水杨酸钠对豚鼠内耳形态学的影响
作者：朱瑾 刘兆华
单位：400038 重庆 第三军医大学附属西南医院耳鼻咽喉科
关键词：
中华耳鼻烟喉科杂志990530 生理学研究发现外毛细胞是水杨酸盐耳毒性作用的靶细胞，外毛细胞功能的改变在水杨酸盐耳毒性机理中起重要作用[1]。水杨酸盐是否引起耳蜗形态学改变存在争议，我们的研究观察了水杨酸盐耳毒性作用的形态学改变。
一、材料与方法
1. 实验动物：24只健康白色红目豚鼠，均为雄性，耳廓反射灵敏，体重250～350 g，将动物随机分为生理盐水对照组(生理盐水2 ml/kg体重腹膜内注射)和水杨酸钠组(水杨酸钠500 mg/kg体重腹膜内注射)各12只。水杨酸钠为中国五联生化厂生产(批号：950511)。
, 百拇医药
2. 听性脑干反应(auditory brainstem respone，ABR)测试：分别在用药前和注射药物后2 h以0.3%戊巴比妥钠30 mg/kg体重腹腔注射2组24只动物，麻醉后采用ZABR-200型脑干反应测听仪测定ABR阈值。
3. 表面处理(surface preparation)后毛细胞计数:随机抽取测定听阈后的2组动物各6只，迅速断头，取双侧听泡，用1%四氧化锇行离体耳蜗灌注固定、70%酒精脱水后，剥离基底膜并铺片，倒置相差显微镜下计数内、外毛细胞的缺失细胞数。
4. 透射电镜观察：2组动物各6只，取基底膜、血管纹和内淋巴囊(中间部)常规电镜制片。JEM-2000EX电镜观察。
5. 数据统计：数据以
±s表示，t检验进行统计学处理。
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二、结果
1. ABR测试：水杨酸钠组用药后2 h ABR阈值(单位dB SPL)为67.50±8.86，较用药前(43.75±7.44)和对照组(41.43±6.90)显著升高(t值分别为6.029和6.566，P值均<0.01)；对照组用药前、后ABR阈值差异无显著性(P>0.05)。
2.毛细胞计数：表面处理后内、外毛细胞计数，发现各组动物内、外毛细胞无明显缺失(<1%)，各组动物间差异无显著性(P>0.05)。
3. 透射电镜观察：水杨酸钠组外毛细胞静纤毛部分倒伏，膜周表面囊扩张，细胞肿胀，细胞器减少，胞浆呈海绵状，出现局灶性空泡化，部分核染色质边聚(图1)；血管纹中部分边缘细胞和中间细胞核膜内陷形成核内小管，细胞间隙水肿(图2)；内淋巴囊上皮细胞的改变主要表现为大量暗细胞出现核膜内折，亮、暗细胞胞浆内未见明显变化(图3)。
图1 水杨酸钠耳中毒豚鼠外毛细胞静纤毛部分倒伏(
)，胞浆稀疏、局灶性空泡化(↑)。 ×4 000 图2 水杨酸钠耳中毒豚鼠血管纹边缘细胞核内小管形成(↑)，细胞间隙水肿。 ×12 000 图3 水杨酸钠耳中毒豚鼠内淋巴囊中间部亮、暗细胞胞浆无明显改变，暗细胞核膜内折(↑) ×10 000
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三、讨论
水杨酸类药物耳毒性主要表现为轻、中度可逆性听力下降和耳鸣。其耳毒性的电生理研究发现耳蜗功能的改变与外毛细胞结构和功能的改变密切相关[1，2]。形态学研究中水杨酸盐是否影响内耳超微结构改变尚有争议，本实验结果显示水杨酸钠确可引起外毛细胞、血管纹病变，但尚不能确定外毛细胞和其静纤毛病变的机理。值得注意的是，水杨酸钠对内耳超微结构的影响主要表现为膜性结构的紊乱；表面处理后毛细胞计数未发现内、外毛细胞缺失。水杨酸钠对内耳组织细胞膜性结构的影响可能是可逆性的，这有助于解释水杨酸盐所致的可逆性耳毒性表现。
关于水杨酸盐致形态学改变文献报道不一致的原因，可能有以下面方面：①药物剂量的差异；②动物处死时间的差异。本实验严格按照药理实验“人和动物间按体表面积折算的等效剂量比率表”计算豚鼠水杨酸盐用量，并通过预实验证实现设定计量可引起豚鼠水杨酸盐耳毒性。另外，我们在预实验中还通过监测ABR阈值的变化证实了水杨酸盐耳毒性听力下降为可逆性，在用药后72 h恢复正常。由于全身用药后水杨酸盐快速进入耳蜗，外淋巴中水杨酸盐浓度在用药2 h达最高[3]。因此，观察时间非常关键。本实验在用药2 h测定听阈后处死动物，有助于显示水杨酸类药物对耳蜗形态学的影响。尽管这种影响相对微弱，但与对照组比较仍有明显的差异。
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参考文献
1 Stypulkowski PH. Mechanisms of salicylate ototoxicity. Hear Res,1990,46:113-145.
2 Ueda H, Yamamoto Y, Yanagita N. Effect of aspirin on transiently evoked otoacoustic emissions in guinea pigs. ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec, 1996,58:61-67.
3 Boettcher FA, Bancroft BR, Salvi RJ. Concentrations of salicylate in serum and perilymph of the chinchilla. Arch Otolaryngol Head Neck Surg, 1990,116:681-684.
(收稿：1998-11-15 修回：1999-05-09), 百拇医药
单位：400038 重庆 第三军医大学附属西南医院耳鼻咽喉科
关键词：
中华耳鼻烟喉科杂志990530 生理学研究发现外毛细胞是水杨酸盐耳毒性作用的靶细胞，外毛细胞功能的改变在水杨酸盐耳毒性机理中起重要作用[1]。水杨酸盐是否引起耳蜗形态学改变存在争议，我们的研究观察了水杨酸盐耳毒性作用的形态学改变。
一、材料与方法
1. 实验动物：24只健康白色红目豚鼠，均为雄性，耳廓反射灵敏，体重250～350 g，将动物随机分为生理盐水对照组(生理盐水2 ml/kg体重腹膜内注射)和水杨酸钠组(水杨酸钠500 mg/kg体重腹膜内注射)各12只。水杨酸钠为中国五联生化厂生产(批号：950511)。
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2. 听性脑干反应(auditory brainstem respone，ABR)测试：分别在用药前和注射药物后2 h以0.3%戊巴比妥钠30 mg/kg体重腹腔注射2组24只动物，麻醉后采用ZABR-200型脑干反应测听仪测定ABR阈值。
3. 表面处理(surface preparation)后毛细胞计数:随机抽取测定听阈后的2组动物各6只，迅速断头，取双侧听泡，用1%四氧化锇行离体耳蜗灌注固定、70%酒精脱水后，剥离基底膜并铺片，倒置相差显微镜下计数内、外毛细胞的缺失细胞数。
4. 透射电镜观察：2组动物各6只，取基底膜、血管纹和内淋巴囊(中间部)常规电镜制片。JEM-2000EX电镜观察。
5. 数据统计：数据以
±s表示，t检验进行统计学处理。, 百拇医药
二、结果
1. ABR测试：水杨酸钠组用药后2 h ABR阈值(单位dB SPL)为67.50±8.86，较用药前(43.75±7.44)和对照组(41.43±6.90)显著升高(t值分别为6.029和6.566，P值均<0.01)；对照组用药前、后ABR阈值差异无显著性(P>0.05)。
2.毛细胞计数：表面处理后内、外毛细胞计数，发现各组动物内、外毛细胞无明显缺失(<1%)，各组动物间差异无显著性(P>0.05)。
3. 透射电镜观察：水杨酸钠组外毛细胞静纤毛部分倒伏，膜周表面囊扩张，细胞肿胀，细胞器减少，胞浆呈海绵状，出现局灶性空泡化，部分核染色质边聚(图1)；血管纹中部分边缘细胞和中间细胞核膜内陷形成核内小管，细胞间隙水肿(图2)；内淋巴囊上皮细胞的改变主要表现为大量暗细胞出现核膜内折，亮、暗细胞胞浆内未见明显变化(图3)。
图1 水杨酸钠耳中毒豚鼠外毛细胞静纤毛部分倒伏()，胞浆稀疏、局灶性空泡化(↑)。 ×4 000 图2 水杨酸钠耳中毒豚鼠血管纹边缘细胞核内小管形成(↑)，细胞间隙水肿。 ×12 000 图3 水杨酸钠耳中毒豚鼠内淋巴囊中间部亮、暗细胞胞浆无明显改变，暗细胞核膜内折(↑) ×10 000, 百拇医药
三、讨论
水杨酸类药物耳毒性主要表现为轻、中度可逆性听力下降和耳鸣。其耳毒性的电生理研究发现耳蜗功能的改变与外毛细胞结构和功能的改变密切相关[1，2]。形态学研究中水杨酸盐是否影响内耳超微结构改变尚有争议，本实验结果显示水杨酸钠确可引起外毛细胞、血管纹病变，但尚不能确定外毛细胞和其静纤毛病变的机理。值得注意的是，水杨酸钠对内耳超微结构的影响主要表现为膜性结构的紊乱；表面处理后毛细胞计数未发现内、外毛细胞缺失。水杨酸钠对内耳组织细胞膜性结构的影响可能是可逆性的，这有助于解释水杨酸盐所致的可逆性耳毒性表现。
关于水杨酸盐致形态学改变文献报道不一致的原因，可能有以下面方面：①药物剂量的差异；②动物处死时间的差异。本实验严格按照药理实验“人和动物间按体表面积折算的等效剂量比率表”计算豚鼠水杨酸盐用量，并通过预实验证实现设定计量可引起豚鼠水杨酸盐耳毒性。另外，我们在预实验中还通过监测ABR阈值的变化证实了水杨酸盐耳毒性听力下降为可逆性，在用药后72 h恢复正常。由于全身用药后水杨酸盐快速进入耳蜗，外淋巴中水杨酸盐浓度在用药2 h达最高[3]。因此，观察时间非常关键。本实验在用药2 h测定听阈后处死动物，有助于显示水杨酸类药物对耳蜗形态学的影响。尽管这种影响相对微弱，但与对照组比较仍有明显的差异。
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参考文献
1 Stypulkowski PH. Mechanisms of salicylate ototoxicity. Hear Res,1990,46:113-145.
2 Ueda H, Yamamoto Y, Yanagita N. Effect of aspirin on transiently evoked otoacoustic emissions in guinea pigs. ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec, 1996,58:61-67.
3 Boettcher FA, Bancroft BR, Salvi RJ. Concentrations of salicylate in serum and perilymph of the chinchilla. Arch Otolaryngol Head Neck Surg, 1990,116:681-684.
(收稿：1998-11-15 修回：1999-05-09), 百拇医药