分泌性中耳炎中耳积液内毒素和一氧化氮测定
作者：徐万春 王苹 王秀 刘桂芝
单位：130021 长春 白求恩医科大学第一临床学院耳鼻咽喉科
关键词：
中华耳鼻咽喉科杂志980431 分泌性中耳炎(OME)的病因至今尚未明确，其中细菌感染的研究备受重视，但细菌感染导致中耳积液的机理尚不完全清楚。我们通过70例OME患者85耳中耳积液中内毒素、NO(一氧化氮)的含量测定，探讨细菌感染导致OME的机理。
一、材料和方法
1.临床资料：分泌性中耳炎70例(85耳)，纯音测听、导抗测听检查为传导性聋，根据病程分为急性组(<30天)42例，慢性组(>30天和反复发作者)28例。对照组30例，均为健康献血者。
2.方法：无菌抽取中耳积液(0.1ml以上)，离心后取上清液置低温冰箱保存；同时抽取患者静脉血，分离血清备用。
, 百拇医药
内毒素测定：采用鲎试验，以大肠杆菌标准内毒素为阳性对照，根据形成胶的软硬程度判定结果，硬胶为强阳性，软胶为弱阳性，未形成胶为阴性。
血清、中耳积液中NO含量测定：使用镉还原法进行检测[1]。Greiss试剂和亚硝酸钠购自中国军事医学科学院。
二、结果
1.中耳积液中内毒素、NO含量相关性：85耳积液中内毒素阳性者45耳(37例)占47.1%，双侧患耳积液中内毒素反应一致；内毒素阳性反应中耳积液中NO含量为(75.23±11.17)μmol/L，阴性反应40耳(33例)，NO含量为(38.85±8.40)μmol/L，两组相比差异有显著性(P<0.01，t检验，下同)。OME患者血清中NO含量为(19.45±3.12)μmol/L，较对照组(7.66±0.78)μmol/L为高(P<0.05)，而中耳积液中NO含量(69.55±10.23)μmol/L又明显高于患者血清及正常组(P<0.01)。
, 百拇医药
2.急、慢性OME中耳积液中NO含量：内毒素阳性反应45耳中急性OME浆液性积液29耳，慢性OME粘液性积液16耳，二者NO含量不同，粘液性积液NO含量(85.98±12.47)μmol/L高于浆液性积液(62.10±9.80)μmol/L，两者差异有显著性(P<0.05)。
三、讨论
内源性NO是L-精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)的作用下合成的。NOS有两种：一氧化氮诱生酶(iNOS)及一氧化氮原生酶(cNOS)。iNOS在存在于许多免疫细胞中，受脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)及细胞因子等活性物质激活，催化产生的NO量较多。中耳粘膜组织中的巨噬细胞、白细胞内均有iNOS存在。许多研究者均从中耳积液中检测到细菌的存在，并从慢性OME患者的中耳积液中分离到LPS。我们的实验中，47.1%的中耳积液有内毒素的存在，且内毒素阳性的积液中NO的浓度明显高于内毒素阴性组。推测：细菌中的LPS等活性物质刺激中耳粘膜免疫细胞，使iNOS表达量增加，致NO合成增加，而过量的NO可以直接导致组织损伤，NO的氧化产物NO2、NO3、过亚硝酸盐具有比NO更强的细胞毒性作用，致使局部组织产生炎症、水肿，咽鼓管阻塞，导致中耳积液。
, 百拇医药
我们发现OME患者的血清中NO含量比健康人高，而中耳积液中的NO含量又较血清中者为高，可见细菌产生的内毒素也影响整个机体，但OME仍以局部病变为主。慢性组积液多为粘液性，其NO含量与急性浆液性积液相比显著增加。因此中耳积液的浓缩也是造成NO含量增高、中耳炎迁延不愈的重要原因。在Ball等[2]的研究中，将LPS注入大鼠中耳腔，发现能够诱导产生中耳积液，如果将LPS和L-NAME(N-nitrio-Larginine methyl ester一种NOS的抑制剂)同时注入，则中耳积液明显减少。因此，使用特异性NOS抑制剂减少中耳粘膜NO的过度生成，有希望成为OME治疗中有价值的药物。
参考文献
1茅惠明.血清中硝酸盐的镀、铜、镉还原测定法.临床检验杂志，1995，13：6-8.
2Ball SS, Prazma J, Dais D, et al. Nitric oxide: a mediator of endotoxin-induced middle ear effusions. Laryngoscope, 1996, 106:1021-1027.
(收稿：1997-08-01 修回：1997-12-28), http://www.100md.com
单位：130021 长春 白求恩医科大学第一临床学院耳鼻咽喉科
关键词：
中华耳鼻咽喉科杂志980431 分泌性中耳炎(OME)的病因至今尚未明确，其中细菌感染的研究备受重视，但细菌感染导致中耳积液的机理尚不完全清楚。我们通过70例OME患者85耳中耳积液中内毒素、NO(一氧化氮)的含量测定，探讨细菌感染导致OME的机理。
一、材料和方法
1.临床资料：分泌性中耳炎70例(85耳)，纯音测听、导抗测听检查为传导性聋，根据病程分为急性组(<30天)42例，慢性组(>30天和反复发作者)28例。对照组30例，均为健康献血者。
2.方法：无菌抽取中耳积液(0.1ml以上)，离心后取上清液置低温冰箱保存；同时抽取患者静脉血，分离血清备用。
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内毒素测定：采用鲎试验，以大肠杆菌标准内毒素为阳性对照，根据形成胶的软硬程度判定结果，硬胶为强阳性，软胶为弱阳性，未形成胶为阴性。
血清、中耳积液中NO含量测定：使用镉还原法进行检测[1]。Greiss试剂和亚硝酸钠购自中国军事医学科学院。
二、结果
1.中耳积液中内毒素、NO含量相关性：85耳积液中内毒素阳性者45耳(37例)占47.1%，双侧患耳积液中内毒素反应一致；内毒素阳性反应中耳积液中NO含量为(75.23±11.17)μmol/L，阴性反应40耳(33例)，NO含量为(38.85±8.40)μmol/L，两组相比差异有显著性(P<0.01，t检验，下同)。OME患者血清中NO含量为(19.45±3.12)μmol/L，较对照组(7.66±0.78)μmol/L为高(P<0.05)，而中耳积液中NO含量(69.55±10.23)μmol/L又明显高于患者血清及正常组(P<0.01)。
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2.急、慢性OME中耳积液中NO含量：内毒素阳性反应45耳中急性OME浆液性积液29耳，慢性OME粘液性积液16耳，二者NO含量不同，粘液性积液NO含量(85.98±12.47)μmol/L高于浆液性积液(62.10±9.80)μmol/L，两者差异有显著性(P<0.05)。
三、讨论
内源性NO是L-精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)的作用下合成的。NOS有两种：一氧化氮诱生酶(iNOS)及一氧化氮原生酶(cNOS)。iNOS在存在于许多免疫细胞中，受脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)及细胞因子等活性物质激活，催化产生的NO量较多。中耳粘膜组织中的巨噬细胞、白细胞内均有iNOS存在。许多研究者均从中耳积液中检测到细菌的存在，并从慢性OME患者的中耳积液中分离到LPS。我们的实验中，47.1%的中耳积液有内毒素的存在，且内毒素阳性的积液中NO的浓度明显高于内毒素阴性组。推测：细菌中的LPS等活性物质刺激中耳粘膜免疫细胞，使iNOS表达量增加，致NO合成增加，而过量的NO可以直接导致组织损伤，NO的氧化产物NO2、NO3、过亚硝酸盐具有比NO更强的细胞毒性作用，致使局部组织产生炎症、水肿，咽鼓管阻塞，导致中耳积液。
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我们发现OME患者的血清中NO含量比健康人高，而中耳积液中的NO含量又较血清中者为高，可见细菌产生的内毒素也影响整个机体，但OME仍以局部病变为主。慢性组积液多为粘液性，其NO含量与急性浆液性积液相比显著增加。因此中耳积液的浓缩也是造成NO含量增高、中耳炎迁延不愈的重要原因。在Ball等[2]的研究中，将LPS注入大鼠中耳腔，发现能够诱导产生中耳积液，如果将LPS和L-NAME(N-nitrio-Larginine methyl ester一种NOS的抑制剂)同时注入，则中耳积液明显减少。因此，使用特异性NOS抑制剂减少中耳粘膜NO的过度生成，有希望成为OME治疗中有价值的药物。
参考文献
1茅惠明.血清中硝酸盐的镀、铜、镉还原测定法.临床检验杂志，1995，13：6-8.
2Ball SS, Prazma J, Dais D, et al. Nitric oxide: a mediator of endotoxin-induced middle ear effusions. Laryngoscope, 1996, 106:1021-1027.
(收稿：1997-08-01 修回：1997-12-28), http://www.100md.com