怀君,等.聚合酶链反应检测解脲支原体的方法学研究.中华医学检验杂志,1995,18:167-168.

    4 Wang EL, Cassell GH,Pablo J, et al. Ureaplasma Urealyticum and Chronic Lung Disease of Prematurity: critical appraisal of the literature on causation. Clin Infect Dis, 1993,17(Suppl 1) :112-116.

    5 Waites KB, Crouse DT,Cassell GH. Systemic neonatal infection due to ureaplasma urealyticum. Clin Infect Dis, 1993,17(Suppl 1):S131-135.
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    6 Kundsin RB, Driscoll SG, Monson PR, et al. Association of ureaplasma urealyticum in the placenta with perinatal morbidity and mortality. N Engl J Med, 1984,310:941-945.

    7 Poblo J, Sanchez PJ. Perinatal transmission of uraeplasma urealyticum:current concepts based on review of the literature. Clin Infect Dis, 1993,17(Suppl 1):107-111.

    8 Cassell GH,Waites KB,Gibbs RS,et al.Role of ureaplasma urealyticum in amnionitis. Pediatr Infect Dis J,1986,5(Suppl):247-252.
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    9 Desilva NS, Quinn PA. Endogenous activity of phospholipases A and C in ureaplasma urealyticum. J Clin Microbiol, 1986,23:354-359.

    10 Quinn PA, Butany J, THamach W. Chorioamnionitis: its association with pregnancy outcome and microbial infection.Am J Obstet Gynecol, 1997,156: 379-387.

    11 Cormior JB,Petitjean J,Asselin D,et al. Ureaplasma urealyticum and chorioamnionitis. Rev Fr Gynecol Obstet, 1989,84:25-28.

    (收稿:1998-07-01 修回:1998-12-21)

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