血管通透性因子在鼻息肉中的表达及意义
作者：杨继红 孔红 董震 关桂梅 李士新 杨占泉
单位：130031 长春 白求恩医科大学第三临床学院耳鼻咽喉-头颈外科
关键词：鼻息肉；；毛细血管通透性；；内皮；血管
中华耳鼻咽喉科杂志980514 【摘要】 目的 探讨血管通透性因子(vascular permeability factor,VPF)在鼻息肉组织中的表达及意义。方法 将9例鼻息肉标本及8例下鼻甲粘膜标本行VPF及其受体flk-1的免疫组化染色，光镜观查。结果 VPF在鼻息肉组织的血管内皮细胞和腺体细胞的表达明显高于下鼻甲组织(P<0.01,P<0.05),flk-1在血管内皮细胞的表达明显高于下鼻甲组织(P<0.01)。结论 VPF对鼻息肉发生过程中组织极度水肿的产生可能有非常重要的作用。
Expression and significance of vascular permeability factor in nasal polyps Yang Jihong, Kong Hong, Dong Zhen, et al.Third Clinical College, Bethune University of Medical Sciences, Changchun 130031
, 百拇医药
【Abstract】 Objective To study the expression and significance of vascular permeability factor(VPF) in nasal polyps. Methods Expression of VPF and its receptor flk-1 in nasal polyps from 9 patients and inferior turbinates from 8 patients with chronic rhinitis were prospectively studied with immunohistochemistry. Each tissue section was observed under optical microscope. Results The VPF positivity in vascular endothelium and in gland cell was significantly higher in nasal polyps than in inferior turbinates ( P< 0.01 and P<0.05, respectively). The flk-1 labeling index of vascular endothelium was significantly higher in nasal polyps than that in inferior turbinates (P<0.01). Conclusion VPF may play a key role in the formation of heavy edema of nasal polyps.
, 百拇医药
【Key Words】 Nasal polyps Capillary permeability Endothelium, vascular
八十年代初，Senger等[1](1983)在研究癌性腹水病理时发现，肿瘤细胞可分泌一种使血管通透性显著增高的物质，命名为血管通透性因子(vascular permeability factor, VPF),又因其可促使血管内皮细胞增殖，有新生血管生成作用，又称其为血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)。近年在研究VPF的血管通透效应时发现，该因子是已知的最强的血管通透因子，相当于组织胺的50 000倍，抗组胺药及多种炎性抑制剂均不能抑制其血管通透作用[1]。鉴于鼻息肉的病理特征，我们推测VPF对鼻息肉组织极度水肿的产生可能有重要的作用。但鼻粘膜在正常和炎性病理条件下VPF的表达诱生、调控因素等诸多方面尚不清楚。本组以免疫组化技术对鼻息肉组织内的VPF及其受体flk-1进行检测，报道如下。
, http://www.100md.com
材料和方法
9例鼻息肉组织标本来源于我科行鼻息肉手术切除的患者(男5例，女4例，年龄22～72岁)，8例下鼻甲粘膜来源于慢性鼻炎行下鼻甲切除的患者。新鲜胎盘组织作为阳性对照，来源于我院妇产科剖宫产2例产妇。兔抗VPF及flk-1多克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品。SP试剂盒包括生物素标记的兔IgG和链霉亲合素标记的辣根过氧化物酶(HRP)为美国Zymed公司产品。抗体均以磷酸盐缓冲液(PBS，pH 7.4)稀释，两种一抗稀释为1∶50, 二抗及HRP稀释为1∶100。
所有标本均用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，片厚5 μm。采用免疫组化SP法染色，微波炉枸橼酸盐缓冲液抗原修复，DAB显色，苏木精复染。
阳性判断标准：与胎盘组织的血管内皮阳性染色相比，相同或比其深者为阳性，比其弱或没有染色者为阴性。PBS替代一抗作阴性对照。
, http://www.100md.com
上皮细胞阳性百分比通过计数每张切片上所有视野(×400)中阳性视野所占比率。腺体及血管阳性计数为任选10个视野中阳性表达腺体数及血管数所占百分比。统计分析用成组设计两样本比较Wilcoxon t检验。
结果
每种抗体的阴性对照均为阴性。阳性对照的胎盘组织血管内皮细胞中可见明显棕色染色(图1)。两种抗体在鼻息肉组织和下鼻甲粘膜的上皮细胞、血管内皮细胞、腺体细胞和散在分布的浆细胞样细胞及一些不能确定性质的细胞胞浆内均可见棕色染色(图2, 3)。鼻息肉组织 的VPF表达在血管和腺体阳性数明显高于下鼻甲组，flk-1在血管内皮的阳性表达也明显高于下鼻甲组，P值分别小于0.01、0.05、0.01。①上皮细胞阳性表达均为连续阳性及连续阴性(即指上皮的阳性或阴性是连续分布的)；②上皮的VPF和flk-1表达在两种组织间无统计学差异。
讨论
, 百拇医药
本实验用下鼻甲粘膜作为对照，因为尽管下鼻甲是鼻腔，乃至整个呼吸道首当其冲受到外界各种因素作用的部位，包括炎性刺激，但下鼻甲却很少发生息肉。另外我们以胎盘作为阳性对照，基于其有丰富的新生血管，而VPF在胎盘上有广泛的、高水平的表达[2]。本实验结果显示鼻息肉及下鼻甲组织的上皮阳性数无统计学差异，因为下鼻甲粘膜取自慢性鼻炎患者，可能由于炎性刺激使VPF在上皮表达。鼻息肉组织血管内皮VPF及其受体flk-1的表达明显高于下鼻甲粘膜，并且根据VPF对血管的高通透作用，加之鼻息肉组织极度水肿的病理特点，似可推断VPF在鼻息肉的病理形成过程中发挥作用。另外，尤其引起我们注意的是VPF在鼻息肉腺体中的表达明显高于下鼻甲者，根据鼻息肉的病理特点也包括腺体的增殖，推测VPF除有血管内皮增殖作用，或许也能促使腺体细胞的增殖，从而从多方面发挥其促使鼻息肉形成的作用。但flk-1在两种组织腺体中的表达没有统计学差异，至于VPF通过何种途径作用于腺体还仍需进一步探讨。
Norlander等认为粘膜上皮损害是鼻息肉形成的最主要因素。临床上观察到鼻息肉术后的复发是通过水囊泡和水肿性肉芽增生两种方式从创面上长出的，尤其水肿性肉芽增生型的病例多发生在经过多次手术中鼻甲及其基部都已切除，骨创面暴露较大者[3]。结合VPF在创口愈合等组织修复过程有表达[4]，使我们推测鼻息肉切除术后创面的水肿不能简单地理解为鼻息肉复发，很可能是VPF参与组织修复过程的结果。另外在实践中发现，尽可能保留中鼻甲和筛窦内壁的骨质及粘膜可以减少水肿性肉芽增生的发生。
, http://www.100md.com
VPF在已知的微血管高通透性诱导物中作用最强，以旁分泌方式特异地作用于血管内皮细胞，通过增加内皮细胞内囊泡器(vescular-vacuolar organelle)的功能[5]发挥对毛细血管和小静脉的特异性通透作用，这种作用极利于大分子物质如纤维蛋白原的通过，随后发生的血浆外渗致细胞外基质增加，使得组织发生水肿。Gullino等发现多种肿瘤组织中有VPF的表达，并且肿瘤基质中的血浆蛋白浓度和水平高于相应的正常组织基质[2]。这又可部分地解释某些肿瘤水肿的原因，如Goldman等[6]推测脑脊膜相关性水肿可能是局部脑脊膜瘤细胞产生VPF的结果。许多引起异常积液的肿瘤细胞其产生VPF的能力显著增加[7]。与上述病理情况类似的是鼻息肉组织中的蛋白含量明显增高[8]，这亦是血管通透性增高的结果，由此我们推测VPF在鼻息肉的发病机理中可能有重要的作用。
, http://www.100md.com
图1 胎盘组织VFP的表达作为阳性对照。×400 图2 VPF在鼻息肉组织的上皮细胞，血管内皮及腺体细胞 的表A：血管内皮细胞呈阳性表达：B：腺体细胞呈阳性表达。×400 图3 flk-1在鼻息肉 的上皮细胞的表达。A：血管内皮的阳性表达。×400
参考文献
1 Senger DR, Galli SJ, Dvorak AM et al. Tumor cells secrete a vascular permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid.Science,1983,219:983-985.
2 Dvorak HF, Brown LF, Detmar M, et al. Vascular permeability factor/Vascular endothelial growth factor, microvascular hyperpermeability, and angiogenesis. Am J Pathol , 1995,146:1029-1039.
, http://www.100md.com
3 陈文文, 孙琴, 邓亚新.复发性鼻息肉形成的临床及病理学观察.中华耳鼻咽喉科杂志, 1997,32:15-17.
4 Kourembanas S, McQuillan LP, Leung GK et al. Nitric oxide regulates the expression of vasoconstrictors and growth factor by vascular endothelium under both normoxia and hypoxia. J Clin Invest,1993,92:99-106
5 Kondo S, Asano M, Suzuki H. Significance of vascular endothelial growth factor/vascular permeability factor for solid tumor growth, and its inhibition by the antibody. Biochem Biophys Res Commun, 1993, 194: 1234-1241.
, 百拇医药
6 Goldman CK, Bharara S, Palmer CA et al. Brain edema in meningiomas is associated with increased vascular endothelial growth factor expression. Neurosurg, 1997, 40 :1269-1277.
7 Christine A, Boocock D, Stephen Charnock-Jones et al. Expression of vascular endothelial growth factor and its receptors flt and KDR in ovarian carcinoma. J Nat Cancer Inst, 1995, 87: 506-516
8 Chandra RK et al. Immunopathology of nasal polyps. J Laryngol Otol,1974,88:1019-1025.
(收稿：1998-01-13 修回：1998-04-30), http://www.100md.com
单位：130031 长春 白求恩医科大学第三临床学院耳鼻咽喉-头颈外科
关键词：鼻息肉；；毛细血管通透性；；内皮；血管
中华耳鼻咽喉科杂志980514 【摘要】 目的 探讨血管通透性因子(vascular permeability factor,VPF)在鼻息肉组织中的表达及意义。方法 将9例鼻息肉标本及8例下鼻甲粘膜标本行VPF及其受体flk-1的免疫组化染色，光镜观查。结果 VPF在鼻息肉组织的血管内皮细胞和腺体细胞的表达明显高于下鼻甲组织(P<0.01,P<0.05),flk-1在血管内皮细胞的表达明显高于下鼻甲组织(P<0.01)。结论 VPF对鼻息肉发生过程中组织极度水肿的产生可能有非常重要的作用。
Expression and significance of vascular permeability factor in nasal polyps Yang Jihong, Kong Hong, Dong Zhen, et al.Third Clinical College, Bethune University of Medical Sciences, Changchun 130031
, 百拇医药
【Abstract】 Objective To study the expression and significance of vascular permeability factor(VPF) in nasal polyps. Methods Expression of VPF and its receptor flk-1 in nasal polyps from 9 patients and inferior turbinates from 8 patients with chronic rhinitis were prospectively studied with immunohistochemistry. Each tissue section was observed under optical microscope. Results The VPF positivity in vascular endothelium and in gland cell was significantly higher in nasal polyps than in inferior turbinates ( P< 0.01 and P<0.05, respectively). The flk-1 labeling index of vascular endothelium was significantly higher in nasal polyps than that in inferior turbinates (P<0.01). Conclusion VPF may play a key role in the formation of heavy edema of nasal polyps.
, 百拇医药
【Key Words】 Nasal polyps Capillary permeability Endothelium, vascular
八十年代初，Senger等[1](1983)在研究癌性腹水病理时发现，肿瘤细胞可分泌一种使血管通透性显著增高的物质，命名为血管通透性因子(vascular permeability factor, VPF),又因其可促使血管内皮细胞增殖，有新生血管生成作用，又称其为血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)。近年在研究VPF的血管通透效应时发现，该因子是已知的最强的血管通透因子，相当于组织胺的50 000倍，抗组胺药及多种炎性抑制剂均不能抑制其血管通透作用[1]。鉴于鼻息肉的病理特征，我们推测VPF对鼻息肉组织极度水肿的产生可能有重要的作用。但鼻粘膜在正常和炎性病理条件下VPF的表达诱生、调控因素等诸多方面尚不清楚。本组以免疫组化技术对鼻息肉组织内的VPF及其受体flk-1进行检测，报道如下。
, http://www.100md.com
材料和方法
9例鼻息肉组织标本来源于我科行鼻息肉手术切除的患者(男5例，女4例，年龄22～72岁)，8例下鼻甲粘膜来源于慢性鼻炎行下鼻甲切除的患者。新鲜胎盘组织作为阳性对照，来源于我院妇产科剖宫产2例产妇。兔抗VPF及flk-1多克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品。SP试剂盒包括生物素标记的兔IgG和链霉亲合素标记的辣根过氧化物酶(HRP)为美国Zymed公司产品。抗体均以磷酸盐缓冲液(PBS，pH 7.4)稀释，两种一抗稀释为1∶50, 二抗及HRP稀释为1∶100。
所有标本均用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，片厚5 μm。采用免疫组化SP法染色，微波炉枸橼酸盐缓冲液抗原修复，DAB显色，苏木精复染。
阳性判断标准：与胎盘组织的血管内皮阳性染色相比，相同或比其深者为阳性，比其弱或没有染色者为阴性。PBS替代一抗作阴性对照。
, http://www.100md.com
上皮细胞阳性百分比通过计数每张切片上所有视野(×400)中阳性视野所占比率。腺体及血管阳性计数为任选10个视野中阳性表达腺体数及血管数所占百分比。统计分析用成组设计两样本比较Wilcoxon t检验。
结果
每种抗体的阴性对照均为阴性。阳性对照的胎盘组织血管内皮细胞中可见明显棕色染色(图1)。两种抗体在鼻息肉组织和下鼻甲粘膜的上皮细胞、血管内皮细胞、腺体细胞和散在分布的浆细胞样细胞及一些不能确定性质的细胞胞浆内均可见棕色染色(图2, 3)。鼻息肉组织 的VPF表达在血管和腺体阳性数明显高于下鼻甲组，flk-1在血管内皮的阳性表达也明显高于下鼻甲组，P值分别小于0.01、0.05、0.01。①上皮细胞阳性表达均为连续阳性及连续阴性(即指上皮的阳性或阴性是连续分布的)；②上皮的VPF和flk-1表达在两种组织间无统计学差异。
讨论
, 百拇医药
本实验用下鼻甲粘膜作为对照，因为尽管下鼻甲是鼻腔，乃至整个呼吸道首当其冲受到外界各种因素作用的部位，包括炎性刺激，但下鼻甲却很少发生息肉。另外我们以胎盘作为阳性对照，基于其有丰富的新生血管，而VPF在胎盘上有广泛的、高水平的表达[2]。本实验结果显示鼻息肉及下鼻甲组织的上皮阳性数无统计学差异，因为下鼻甲粘膜取自慢性鼻炎患者，可能由于炎性刺激使VPF在上皮表达。鼻息肉组织血管内皮VPF及其受体flk-1的表达明显高于下鼻甲粘膜，并且根据VPF对血管的高通透作用，加之鼻息肉组织极度水肿的病理特点，似可推断VPF在鼻息肉的病理形成过程中发挥作用。另外，尤其引起我们注意的是VPF在鼻息肉腺体中的表达明显高于下鼻甲者，根据鼻息肉的病理特点也包括腺体的增殖，推测VPF除有血管内皮增殖作用，或许也能促使腺体细胞的增殖，从而从多方面发挥其促使鼻息肉形成的作用。但flk-1在两种组织腺体中的表达没有统计学差异，至于VPF通过何种途径作用于腺体还仍需进一步探讨。
Norlander等认为粘膜上皮损害是鼻息肉形成的最主要因素。临床上观察到鼻息肉术后的复发是通过水囊泡和水肿性肉芽增生两种方式从创面上长出的，尤其水肿性肉芽增生型的病例多发生在经过多次手术中鼻甲及其基部都已切除，骨创面暴露较大者[3]。结合VPF在创口愈合等组织修复过程有表达[4]，使我们推测鼻息肉切除术后创面的水肿不能简单地理解为鼻息肉复发，很可能是VPF参与组织修复过程的结果。另外在实践中发现，尽可能保留中鼻甲和筛窦内壁的骨质及粘膜可以减少水肿性肉芽增生的发生。
, http://www.100md.com
VPF在已知的微血管高通透性诱导物中作用最强，以旁分泌方式特异地作用于血管内皮细胞，通过增加内皮细胞内囊泡器(vescular-vacuolar organelle)的功能[5]发挥对毛细血管和小静脉的特异性通透作用，这种作用极利于大分子物质如纤维蛋白原的通过，随后发生的血浆外渗致细胞外基质增加，使得组织发生水肿。Gullino等发现多种肿瘤组织中有VPF的表达，并且肿瘤基质中的血浆蛋白浓度和水平高于相应的正常组织基质[2]。这又可部分地解释某些肿瘤水肿的原因，如Goldman等[6]推测脑脊膜相关性水肿可能是局部脑脊膜瘤细胞产生VPF的结果。许多引起异常积液的肿瘤细胞其产生VPF的能力显著增加[7]。与上述病理情况类似的是鼻息肉组织中的蛋白含量明显增高[8]，这亦是血管通透性增高的结果，由此我们推测VPF在鼻息肉的发病机理中可能有重要的作用。
, http://www.100md.com
图1 胎盘组织VFP的表达作为阳性对照。×400 图2 VPF在鼻息肉组织的上皮细胞，血管内皮及腺体细胞 的表A：血管内皮细胞呈阳性表达：B：腺体细胞呈阳性表达。×400 图3 flk-1在鼻息肉 的上皮细胞的表达。A：血管内皮的阳性表达。×400
参考文献
1 Senger DR, Galli SJ, Dvorak AM et al. Tumor cells secrete a vascular permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid.Science,1983,219:983-985.
2 Dvorak HF, Brown LF, Detmar M, et al. Vascular permeability factor/Vascular endothelial growth factor, microvascular hyperpermeability, and angiogenesis. Am J Pathol , 1995,146:1029-1039.
, http://www.100md.com
3 陈文文, 孙琴, 邓亚新.复发性鼻息肉形成的临床及病理学观察.中华耳鼻咽喉科杂志, 1997,32:15-17.
4 Kourembanas S, McQuillan LP, Leung GK et al. Nitric oxide regulates the expression of vasoconstrictors and growth factor by vascular endothelium under both normoxia and hypoxia. J Clin Invest,1993,92:99-106
5 Kondo S, Asano M, Suzuki H. Significance of vascular endothelial growth factor/vascular permeability factor for solid tumor growth, and its inhibition by the antibody. Biochem Biophys Res Commun, 1993, 194: 1234-1241.
, 百拇医药
6 Goldman CK, Bharara S, Palmer CA et al. Brain edema in meningiomas is associated with increased vascular endothelial growth factor expression. Neurosurg, 1997, 40 :1269-1277.
7 Christine A, Boocock D, Stephen Charnock-Jones et al. Expression of vascular endothelial growth factor and its receptors flt and KDR in ovarian carcinoma. J Nat Cancer Inst, 1995, 87: 506-516
8 Chandra RK et al. Immunopathology of nasal polyps. J Laryngol Otol,1974,88:1019-1025.
(收稿：1998-01-13 修回：1998-04-30), http://www.100md.com