EB病毒感染P53及P16表达与鼻腔咽淋巴环非霍奇金淋巴瘤的关系
作者：吴丽莉 顾广玉 马大烈 周水淼
单位：200433上海 第二军医大学长海医院病理科 吴丽莉 顾广玉 马大烈耳鼻咽喉科 周水淼
关键词：淋巴瘤；非霍奇金氏；基因；抑制；肿瘤；原位杂交；；疱疹病毒4型；人
中华耳鼻咽喉科杂志990613 【摘要】 目的 观察EB病毒(Epstin-Barr virus ，EBV)、抑癌基因P53、P16在鼻、鼻咽和扁桃体非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma ，NHL)中的表达，并分析其相互间关系。方法 用原位分子杂交检测36例病变组织的EBV-DNA、P16mRNA，用免疫组化技术检测LMP1、P53及P16蛋白，5例原位杂交检测为EBV阴性的病例用原位PCR检测EBV-DNA。结果 ①23例(63.9%)检出EBV-DNA，11例(30.6%)检出 P16 mRNA；② 10例(27.8%) LMP1阳性，7例(19.4%)P53蛋白阳性，8例(22.2%)P16蛋白阳性；③T-NHL(16/19例)明显高于B-NHL(6/17例)的EBV-DNA阳性表达。结论 鼻、鼻咽和扁桃体NHL尤其是T-NHL有较高比例的EBV感染，但未发现EBV感染与P53及P16表达之间有明显相关性。
, 百拇医药
EB virus infection and expression of P53 and P16 in non-Hodgkin's lymphoma
WU Lili,GU Guangyu,MA Dalie, et al. Department of Pathology,Changhai Hospital,Second Military Medical University, Shanghai 200433
【Abstract】 Objective To observe the presence of Epstin-Barr virus(EBV) and expression of P53 and P16 in the non-Hodgkin's lymphoma(NHL) occurring in the nasal cavity and pharyngeal Waldeyer's ring. Methods In situ hybridization was used to detect EBV-DNA and P16-mRNA and immunohistochemical staining was used to examine the expression of LMP1,P53 and P16 in the 36 cases. Five cases whose EBV-DNA were negative at first assay by hybridization was re-detected for EBV-DNA by PCR. Results Positive expression rates of EBV-DNA, LMP1, P16mRNA, P53 and P16 were 63.9%, 27.8%, 30.6%, 19.4% and 22.2%. P53 and P16 expressions were not significantly different between T cell NHL and B cell NHL, nor were them significantly different between EBV positive and negative cases. Conclusion A higher percentage of EBV infection was detected in the nasal cavity and pharyngeal Waldeyer's ring in NHL. EBV infection was not significantly associated with P53 and P16 expresions in NHL.
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【Key words】 Lymphoma, non-Hodgkin's Genes, suppressor, tumor In situ hybridization Herpesvirus 4, human
鼻腔及咽淋巴环是头颈部结外非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin's lymphoma, NHL)最常见的部位，近年来研究表明，多种类型的恶性淋巴瘤中，存在着不同程度的EB病毒(Epstin-Barr virus ，EBV)感染，尤其在中线面部有较高的感染率，但EBV 在肿瘤发生中所起的作用仍不十分清楚。本研究收集鼻、鼻咽和扁桃体部位NHL 36例，从蛋白水平及分子水平对EBV 及P53、P16进行检测，旨在了解EBV的感染情况以及与抑癌基因之间的关系。
材料与方法
36例NHL包括T细胞型NHL19例(鼻腔15例，鼻咽3例，扁桃体1例)，B细胞型NHL 17例(鼻腔3例，鼻咽8例，扁桃体6例)，材料选自长海医院病理科1990～1997年活检石蜡标本。
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1.免疫组化检测EBV潜伏膜蛋白(相对分子质量60 000 latent membrane protein, LMP1)、P53和P16蛋白： 36例均作 4 μm连续切片，用SP法进行免疫组化染色。所用抗体： LMP1系丹麦DAKO公司产品，抗P53单克隆抗体及抗P16多克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品。用EBV阳性鼻咽癌作阳性对照，用PBS代替一抗或用不加探针的杂交缓冲液代替探针作阴性对照。
2.原位分子杂交检测 EBV-DNA及P16mRNA：① EBV探针的制备及标记：合成引物一对，序列为5’-ACTTTAGAGGCGAATGGGCG-3’ 及5’-TGGCTGCTGTCTGGCTTACG-3’，用含有EBV片段的质粒DNA为模板，反应混合物中加入Dig-11-dUTP，PCR法合成探针并加以纯化；②P16探针的制备及标记：含P16片断的质粒由本室构建，由0.48 kb组成，经质粒提取及纯化、酶切鉴定及片断纯化后，用随机引物法标记P16基因探针(地高辛标记及检测试剂盒为德国宝灵曼公司产品)；③36例NHL均作原位分子杂交检测，方法及步骤按德国宝灵曼公司地高辛标记及检测试剂盒说明书进行。
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3.原位PCR检测：选择5例原位分子杂交阴性的NHL切片，用原位PCR直接法检测EBV-DNA，显色方法同原位分子杂交。
结果
一、EBV抗原及基因组的表达以及与NHL表型的关系
1. 用免疫组化方法检测EBV潜伏膜蛋白抗原(LMP1)：10例(27.8%)阳性表达。阳性物质位于肿瘤细胞胞浆内，呈棕黄色颗粒状(图1)。其中3例仅见少数散在细胞为阳性，用原位分子杂交检测上述3例，2例为阳性，1例为阴性。
图1 肿瘤细胞胞浆LMP1阳性表达。SP ×400
2. 用原位分子杂交检测EBV-DNA，22例(61.1%)阳性表达，阳性物质呈紫蓝色颗粒状，分布于胞核(图2)。
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图2 肿瘤细胞胞核EBV-DNA阳性表达。原位杂交 ×200
3. EBV基因组的表达及NHL表型的关系：16例T-NHL及6例B-NHL组织EBV-DNA阳性。经统计学检验(两个样本率的χ2检验)，T-NHL与B-NHL的EBV感染率差异有显著意义(χ2=6.21，0.01
4. LMP1免疫组化结果与EBV-DNA原位杂交结果的比较：免疫组化检测EBV LMP1阳性者10例中原位杂交阳性9例，阴性1例；免疫组化阴性者，原位杂交阳性13例，阴性13例。经统计学检验(配对计数资料的χ2检验),免疫组化检测LMP1与原位分子杂交检测EBV-DNA结果有显著相关。
二、P53蛋白的表达及其与NHL免疫表型的关系
用免疫组化方法检测P53，7例(19.4%)阳性表达，阳性物质位于胞核(图3)， 其中T-NHL阳性表达4例，B-NHL阳性表达3例。经统计学检验(两个样本率的χ2检验)，P53 蛋白在T-NHL与B-NHL中表达相差无显著意义(P>0.05)。
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图3 肿瘤细胞胞核P53蛋白阳性表达。SP ×400
三、P16 mRNA及其蛋白表达与NHL免疫表型的关系
用免疫组化方法检测P16，8例(22.2%)阳性表达，阳性物质位于胞浆(图4)。用原位杂交检测P16 mRNA,11例(30.6%)阳性表达，阳性物质主要位于细胞浆，少数位于细胞核(图5)。经统计学检验，T、B两组NHL组织P16 mRNA及P16蛋白表达差异无显著意义(P>0.05)。
图4 肿瘤细胞胞浆P16蛋白阳性表达。SP ×200
图5 肿瘤细胞胞浆及胞核P16mRMA阳性表达。原位杂交 ×200
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四、EBV-DNA、P53 蛋白及P16mRNA表达之间的关系
EBV-DNA阳性者22例中，P53蛋白表达5例(22.7%)，P16mRMA表达7例(31.8%)；EBV-DNA阴性者14例中，P53蛋白阴性表达2例(14.3%)，P16 mRMA阴性表达4例(28.6%)。经统计学检验(两个样本率的χ2检验),EBV-DNA 表达阳性组及阴性组之间P53蛋白或P16mRNA的表达相差无显著意义(P>0.05)。
五、原位PCR检测EBV-DNA
5例原位分子杂交EBV-DNA阴性的NHL切片，经原位PCR检测，结果1例阳性表达，阳性物质主要位于细胞核 (图6)。
图6 肿瘤细胞胞核EBV-DNA阳性表达。原位PCR ×400
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讨论
一、EBV在NHL中的表达
文献报道EBV感染除与传染性单核细胞增多症、非洲Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌和霍奇金淋巴瘤密切相关外，在各种类型NHL中也存在一定的感染率，多数检测结果显示：T-NHL EBV阳性检出率(61%左右)高于B-NHL(24%)；结外T-NHL的 EBV阳性检出率(60%～80%)高于淋巴结T-NHL(35%～50%)，鼻腔NHL的EBV阳性检出率(80%～83%)高于咽淋巴环NHL(50%)[1]。本实验结果也证明鼻、鼻咽和扁桃体部位NHL中EBV感染率较高(61.1%)，且T-NHL的EBV感染率(16/19例)明显高于B-NHL(6/17例)。LMP1抗体的检出率因受抗体来源、病理类型及固定方法等影响，文献报道有很大差异。本实验经统计学检测，免疫组化结果与原位分子杂交结果具有一致性，但用原位分子杂交或原位PCR检测EBV更具敏感性。
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关于EBV在NHL发生过程中所起的作用，存在着不同的认识，有学者认为EBV感染存在于肿瘤产生前，对肿瘤发生可能起着重要的启动作用，也有人认为EBV只起到一种促进肿瘤生长作用或仅是一种伴随现象。鉴于EBV表达在不同类型NHL中的多相性，我们同意这样的观点：即EBV在不同类型NHL中所起的作用是不同的[2]。
二、P53及P16在NHL中的表达
P53蛋白的过度表达间接反映了P53基因的点突变。文献报道在各种类型NHL组织中可检测到P53蛋白，阳性率在25%～50%左右[3，4]，P53蛋白的表达还与NHL组织学类型及预后有关，在低分化的NHL中P53阳性检出率高，P53蛋白的高表达在低分化B-NHL常是预后不良的标志[4]。本实验36例NHL中7例(19.4%)有P53蛋白阳性表达，且T、B细胞性NHL均有表达，P53阳性物质多位于大而异型的肿瘤细胞核上。
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P16被普遍认为参与细胞周期的调控，并在肿瘤的发生和发展过程中起重要作用。Hangaishi等[5]用分子生物学方法对230例恶性淋巴瘤进行检测，发现45例发生P16纯合性缺失。Uchida等[6]检测42例B-NHL，发现有3例(7.1%)出现纯合性缺失。本实验用免疫组化及原位分子杂交方法分别检测P16蛋白及P16mRNA，阳性率分别为22.2%(8例)及30.5%(11例)。
三、NHL中EBV表达与P53、P16基因改变之间的关系
研究发现EBV核抗原(EBNA5)和P53同时表达在同一细胞中，EBNA5有可能与P53结合，导致细胞永生化[7]。本实验未发现EBV感染与P16表达之间有明显相关性，EBV阳性组P53蛋白检出率虽较EBV阴性组高，但统计学上相差无显著意义。由于本组研究样本较小，有待于扩大样本后进一步研究。
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参考文献
1 刘卫平, Gorp JV ,李甘地.中线恶网中的EB病毒感染.中华肿瘤杂志, 1997,19: 49-52.
2 Niedobitek G.Patterns of Epstein-Barr virus infection in non-Hodgkin′s lymphomas. J Pathol,1995,175:259-261.
3 Piris M ,Villuendas R,Martinez JC.p53 expression in non-Hodgkin′s lymphomas: a marker of P53 inactivation? Leuk Lymphoma, 1995,17:35-42.
4 Maestro R,Gloghini A,Doglioni C.MDM2 overexpression does not account for stabilization of wild-type p53 protein in non-Hodgkin′s lymphomas .Blood,1995,85: 3239-3246.
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5 Hangaishi A ,Ogama S, Imamura N, et al.Inactivation of multiple tumor-suppressor genes involved in negative regulation of the cell cycle ,MTS1/p16INK4A/CDKN2, MTS2/p15INK4B,p53 and Rb genes in primary lymphoid malignancies.Blood,1996, 87:4949-4958.
6 Uchida T,Watanabe T,Kinoshita T, et al.Mutational analysis of the CDKN2 (MTS1/p16ink4A) gene in primary B-cell lymphomas. Blood, 1995,86:2724-2731.
7 Brousset P,Meggetto F,Chittal S, et al.Assessment of the methods for the detection of Epstein-Barr virus nucleic acids and related gene products in Hodgkin′s disease . Lab Invest,1993,69:483-490.
(收稿:1999-02-16 修回:1999-09-10), 百拇医药
单位：200433上海 第二军医大学长海医院病理科 吴丽莉 顾广玉 马大烈耳鼻咽喉科 周水淼
关键词：淋巴瘤；非霍奇金氏；基因；抑制；肿瘤；原位杂交；；疱疹病毒4型；人
中华耳鼻咽喉科杂志990613 【摘要】 目的 观察EB病毒(Epstin-Barr virus ，EBV)、抑癌基因P53、P16在鼻、鼻咽和扁桃体非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma ，NHL)中的表达，并分析其相互间关系。方法 用原位分子杂交检测36例病变组织的EBV-DNA、P16mRNA，用免疫组化技术检测LMP1、P53及P16蛋白，5例原位杂交检测为EBV阴性的病例用原位PCR检测EBV-DNA。结果 ①23例(63.9%)检出EBV-DNA，11例(30.6%)检出 P16 mRNA；② 10例(27.8%) LMP1阳性，7例(19.4%)P53蛋白阳性，8例(22.2%)P16蛋白阳性；③T-NHL(16/19例)明显高于B-NHL(6/17例)的EBV-DNA阳性表达。结论 鼻、鼻咽和扁桃体NHL尤其是T-NHL有较高比例的EBV感染，但未发现EBV感染与P53及P16表达之间有明显相关性。
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EB virus infection and expression of P53 and P16 in non-Hodgkin's lymphoma
WU Lili,GU Guangyu,MA Dalie, et al. Department of Pathology,Changhai Hospital,Second Military Medical University, Shanghai 200433
【Abstract】 Objective To observe the presence of Epstin-Barr virus(EBV) and expression of P53 and P16 in the non-Hodgkin's lymphoma(NHL) occurring in the nasal cavity and pharyngeal Waldeyer's ring. Methods In situ hybridization was used to detect EBV-DNA and P16-mRNA and immunohistochemical staining was used to examine the expression of LMP1,P53 and P16 in the 36 cases. Five cases whose EBV-DNA were negative at first assay by hybridization was re-detected for EBV-DNA by PCR. Results Positive expression rates of EBV-DNA, LMP1, P16mRNA, P53 and P16 were 63.9%, 27.8%, 30.6%, 19.4% and 22.2%. P53 and P16 expressions were not significantly different between T cell NHL and B cell NHL, nor were them significantly different between EBV positive and negative cases. Conclusion A higher percentage of EBV infection was detected in the nasal cavity and pharyngeal Waldeyer's ring in NHL. EBV infection was not significantly associated with P53 and P16 expresions in NHL.
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【Key words】 Lymphoma, non-Hodgkin's Genes, suppressor, tumor In situ hybridization Herpesvirus 4, human
鼻腔及咽淋巴环是头颈部结外非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin's lymphoma, NHL)最常见的部位，近年来研究表明，多种类型的恶性淋巴瘤中，存在着不同程度的EB病毒(Epstin-Barr virus ，EBV)感染，尤其在中线面部有较高的感染率，但EBV 在肿瘤发生中所起的作用仍不十分清楚。本研究收集鼻、鼻咽和扁桃体部位NHL 36例，从蛋白水平及分子水平对EBV 及P53、P16进行检测，旨在了解EBV的感染情况以及与抑癌基因之间的关系。
材料与方法
36例NHL包括T细胞型NHL19例(鼻腔15例，鼻咽3例，扁桃体1例)，B细胞型NHL 17例(鼻腔3例，鼻咽8例，扁桃体6例)，材料选自长海医院病理科1990～1997年活检石蜡标本。
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1.免疫组化检测EBV潜伏膜蛋白(相对分子质量60 000 latent membrane protein, LMP1)、P53和P16蛋白： 36例均作 4 μm连续切片，用SP法进行免疫组化染色。所用抗体： LMP1系丹麦DAKO公司产品，抗P53单克隆抗体及抗P16多克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品。用EBV阳性鼻咽癌作阳性对照，用PBS代替一抗或用不加探针的杂交缓冲液代替探针作阴性对照。
2.原位分子杂交检测 EBV-DNA及P16mRNA：① EBV探针的制备及标记：合成引物一对，序列为5’-ACTTTAGAGGCGAATGGGCG-3’ 及5’-TGGCTGCTGTCTGGCTTACG-3’，用含有EBV片段的质粒DNA为模板，反应混合物中加入Dig-11-dUTP，PCR法合成探针并加以纯化；②P16探针的制备及标记：含P16片断的质粒由本室构建，由0.48 kb组成，经质粒提取及纯化、酶切鉴定及片断纯化后，用随机引物法标记P16基因探针(地高辛标记及检测试剂盒为德国宝灵曼公司产品)；③36例NHL均作原位分子杂交检测，方法及步骤按德国宝灵曼公司地高辛标记及检测试剂盒说明书进行。
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3.原位PCR检测：选择5例原位分子杂交阴性的NHL切片，用原位PCR直接法检测EBV-DNA，显色方法同原位分子杂交。
结果
一、EBV抗原及基因组的表达以及与NHL表型的关系
1. 用免疫组化方法检测EBV潜伏膜蛋白抗原(LMP1)：10例(27.8%)阳性表达。阳性物质位于肿瘤细胞胞浆内，呈棕黄色颗粒状(图1)。其中3例仅见少数散在细胞为阳性，用原位分子杂交检测上述3例，2例为阳性，1例为阴性。
图1 肿瘤细胞胞浆LMP1阳性表达。SP ×400
2. 用原位分子杂交检测EBV-DNA，22例(61.1%)阳性表达，阳性物质呈紫蓝色颗粒状，分布于胞核(图2)。
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图2 肿瘤细胞胞核EBV-DNA阳性表达。原位杂交 ×200
3. EBV基因组的表达及NHL表型的关系：16例T-NHL及6例B-NHL组织EBV-DNA阳性。经统计学检验(两个样本率的χ2检验)，T-NHL与B-NHL的EBV感染率差异有显著意义(χ2=6.21，0.01
4. LMP1免疫组化结果与EBV-DNA原位杂交结果的比较：免疫组化检测EBV LMP1阳性者10例中原位杂交阳性9例，阴性1例；免疫组化阴性者，原位杂交阳性13例，阴性13例。经统计学检验(配对计数资料的χ2检验),免疫组化检测LMP1与原位分子杂交检测EBV-DNA结果有显著相关。
二、P53蛋白的表达及其与NHL免疫表型的关系
用免疫组化方法检测P53，7例(19.4%)阳性表达，阳性物质位于胞核(图3)， 其中T-NHL阳性表达4例，B-NHL阳性表达3例。经统计学检验(两个样本率的χ2检验)，P53 蛋白在T-NHL与B-NHL中表达相差无显著意义(P>0.05)。
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图3 肿瘤细胞胞核P53蛋白阳性表达。SP ×400
三、P16 mRNA及其蛋白表达与NHL免疫表型的关系
用免疫组化方法检测P16，8例(22.2%)阳性表达，阳性物质位于胞浆(图4)。用原位杂交检测P16 mRNA,11例(30.6%)阳性表达，阳性物质主要位于细胞浆，少数位于细胞核(图5)。经统计学检验，T、B两组NHL组织P16 mRNA及P16蛋白表达差异无显著意义(P>0.05)。
图4 肿瘤细胞胞浆P16蛋白阳性表达。SP ×200
图5 肿瘤细胞胞浆及胞核P16mRMA阳性表达。原位杂交 ×200
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四、EBV-DNA、P53 蛋白及P16mRNA表达之间的关系
EBV-DNA阳性者22例中，P53蛋白表达5例(22.7%)，P16mRMA表达7例(31.8%)；EBV-DNA阴性者14例中，P53蛋白阴性表达2例(14.3%)，P16 mRMA阴性表达4例(28.6%)。经统计学检验(两个样本率的χ2检验),EBV-DNA 表达阳性组及阴性组之间P53蛋白或P16mRNA的表达相差无显著意义(P>0.05)。
五、原位PCR检测EBV-DNA
5例原位分子杂交EBV-DNA阴性的NHL切片，经原位PCR检测，结果1例阳性表达，阳性物质主要位于细胞核 (图6)。
图6 肿瘤细胞胞核EBV-DNA阳性表达。原位PCR ×400
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讨论
一、EBV在NHL中的表达
文献报道EBV感染除与传染性单核细胞增多症、非洲Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌和霍奇金淋巴瘤密切相关外，在各种类型NHL中也存在一定的感染率，多数检测结果显示：T-NHL EBV阳性检出率(61%左右)高于B-NHL(24%)；结外T-NHL的 EBV阳性检出率(60%～80%)高于淋巴结T-NHL(35%～50%)，鼻腔NHL的EBV阳性检出率(80%～83%)高于咽淋巴环NHL(50%)[1]。本实验结果也证明鼻、鼻咽和扁桃体部位NHL中EBV感染率较高(61.1%)，且T-NHL的EBV感染率(16/19例)明显高于B-NHL(6/17例)。LMP1抗体的检出率因受抗体来源、病理类型及固定方法等影响，文献报道有很大差异。本实验经统计学检测，免疫组化结果与原位分子杂交结果具有一致性，但用原位分子杂交或原位PCR检测EBV更具敏感性。
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关于EBV在NHL发生过程中所起的作用，存在着不同的认识，有学者认为EBV感染存在于肿瘤产生前，对肿瘤发生可能起着重要的启动作用，也有人认为EBV只起到一种促进肿瘤生长作用或仅是一种伴随现象。鉴于EBV表达在不同类型NHL中的多相性，我们同意这样的观点：即EBV在不同类型NHL中所起的作用是不同的[2]。
二、P53及P16在NHL中的表达
P53蛋白的过度表达间接反映了P53基因的点突变。文献报道在各种类型NHL组织中可检测到P53蛋白，阳性率在25%～50%左右[3，4]，P53蛋白的表达还与NHL组织学类型及预后有关，在低分化的NHL中P53阳性检出率高，P53蛋白的高表达在低分化B-NHL常是预后不良的标志[4]。本实验36例NHL中7例(19.4%)有P53蛋白阳性表达，且T、B细胞性NHL均有表达，P53阳性物质多位于大而异型的肿瘤细胞核上。
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P16被普遍认为参与细胞周期的调控，并在肿瘤的发生和发展过程中起重要作用。Hangaishi等[5]用分子生物学方法对230例恶性淋巴瘤进行检测，发现45例发生P16纯合性缺失。Uchida等[6]检测42例B-NHL，发现有3例(7.1%)出现纯合性缺失。本实验用免疫组化及原位分子杂交方法分别检测P16蛋白及P16mRNA，阳性率分别为22.2%(8例)及30.5%(11例)。
三、NHL中EBV表达与P53、P16基因改变之间的关系
研究发现EBV核抗原(EBNA5)和P53同时表达在同一细胞中，EBNA5有可能与P53结合，导致细胞永生化[7]。本实验未发现EBV感染与P16表达之间有明显相关性，EBV阳性组P53蛋白检出率虽较EBV阴性组高，但统计学上相差无显著意义。由于本组研究样本较小，有待于扩大样本后进一步研究。
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参考文献
1 刘卫平, Gorp JV ,李甘地.中线恶网中的EB病毒感染.中华肿瘤杂志, 1997,19: 49-52.
2 Niedobitek G.Patterns of Epstein-Barr virus infection in non-Hodgkin′s lymphomas. J Pathol,1995,175:259-261.
3 Piris M ,Villuendas R,Martinez JC.p53 expression in non-Hodgkin′s lymphomas: a marker of P53 inactivation? Leuk Lymphoma, 1995,17:35-42.
4 Maestro R,Gloghini A,Doglioni C.MDM2 overexpression does not account for stabilization of wild-type p53 protein in non-Hodgkin′s lymphomas .Blood,1995,85: 3239-3246.
, http://www.100md.com
5 Hangaishi A ,Ogama S, Imamura N, et al.Inactivation of multiple tumor-suppressor genes involved in negative regulation of the cell cycle ,MTS1/p16INK4A/CDKN2, MTS2/p15INK4B,p53 and Rb genes in primary lymphoid malignancies.Blood,1996, 87:4949-4958.
6 Uchida T,Watanabe T,Kinoshita T, et al.Mutational analysis of the CDKN2 (MTS1/p16ink4A) gene in primary B-cell lymphomas. Blood, 1995,86:2724-2731.
7 Brousset P,Meggetto F,Chittal S, et al.Assessment of the methods for the detection of Epstein-Barr virus nucleic acids and related gene products in Hodgkin′s disease . Lab Invest,1993,69:483-490.
(收稿:1999-02-16 修回:1999-09-10), 百拇医药