检测人巨细胞病毒晚期mRNA在诊断子宫内活动性感染的价值
作者：姜宏 闻良珍 凌霞珍 陈素华
单位：430031 武汉，同济医科大学附属同济医院妇产科[姜宏(现在湖南医科大学生殖工程研究室)，闻良珍，凌霞珍，陈素华]
关键词：巨细胞病毒感染；RNA；信使；疾病传播；垂直
中华妇产科杂志990607 【摘要】 目的 探讨人巨细胞病毒(HCMV)晚期mRNA检测在宫内活动性感染中的应用价值。方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对42例HCMV-IgM阳性孕妇外周血及部分胎儿附属物进行 HCMV晚期mRNA检测。结果 42例HCMV-IgM阳性孕妇中，检出晚期mRNA 23例，两者符合率为54.7%。对其中13例晚期mRNA阳性孕妇胎儿附属物进行检测，7例阳性，母婴传播率为53.8%，而12例晚期mRNA阴性，HCMV-DNA阳性孕妇胎儿附属物中仅1例阳性,母婴传播率为8.3%，两者比较，差异有非常显著性，(P<0.01)。结论 HCMV-IgM的阳性结果并不能完全准确地显示受检时HCMV的活动状态；HCMV的活动状态与母婴传播情况密切相关，晚期mRNA的检测不仅能够显示HCMV活动性感染时的宫内传播情况，而且可以了解受检时胚胎或胎儿组织内HCMV的活动状态,估计其预后。
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Diagnostic Value of Human Cytomegalovirus Late-mRNA Detection for Intrauterine Active Human Cytomegalovirus Infection
JIANG Hong*, WEN Liangzhen, LING Xiazhen, et al.*Hunan Reproductive Engineering Hunan Medical University, Changsha 410078
【Abstract】 Objective To study diagnostic value of late-mRNA detection for intrauterine active human cytomegalovirus (HCMV) infection. Methods The HCMV late-mRNA in peripheral blood of the pregnant women with HCMV-IgM positive and their fetal appendages (such as chorionic villi,amniotic fluid,umbilical blood and placenta) were detected by reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR). Results The late-mRNA was detected in 23 out of 42 HCMV-IgM positive pregnant cases, with the 54.3% of corresponding rate between the results of HCMV-IgM and HCMV late-mRNA.7 samples out of 13 fetal appendages from m-RNA positive mothers were late-mRNA positive, while in 12 mothers with late-mRNA negative group only one fetal sample was late-mRNA positive, Between two groups there was significant difference in mother-fetus transmission rate. Conclusions The positive result of HCMV-IgM can not accurately reflect HCMV activity at the time being detected, which is closely related to the mother-fetus transmission rate. As a symbol of active HCMV infection,late-mRNA can not only reflect the mother-fetus transmission rate during active HCMV infection correctly,but also provide some information about activity of the HCMV in fetal tissue, It also has a great value in prediction for prognosis of infectious fetuses.
, 百拇医药
【Key words】 Cytomegalovirus infections RNA, messenger Disease transmission, vertical
人巨细胞病毒(HCMV)在人群中普遍存在，孕妇有活动性感染时HCMV可以通过胎盘垂直传播给胎儿,对胎儿及新生儿造成多种损害。对HCMV在孕妇中的感染及母儿传播状况的研究愈来愈受到围产医学界的普遍重视。虽近年来HCMV晚期mRNA的检测已被认为是诊断HCMV活动性感染最可靠的指标[1]，但用于诊断宫内HCMV活动性感染尚未见报道。本研究采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对孕妇外周血及胎儿附属物组织的HCMV晚期mRNA进行检测,以探讨晚期mRNA在HCMV活动性感染及宫内感染中的诊断价值。
资料与方法
一、病例选择
, 百拇医药
1.病例：1997年3月至1998年2月,从在我院门诊及病房就诊的306例有异常妊娠史孕妇中，筛查出HCMV-IgM呈阳性孕妇42例，并对其进行外周血HCMV-DNA及晚期mRNA检测。
2.分组：(1)活动性感染组：孕妇外周血HCMV DNA和晚期mRNA均为阳性者，共13例。(2)非活动性感染组：孕妇外周血HCMV-DNA阳性而晚期mRNA为阴性者，共12例。对以上两组孕妇的胎儿附属物组织(绒毛、羊水、脐血或胎盘)进行HCMV-mRNA检测,观察比较其母婴垂直传播率。
二、标本采集及处理
1.外周血 ：抽取孕妇外周血3ml等量放入3个EP管中,1管离心分离血清用于HCMV-IgM检测；2管2%乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝用于HCMV-DNA检测；3管10μ肝素抗凝用于HCMV晚期mRNA的检测。
2.脐血 ：胎儿娩出后,在未断脐情况下立即擦净胎儿端脐带表面血迹,活力碘消毒该段脐带后,抽取脐血1ml，10U肝素抗凝用于HCMV晚期 mRNA的检测。
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3.羊水: B超引导下经羊膜腔穿刺抽取清亮之羊水5ml加入EP管中，以5 000r/min离心5分钟，弃上清,沉淀待检。
4.绒毛及胎盘组织：取新鲜绒毛或胎盘组织10～20 mg，在二乙基焦磷酰胺(DEPC)处理水中漂洗,匀浆器中研磨后置EP管中待检。
三、方法
1.HCMV-IgM的检测：采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法，试剂盒系美国Hope公司产品，操作按说明书进行。试剂盒中有抗人IgG抗体，已排除了类风湿因子(RF)或患者标本中所含特异性IgG抗体对检测结果的影响。
2.HCMV-DNA的检测：采用PCR法。常规提取血液或组织中的DNA,HCMV PCR检测试剂盒由上海第二医科大学生化室提供,扩增片段为151bp,操作及结果判断均严格按说明书进行。
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3.HCMV-mRNA的检测：采用RT-PCR法。参照胡冬贵等[2]的方法提取血液、羊水及组织中的细胞质总RNA。引物设计参照文献[3]，两条引物的序列为： C1 5′GTGATCCGACTGGGCGAAAA 3′ C2 5′GAGCGCGTCCACAAAGTCTA 3′ 其基因位置分别位于1198～1217和1461～1442,扩增片段为263bp,由上海生工生物工程公司合成。RT-PCR试剂盒购自美国Promega公司,在国产SRX-481 PCR扩增仪上进行逆转录和PCR，反应条件为48℃逆转录45分钟,94℃灭活及预变性2分钟,94℃30秒,60℃ 60秒,68℃ 120秒,反应40个循环,68℃延伸7分钟,取反应产物10μl在2%琼脂糖凝胶上80V电泳40分钟,紫外灯下观察判断结果。
四、统计学方法
采用χ2检验处理数据。
结果
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一、 HCMV-mRNA的检测率与HCMV-IgM阳性率的比较
306例有异常妊娠史的孕妇中共检出HCMV-IgM阳性患者42例,检出率为13.7%,对其外周血HCMV-mRNA和HCMV-DNA进行检测，DNA和mRNA阳性者分别为37例和23例，其中23例mRNA阳性者DNA均为阳性；HCMV-IgM和HCMV-DNA与HCMV-mRNA的阳性符合率分别为54.7%(23/42)和62.2%(23/37)。
二、两组孕妇宫内感染率的比较
活动性感染组的胎儿附属物中，共检出HCMV-mRNA阳性者7例,其中，4例绒毛阳性；3例羊水、绒毛皆为阳性；其母婴垂直传播率为53.8%(7/13)。非活动性感染组的胎儿附属物中，共检出HCMV-mRNA阳性者1例,其中5例绒毛中1例阳性；其母婴垂直传播率为8.3%(1/12)。经χ2检验，活动性感染组与非活动性感染组孕妇HCMV母婴垂直传播率比较，差异有非常显著性(P<0.01)。
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讨论
一、 HCMV-IgM检测的临床价值
HCMV无论是原发或继发活动性感染时，体内可产生特异性抗HCMV抗体IgM。因此，HCMV-IgM的检测一直被作为HCMV活动性感染的指标。但临床应用显示其敏感性较低,并且产生后可在体内持续数月之久。在这期间各种因素导致孕妇免疫功能的变化都可能改变HCMV的活动状态,而血液中HCMV-IgM仍可呈现阳性。因此，IgM的阳性结果并不能准确显示检测当时HCMV的活动状态。Velzing等[4]报道，在8例HCMV-IgM阳性患者中仅1例即刻早期mRNA检测为阳性，结果提示，HCMV-IgM与HCMV-DNA之间并无相关性。本研究对42例HCMV-IgM阳性的孕妇外周血进行 HCMV-mRNA检测，23例为阳性,符合率仅为54.7%,因此，临床上应慎重对待IgM的检测结果。尚不能把HCMV-IgM阳性视为HCMV的活动状态的唯一指标。
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二、HCMV-mRNA 检测的临床价值
以往资料多以IgM作为HCMV活动性感染的指标,其宫内传播率约为 37%[5]。但IgM阳性并不全是活动性感染,不能准确显示HCMV活动性感染时的宫内传播率。而HCMV晚期基因的转录产物——晚期mRNA直接翻译病毒的结构蛋白,不仅与病毒基因的复制有关,而且是具有完整病毒循环的标志,因而被认为是HCMV活动性感染最可靠的指标,已被越来越多地应用于HCMV感染的临床诊断及疗效观察中[3，6，7]。以晚期mRNA作为阳性指标，不仅能正确反映HCMV活动性感染时的宫内传播率,而且可以通过对胎儿附属物晚期mRNA的检测,了解受检时胎儿HCMV的活动状态,对胎儿预后的估计有重要的临床意义。本研究采用RT-PCR法,对外周血HCMV晚期mRNA阳性的活动性感染孕妇的胎儿 附属物进行检测,其宫内感染率达53.8%,而外周血HCMV-DNA阳性、晚期mRNA阴性的非活动性感染宫内传播率为8.3%,两者比较有非常显著性差异，说明HCMV的活动状态与宫内传播率密切相关。
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用PCR法检测HCMV-DNA只能反映HCMV某一DNA片段的存在,并不能反映其活动状态,而非活动性感染一般不构成垂直传播[8]，因此，其临床诊断价值受到怀疑。本研究结果显示,1例非活动性感染(HCMV DNA阳性，晚期mRNA阴性)孕妇脐血HCMV-mRNA检测呈阳性，表明存在着宫内垂直传播。我们认为这是因为在HCMV感染后的一段时间,可能由于外在(如药物等)或内在因素(如激素等)的影响导致母体免疫功能或其他方面的变化,使得体内的HCMV处于抑制或非活动状态,而已经发生宫内感染的胎儿由于免疫系统发育不成熟，使得HCMV在胎儿体内持续处于活动状态。因此，对于外周血HCMV-DNA阳性晚期mRNA阴性的非活动性感染孕妇也不能完全排除胎儿宫内感染的可能性,必要时应检查胎儿附属物。
因此，单纯检查HCMV-IgM或DNA临床意义不大，HCMV-mRNA的检测不仅可以反映HCMV的活动状态，正确估计活动性感染在宫内的传播情况，而且可以了解受检时胎儿HCMV的活动状态,估计其预后，具有临床推广应用价值。
, 百拇医药
本课题受国家“九五”重点攻关项目资助(编号：96-904-06-08)
参考文献
1 Gozlan J, Caburet F, Tancrede C, et al. A reverse polymerase chain reaction method for detection of human cytomegalovirus late transcripts in cells infected in vitro. J Virol Methods, 1992,40:1-10.
2 胡冬贵, 黎青, 华小云, 等. 真核细胞质总RNA快速提取和鉴定技术的改进. 中华医学遗传学杂志, 1996,13:179-180.
3 Gozlan J, Salord JM, Chouaid C, et al. Human cytomegalovirus (HCMV) late-mRNA detection in peripheral blood of AIDS patients: diagnostic value for HCMV disease compared with these of viral culture and HCMV DNA detection. J Clin Microbiol, 1993, 31:1943-1945.
, 百拇医药
4 Velzing J,Rothbarth PH,Kroes ACM,et al. Detection of cytomegalovirus mRNA and DNA encoding the immediate early gene in peripheral blood leukocytes form immunocompromised patients. J Med Virol, 1994, 42:164-169.
5 闻良珍, 吴圣楣，吕绳敏，等. 三城市孕妇人巨细胞病毒感染及其母婴传播的流行病学调查. 中华妇产科杂志, 1996,31:714-717.
6 Bitsch A, Kirchner H, Dupke R, et al. Cytomegalovirus transcripts in peripheral blood leukcytes of actively infected transplant patients by reverse transcriptiion polymerase chain reaction. J Infect Dis, 1993,167:740-743.
, 百拇医药
7 Meyer-konig U, Serr A, von Laer O,et al. Human cytomegalovirus immediate early and late transcripts in peropheral blood leukocytes: diagnostic value in renal transplant recipients. J Infect Dis, 1995,171:705.
8 庄依亮. 妊娠期巨细胞病毒感染. 实用妇产科杂志, 1998, 14: 22-23.
收稿：1998-08-04
修回：1999-03-04, http://www.100md.com
单位：430031 武汉，同济医科大学附属同济医院妇产科[姜宏(现在湖南医科大学生殖工程研究室)，闻良珍，凌霞珍，陈素华]
关键词：巨细胞病毒感染；RNA；信使；疾病传播；垂直
中华妇产科杂志990607 【摘要】 目的 探讨人巨细胞病毒(HCMV)晚期mRNA检测在宫内活动性感染中的应用价值。方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对42例HCMV-IgM阳性孕妇外周血及部分胎儿附属物进行 HCMV晚期mRNA检测。结果 42例HCMV-IgM阳性孕妇中，检出晚期mRNA 23例，两者符合率为54.7%。对其中13例晚期mRNA阳性孕妇胎儿附属物进行检测，7例阳性，母婴传播率为53.8%，而12例晚期mRNA阴性，HCMV-DNA阳性孕妇胎儿附属物中仅1例阳性,母婴传播率为8.3%，两者比较，差异有非常显著性，(P<0.01)。结论 HCMV-IgM的阳性结果并不能完全准确地显示受检时HCMV的活动状态；HCMV的活动状态与母婴传播情况密切相关，晚期mRNA的检测不仅能够显示HCMV活动性感染时的宫内传播情况，而且可以了解受检时胚胎或胎儿组织内HCMV的活动状态,估计其预后。
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Diagnostic Value of Human Cytomegalovirus Late-mRNA Detection for Intrauterine Active Human Cytomegalovirus Infection
JIANG Hong*, WEN Liangzhen, LING Xiazhen, et al.*Hunan Reproductive Engineering Hunan Medical University, Changsha 410078
【Abstract】 Objective To study diagnostic value of late-mRNA detection for intrauterine active human cytomegalovirus (HCMV) infection. Methods The HCMV late-mRNA in peripheral blood of the pregnant women with HCMV-IgM positive and their fetal appendages (such as chorionic villi,amniotic fluid,umbilical blood and placenta) were detected by reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR). Results The late-mRNA was detected in 23 out of 42 HCMV-IgM positive pregnant cases, with the 54.3% of corresponding rate between the results of HCMV-IgM and HCMV late-mRNA.7 samples out of 13 fetal appendages from m-RNA positive mothers were late-mRNA positive, while in 12 mothers with late-mRNA negative group only one fetal sample was late-mRNA positive, Between two groups there was significant difference in mother-fetus transmission rate. Conclusions The positive result of HCMV-IgM can not accurately reflect HCMV activity at the time being detected, which is closely related to the mother-fetus transmission rate. As a symbol of active HCMV infection,late-mRNA can not only reflect the mother-fetus transmission rate during active HCMV infection correctly,but also provide some information about activity of the HCMV in fetal tissue, It also has a great value in prediction for prognosis of infectious fetuses.
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【Key words】 Cytomegalovirus infections RNA, messenger Disease transmission, vertical
人巨细胞病毒(HCMV)在人群中普遍存在，孕妇有活动性感染时HCMV可以通过胎盘垂直传播给胎儿,对胎儿及新生儿造成多种损害。对HCMV在孕妇中的感染及母儿传播状况的研究愈来愈受到围产医学界的普遍重视。虽近年来HCMV晚期mRNA的检测已被认为是诊断HCMV活动性感染最可靠的指标[1]，但用于诊断宫内HCMV活动性感染尚未见报道。本研究采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对孕妇外周血及胎儿附属物组织的HCMV晚期mRNA进行检测,以探讨晚期mRNA在HCMV活动性感染及宫内感染中的诊断价值。
资料与方法
一、病例选择
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1.病例：1997年3月至1998年2月,从在我院门诊及病房就诊的306例有异常妊娠史孕妇中，筛查出HCMV-IgM呈阳性孕妇42例，并对其进行外周血HCMV-DNA及晚期mRNA检测。
2.分组：(1)活动性感染组：孕妇外周血HCMV DNA和晚期mRNA均为阳性者，共13例。(2)非活动性感染组：孕妇外周血HCMV-DNA阳性而晚期mRNA为阴性者，共12例。对以上两组孕妇的胎儿附属物组织(绒毛、羊水、脐血或胎盘)进行HCMV-mRNA检测,观察比较其母婴垂直传播率。
二、标本采集及处理
1.外周血 ：抽取孕妇外周血3ml等量放入3个EP管中,1管离心分离血清用于HCMV-IgM检测；2管2%乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝用于HCMV-DNA检测；3管10μ肝素抗凝用于HCMV晚期mRNA的检测。
2.脐血 ：胎儿娩出后,在未断脐情况下立即擦净胎儿端脐带表面血迹,活力碘消毒该段脐带后,抽取脐血1ml，10U肝素抗凝用于HCMV晚期 mRNA的检测。
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3.羊水: B超引导下经羊膜腔穿刺抽取清亮之羊水5ml加入EP管中，以5 000r/min离心5分钟，弃上清,沉淀待检。
4.绒毛及胎盘组织：取新鲜绒毛或胎盘组织10～20 mg，在二乙基焦磷酰胺(DEPC)处理水中漂洗,匀浆器中研磨后置EP管中待检。
三、方法
1.HCMV-IgM的检测：采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法，试剂盒系美国Hope公司产品，操作按说明书进行。试剂盒中有抗人IgG抗体，已排除了类风湿因子(RF)或患者标本中所含特异性IgG抗体对检测结果的影响。
2.HCMV-DNA的检测：采用PCR法。常规提取血液或组织中的DNA,HCMV PCR检测试剂盒由上海第二医科大学生化室提供,扩增片段为151bp,操作及结果判断均严格按说明书进行。
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3.HCMV-mRNA的检测：采用RT-PCR法。参照胡冬贵等[2]的方法提取血液、羊水及组织中的细胞质总RNA。引物设计参照文献[3]，两条引物的序列为： C1 5′GTGATCCGACTGGGCGAAAA 3′ C2 5′GAGCGCGTCCACAAAGTCTA 3′ 其基因位置分别位于1198～1217和1461～1442,扩增片段为263bp,由上海生工生物工程公司合成。RT-PCR试剂盒购自美国Promega公司,在国产SRX-481 PCR扩增仪上进行逆转录和PCR，反应条件为48℃逆转录45分钟,94℃灭活及预变性2分钟,94℃30秒,60℃ 60秒,68℃ 120秒,反应40个循环,68℃延伸7分钟,取反应产物10μl在2%琼脂糖凝胶上80V电泳40分钟,紫外灯下观察判断结果。
四、统计学方法
采用χ2检验处理数据。
结果
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一、 HCMV-mRNA的检测率与HCMV-IgM阳性率的比较
306例有异常妊娠史的孕妇中共检出HCMV-IgM阳性患者42例,检出率为13.7%,对其外周血HCMV-mRNA和HCMV-DNA进行检测，DNA和mRNA阳性者分别为37例和23例，其中23例mRNA阳性者DNA均为阳性；HCMV-IgM和HCMV-DNA与HCMV-mRNA的阳性符合率分别为54.7%(23/42)和62.2%(23/37)。
二、两组孕妇宫内感染率的比较
活动性感染组的胎儿附属物中，共检出HCMV-mRNA阳性者7例,其中，4例绒毛阳性；3例羊水、绒毛皆为阳性；其母婴垂直传播率为53.8%(7/13)。非活动性感染组的胎儿附属物中，共检出HCMV-mRNA阳性者1例,其中5例绒毛中1例阳性；其母婴垂直传播率为8.3%(1/12)。经χ2检验，活动性感染组与非活动性感染组孕妇HCMV母婴垂直传播率比较，差异有非常显著性(P<0.01)。
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讨论
一、 HCMV-IgM检测的临床价值
HCMV无论是原发或继发活动性感染时，体内可产生特异性抗HCMV抗体IgM。因此，HCMV-IgM的检测一直被作为HCMV活动性感染的指标。但临床应用显示其敏感性较低,并且产生后可在体内持续数月之久。在这期间各种因素导致孕妇免疫功能的变化都可能改变HCMV的活动状态,而血液中HCMV-IgM仍可呈现阳性。因此，IgM的阳性结果并不能准确显示检测当时HCMV的活动状态。Velzing等[4]报道，在8例HCMV-IgM阳性患者中仅1例即刻早期mRNA检测为阳性，结果提示，HCMV-IgM与HCMV-DNA之间并无相关性。本研究对42例HCMV-IgM阳性的孕妇外周血进行 HCMV-mRNA检测，23例为阳性,符合率仅为54.7%,因此，临床上应慎重对待IgM的检测结果。尚不能把HCMV-IgM阳性视为HCMV的活动状态的唯一指标。
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二、HCMV-mRNA 检测的临床价值
以往资料多以IgM作为HCMV活动性感染的指标,其宫内传播率约为 37%[5]。但IgM阳性并不全是活动性感染,不能准确显示HCMV活动性感染时的宫内传播率。而HCMV晚期基因的转录产物——晚期mRNA直接翻译病毒的结构蛋白,不仅与病毒基因的复制有关,而且是具有完整病毒循环的标志,因而被认为是HCMV活动性感染最可靠的指标,已被越来越多地应用于HCMV感染的临床诊断及疗效观察中[3，6，7]。以晚期mRNA作为阳性指标，不仅能正确反映HCMV活动性感染时的宫内传播率,而且可以通过对胎儿附属物晚期mRNA的检测,了解受检时胎儿HCMV的活动状态,对胎儿预后的估计有重要的临床意义。本研究采用RT-PCR法,对外周血HCMV晚期mRNA阳性的活动性感染孕妇的胎儿 附属物进行检测,其宫内感染率达53.8%,而外周血HCMV-DNA阳性、晚期mRNA阴性的非活动性感染宫内传播率为8.3%,两者比较有非常显著性差异，说明HCMV的活动状态与宫内传播率密切相关。
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因此，单纯检查HCMV-IgM或DNA临床意义不大，HCMV-mRNA的检测不仅可以反映HCMV的活动状态，正确估计活动性感染在宫内的传播情况，而且可以了解受检时胎儿HCMV的活动状态,估计其预后，具有临床推广应用价值。
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参考文献
1 Gozlan J, Caburet F, Tancrede C, et al. A reverse polymerase chain reaction method for detection of human cytomegalovirus late transcripts in cells infected in vitro. J Virol Methods, 1992,40:1-10.
2 胡冬贵, 黎青, 华小云, 等. 真核细胞质总RNA快速提取和鉴定技术的改进. 中华医学遗传学杂志, 1996,13:179-180.
3 Gozlan J, Salord JM, Chouaid C, et al. Human cytomegalovirus (HCMV) late-mRNA detection in peripheral blood of AIDS patients: diagnostic value for HCMV disease compared with these of viral culture and HCMV DNA detection. J Clin Microbiol, 1993, 31:1943-1945.
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4 Velzing J,Rothbarth PH,Kroes ACM,et al. Detection of cytomegalovirus mRNA and DNA encoding the immediate early gene in peripheral blood leukocytes form immunocompromised patients. J Med Virol, 1994, 42:164-169.
5 闻良珍, 吴圣楣，吕绳敏，等. 三城市孕妇人巨细胞病毒感染及其母婴传播的流行病学调查. 中华妇产科杂志, 1996,31:714-717.
6 Bitsch A, Kirchner H, Dupke R, et al. Cytomegalovirus transcripts in peripheral blood leukcytes of actively infected transplant patients by reverse transcriptiion polymerase chain reaction. J Infect Dis, 1993,167:740-743.
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7 Meyer-konig U, Serr A, von Laer O,et al. Human cytomegalovirus immediate early and late transcripts in peropheral blood leukocytes: diagnostic value in renal transplant recipients. J Infect Dis, 1995,171:705.
8 庄依亮. 妊娠期巨细胞病毒感染. 实用妇产科杂志, 1998, 14: 22-23.
收稿：1998-08-04
修回：1999-03-04, http://www.100md.com